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培养液中酵母菌种群数量的变化一、血球计数板1、血球计数板的结构血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数量的仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。大方格中方格小方格方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，即1mm×1mm×0.1mm，其容积为0.1mm3；大方格的长和宽各为2mm，深度为0.1mm，即2mm×2mm×0.1mm，其容积为0.4mm3计数室通常也有两种规格16×25型：即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格25×16型：即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。不管计数室是哪一种构造，其每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。2、计数16×25型：一般取四角的四个中方格（100个小方格）计数25×16型：一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。3、计算以1mm×1mm×0.1mm型为例计数室容积为0.1mm3，则每个小方格的容积为1/4000mm3。100个小方格细胞总数/100×400×10000×稀释倍数酵母细胞个数／1mL=80个小方格细胞总数/80×400×10000×稀释倍数例1通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有个。2×108例2检测员将1mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳液体的总体积为0．1mm3。现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e5个中格80个小格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻个／mL。5n×1054、血球计数板的使用方法步骤③计数：稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。①镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数。②加样品：将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与盖玻片之间的矩形边缘为宜。多余培养液可用滤纸吸去。5、血球计数板的使用注意事项①从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几下，这样使酵母菌分布均匀，防止酵母凝聚沉淀，提高计数的代表性和准确性，求得的培养液中的酵母菌数量误差小。②如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀释以便于酵母菌的计数。具体方法是：摇匀试管，取1mL酵母菌培养液，加入成倍的无菌水稀释，稀释n倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有4～5个酵母细胞为宜。特别是在培养后期的样液需要稀释后计数。③对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。④对每个样品可计数三次，再取其平均值。⑤计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。⑥血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，以免损坏网格。1、研究过程测定定期取样测细胞数目2、测定方法测重量湿重干重（一）研究方法二、微生物的种群数量变化在恒定容积液体培养基中培养细菌数目的对数时间01234细菌的生长曲线（二）种群数量变化规律1：调整期2：对数期3：稳定期4：衰亡期细菌数目的对数时间01234细菌的生长速率时间01234细菌生长曲线细菌生长速率曲线该怎样画呢？目的：使微生物的生长较长时间的维持在稳定期。优点：缩短了培养周期,提高设备利用率,便于自动化管理。连续培养例2（08江苏卷）为研究酵母菌种群密度的动态变化，某同学按下表所列条件进行了A、B、C和D共4组实验，用1000mL锥形瓶作为培养器皿，棉塞封口，在25℃下静置培养，其他实验条件均相同，定时用血球计数板计数。根据实验结果绘出的酵母菌种群密度变化曲线图如下，请分析回答以下问题。1）图中曲线①、②和③分别是_____组、______组和______组的结果。DBA2）B组和A组的实验结果不同的原因是B组____________。培养液较多，与空气接触面积较小，故供氧较少3）D组和B组的实验结果不同的原因是D组____________。葡萄糖浓度较低，故营养物供应较少4）在整个实验过程中，直接从静置的培养瓶中取培养原液计数的做法是错误的，正确的方法是和。摇匀培养液后再取样培养后期的样液稀释后再计数5）实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板的做法是错误的，正确的方法是浸泡和冲洗细菌细胞数目的测定待测样品等量的已知含量的红细胞混匀涂抹红细胞细菌测定：红细胞数目细菌数目计算单位体积内的细菌数目细菌重量的测定取样：取一定体积的培养液离心分离、反复洗涤称湿重烘干称干重1、调整期采用对数期的菌体作为菌种、增加接种量、代谢活跃；体积增大；分裂迟缓。适应新环境1）主要特征：2）原因：3）人工控制（缩短调整期）：个体：代谢旺盛；分裂最快；个体形态和生理特征稳定。群体：繁殖＞死亡1）主要特征：2）应用：作生产菌种，科研材料。2、对数期3、稳定期个体：积累有害代谢产物；有些出现芽孢。群体：活菌数量最多；繁殖＝死亡1）主要特征：2）原因：生存条件相对恶化：营养物质消耗；有害代谢产物积累；PH改变种内斗争最激烈。个体：细胞形态多样群体：活菌数急剧下降；繁殖＜死亡1）主要特征：2）原因：生存环境极度恶化（营养物质消耗、有害代谢产物积累、PH改变）生存斗争最为剧烈。4、衰亡期