速率比浊法测定13价肺炎球菌结合疫苗中的各型多糖含量-陈琼

*8632012AA02A402＊＊[e-mail][e-mail]★★13*＊＊10005013。IMMAGE80020μL20μL200μL42.5min。1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F1～6μg·mL－1r＞0.99ＲSD7%70%～130%9N9V132、8、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F10s131、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F470%～130%。13。13Ｒ917A0254－1793201411－1954－05Determinationofpolysaccharidecontentsin13－valentpneumococcalconjugatedvaccinebynephelometry*CHENQiongWANGShan－shanLIANGLiWANGChun－eLIMao－guangSHIJi－chunYEQiang＊＊NationalInstitutesforFoodandDrugControlKeyLaboratoryofMethodandStandardizationforQualityControlofBiotechnicalProductsBeijing100050ChinaAbstractObjectiveToestablishanephelometrymethodforthedeterminationofthepolysaccharidescontentsinthe13－valentpneumococcalconjugatedvaccine．MethodsUsingimmunochemistrysystemthenon－competitivenephelometricprotocolwaschosenthevolumeofthesampleorthestandardsubstancewas20μLtheserumvol-ume20μLthereactionbuffervolume200μLthegainfactor4thereactiontime2.5minutes．Thesampleorthestandardsubstancewastreatedbysodiumhydroxidedesorption．ＲesultsUndertheseconditionsinthisstudylinearrelationshipsofthe13456A6B7F9V1418C19A19F23Fpneumococcalcapsularpolysaccharidesintherangeof1－6μg·mL－1weregoodr＞0.99．TheＲSDofrepeatabilitywaslowerthan7%．Therecoveriesof13typesofpolysaccharideswere70%－130%．Thespecificityresultsshowedthat9Npolysaccharidehadinfluenceonthedetectionof9Vpolysaccharidecontentswhilethepolysaccharides2810A11A12F15B17F2022Fand33Fthatwerenotcontainedinthe13－valentpneumococcalconjugatedvaccinehadnoinfluence．ＲobustnessstudyresultsshowedthatusingsodiumhydroxidetotreatsamplesandstandardsubstancesNaOHaddedduringtheadsorbentprocesscouldbeneutralizedin10seconds．Usingthenephelometrymethodtodeterminatethecontentsof13456A6B7F9V1418C19A19F23Fserotypeofpneumococcalcapsularpolysaccharidesinthe13－valentpneumococcalconjugatedvaccinetheresultsshowedthatin4batchesofproductsthemeasuredvalueswere—4591—ChinJPharmAnal20143411between70%－130%oftheoreticalvalues．ConclusionThismethodisaccurateandfeasible．Itprovidesarefer-enceforthequalitycontrolofthe13－valentpneumococcalconjugatedvaccine．Keywordsnephelometry13－valentpneumococcalconjugatedvaccinepneumococcalcapsularpolysaccharidecontentsnon－competitivenephelometricprotocolsodiumhydroxidedesorption、、、、1－2。、、220d3。GAVI517412%4－6。27、。TT8。79。774、6B、9V、14、18C、19F23F61、3、5、6A、7F19A13。。、。1319ApH10s10。13、、、。1IMMAGE800、UDＲI、I。1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23FATCC2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33FATCC1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F13D34821、12－002194、G22871、G21075、F63651、Sigma。22.12.1.120μL20μL200μL42.5min。2.1.2。1/200.3mol·L－110s1/200.1mol·L－1。2.1.31、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F6B52.8μg·mL－126.4μg·mL－10.25mg·mL－14。2.22.2.16μg·mL－1I1、2、3、4、56μg·mL－1XY。1。1～6μg·mL－1。—5591—ChinJPharmAnal201434111Tab1Theresultsoflinearrelationshippneumococcalserotyperegressionequationcorrelationcoefficient1Y=200.43X－88.4640.99803Y=226.59X－85.6030.99924Y=129.60X－10.6120.99635Y=210.55X－12.7230.99976AY=92.611X－27.5380.99966BY=75.845X－44.9330.99717FY=50.983X－24.6510.99629VY=109.48X－78.9700.998114Y=106.50X－68.6560.999018CY=76.770X－39.1880.996919AY=151.34X－59.3230.999119FY=122.27X－62.3290.998123FY=63.615X－42.7440.99912.2.26ＲSD7%。2。2n=6Tab2Theresultsofrepeatabilitypneumococcalserotypemean/mg·mL－1ＲSD/%14.903.5734.153.2744.571.9354.031.536A4.073.276B9.551.827F4.844.719V4.476.68143.791.4318C4.153.2019A4.072.1019F4.664.4923F5.052.972.2.393mL30.25mg·mL－1AlPO44μg·mL－16B8μg·mL－11、3、9mL1、23μg·mL－1。70%～130%。ＲSD3。3Tab3Theresultsofrecoverypneumococcalserotypemeanrecovery/%ＲSD/%190.816.18399.599.80492.749.02593.445.296A92.745.236B99.3615.557F89.399.439V90.6913.2114104.613.7118C100.94.4919A109.26.7819F90.255.052399.199.332.2.4I10.25mg·mL－1AlPO42131、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F2、8、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F0.25mg·mL－1AlPO44μg·mL－112、8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F0.25mg·mL－1AlPO44μg·mL－120.25mg·mL－1AlPO41μg·mL－1、24。9N112p0.05212p0.051、2、12p0.052、8、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F13。9N2p＞0.059V9N9V。—6591—ChinJPharmAnal201434114Tab4Theresultsofspecificitypneumococcalserotypemeanresponsevalue1blank12blank21negativecontrol12negativecontrol2positivecontrol114.209.4913.5513.35128.1538.213.664.585.63136.9346.572.671.211.4552.7254.277.115.853.31217.166A3.623.584.666.9570.596B2.862.591.772.2641.867F1.273.884.055.0131.649V0.683.332.8489.3049.37146.225.142.411.6250.1218C2.996.883.841.7839.8219A3.259.813.068.8297.2619F1.334.442.486.9081.0923F2.653.973.653.7029.302.2.519ApHpH10s。10。2.3134“2.1.2”“2.1.1”5。136B8μg·mL－14μg·mL－1。470%～130%。31013。、、、、135μg·mL－1n=2Tab5Theresultsofpolysaccharidespneumococcalserotypesample12－002194sampleG22871sampleG21075sampleF6365114.103.993.233.6733.673.223.163.3044.854.814.744.8256.274.184.114.476A3.613.583.283.706B7.777.147.057.337F4.324.313.964.339V5.265.155.295.05143.554.133.834.1618C4.684.584.484.5519A4.243.853.863.6619F3.994.003.533.6823F4.594.674.444.98r0.991370%～130%13ＲSD7%。1、0.25mg·mL－1AlPO42、8、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F13—7591—ChinJPharmAnal201434119N9V9N9V9N－－－－119V－