微载体细胞培养工艺技术平台的建立4

微载体培养技术平台建立技术管理2目标发酵平台质检平台项目目标及技术支持产品目标及技术平台3内容介绍发酵技术平台的构成要素1平台构建流程2发酵培养工艺3发酵罐工艺设计4细胞质量控制5发酵培养方法设计6发酵培养的应用74发酵技术平台的构成要素发酵培养的优点建立技术平台的意义平台构成要素5发酵培养的优点总体兼备了悬浮培养和单层培养的优点表面积扩大了表面积，提高细胞密度培养条件培养条件稳定、传质和传氧较好、培养均一，产品均一，易于线性放大操作操作简便，便于采样和监控放大易于扩大培养规模、降低生产成本，适合疫苗的工业化、自动化生产污染风险封闭的管道系统降低了受污染的风险，同时也减少了人力、物力以及财力6建立技术平台的目的基础研究建立工艺中试生产放大工艺工艺优化完善工艺工业化生产工艺成熟7发酵技术平台的构成要素厂房及试验室发酵设备及辅助设施（发酵系统）适宜细胞基质微载体的类型适宜的培养方法培养基及添加剂培养参数的调控相关的检测技术人员素质及技术标准操作程序资金投入8平台构建流程确定项目目标（需求）可行性分析（商业论证、风险评估）系统设计（沟通）制定计划(创造条件)方案实施（控制）系统验证（确认）系统评估验收（标准）9发酵培养工艺研究内容工艺放大方式10研究内容符合药典规定符合注册标准建立种子库建立工艺路线确定生产规程建立质量标准建立质量检验方法建立标准操作程序11工艺放大方式工艺路线不同系统配置不同技术管理不同同级放大逐级放大12工艺技术反应器操作技术细胞传代技术微载体处理技术细胞消化技术细胞计数技术系统维护保养技术13放大培养工艺路线搅拌瓶14L生物反应器75L生物反应器14病毒培养条件研究不同的维持液不同培养温度比较不同pH比较不同MOI比较不同病毒接种方法不同病毒接种时间不同的收获时间不同的收获方法收获液稳定性研究15发酵系统的工艺设计发酵系统的结构发酵培养的参数控制16发酵系统的结构罐体灭菌系统通气(汽)系统补料系统搅拌系统温控系统控制系统液位控制收获系统称重系统清洁泵17发酵系统结构控制系统供应系统服务单元培养系统（罐体）排放系统取样手动保温辅助系统18工业发酵系统气气体过滤器冷凝器气体过滤器温控系统轴封取样收获纯蒸汽进料pHOT电极灌流管19发酵培养控制参数温度PH溶氧搅拌葡萄糖、渗透压其他辅助参数：液位、罐压、等↑:纯蒸汽、电加热等↓:冷却水↑:NaHCO3↓:CO2↑:氧气空气↓:氮气搅拌速度：搅拌方式20控制系统1.温度控制2.pH控制3.溶氧控制4.转速控制5.压力控制6.重量控制7.液面控制8.培养状态显示9.参数设置和存储打印信息21细胞质量控制细胞来源清楚建库规范复苏操作正确细胞消化技术可靠细胞培养条件标准化细胞检查技术稳定参数调整合理培养基适宜22培养方法设计培养方法分类批培养（batchculture）加量批培养（feedingculture)罐流培养(perfusionculture)再循环培养(recirculationculture)换液培养(semi-continuouscultue)设计依据1.培养目的2培养规模3.发酵培养量4.细胞浓度5.病毒培养时间6.原材料消耗7.操作简便23应用控制细胞培养的流程过程控制标准培养参数调节细胞繁殖特性病毒繁殖特性各种因素的相对平衡24Vero细胞生长曲线50L发酵罐细胞生长曲线00.511.522.53012345培养天数（天）细胞数（x10E6）FC50-001FC50-002FC50-003FC50-0043g/l微载体细胞生长曲线6g/l微载体细胞生长曲线细胞生长曲线0200400600800012345678910111213时间(天）6g/l微载体细胞生长曲线细胞数（万/ml）001批细胞002批细胞003批细胞004批细胞10L发酵罐细胞生长趋势图050100150200250300012345培养时间（d）细胞数（万/ml）E0608-001E0608-002E0609-003E0610-004E0611-005E0611-00625BHK-21细胞第1天第2天第3天第4天26Vero细胞培养倍增数3g/ml微载体接种密度（104cells/cm2）40第6天细胞密度（104cells/cm2）420细胞扩增倍数3.396g/ml微载体接种密度（104cells/cm2）60第6天细胞密度（104cells/cm2）750细胞扩增倍数3.6427乙脑病毒引起的细胞病变(+)(++)(++++)(+++)28狂犬病病毒引起的细胞病变4d6d10d8d16d14d12d29工业化生产工艺设计1．设计规模及产品方案2．生产工艺流程及工艺描述3.物料平衡与物料流程图4.生产组织及人员5.各工艺功能区的布置及辅助设施6.主要设备及配置7.工艺水电气资源消耗8．工艺费用估算附表1.原材料清单2.设备需求表Thankyou！谢谢大家！