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AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第1页共40页AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册爱普拜斯应用生物系统公司AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第2页共40页启动3730/3730xlDNAAnalyzer流程Step1：启动电脑系统1A.打开显示器电源1B.打开电脑电源，直至出现登录界面1C.输入Windows操作系统用户名及密码Step2：启动仪器2A.确认电脑系统已经启动2B.确认仪器·加热炉门已关闭·仪器门已关闭·样品舱门已关闭·Buffer，Water，Waste槽已安装2C.打开仪器电源Step3：上样前设置3A.确认下胶块，泵胶块，胶块连接管及胶管已安装到位3B.确认阴极Buffer，Water，Waste槽的液面不低于刻度线（约80ml）并已安装到位3C.确认阳极Buffer杯中液面不低于刻度线（约67ml）并已安装到位3D.确认毛细管已安装到位，空间定位已完成3E.确认DyeSet相应光谱校正已完成3F.确认样品已正确放置于样品舱内3G.在PlateManager内编辑样品板，准备上样AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第3页共40页否否否是是是是仪器准备第9页需要空间定位？运行测序样品？进行空间定位第14页进行光谱校正第16页需要光谱校正？运行片段分析样品？上机运行第35页编制测序样品板第24页编制片段分析样品板第31页结果分析，参考相关手册AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第4页共40页一、DNA测序或片段分析的流程1.样品制备样品制备即是在DNA片段上用化学的方法标记荧光素。标记上荧光素后就可以对DNA片段进行检测和确认了，一般每一DNA分子标记一个荧光素分子，最多有五种荧光素可用于DNA样品的标记。不同的样品制备方法选用不同的荧光素和试剂的组合，样品制备可在96孔或384孔板进行2.软件设置操作人员根据所使用的标记方法、电泳的毛细管长度、电泳胶的种类等，在数据采集（DataCollection）软件中选择正确的运行模块和分析模块3.开始运行操作人员把样品板放到仪器上并开始运行，仪器便会根据设定好的顺序，用相应的电泳程序分析样品板上的样品4.电泳用“电进样”的方法将带电的样品分子加到灌好电泳胶的毛细管的进样端（负极），然后在毛细管两端加上直流电压，样品中不同大小的DNA片段开始从负极向正极移动，移动的速度受到片段自身大小影响，片段越短移动得越快。电泳的结果是使长度不同的带电DNA片段互相分离，并且按片段的长短的顺序通过检测窗口，产生信号，短片段先到达检测窗口5.激发和检测当标记有荧光素的DNA片段移动到检测窗口时，荧光素受到激光束的激发而产生荧光信号，此荧光信号被CCD检测器所检测并被转化为电信号传递到计算机AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第5页共40页6.数据采集和处理CCD检测器把检测到的荧光信号转换为电信号，并把它传送给安装了DataCollection（简称DC）软件的计算机工站。工作站接收到信号后，用预先设置好的方式进行初步处理，并把这些数据存贮在计算机的数据库里7.自动数据提取和分析工作站会自动地从数据库中提取这些数据，并根据不同的运行模式，完成对样品DNA的碱基序列或片段信息的分析，然后把分析完成后的结果数据以样品文件的形式保存于计算机的硬盘中结果文件DC软件数据库荧光信号电信号AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第6页共40页8.结果分析好的样品文件可以用序列分析软件或片段分析软件来打开查看结果，如有必要，这些数据可以改用不同的分析参数进行重新分析。电泳信号图的X轴表示时间，Y轴表示相对荧光强度，图上不同颜色的信号线代表了样品制备时所使用的不同的荧光素（对于测序结果，每种颜色代表一种碱基），图中的每个峰代表一个DNA片段测序样品的结果图片段分析的结果图AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第7页共40页二、仪器硬件结构1.仪器前视图PolymerDeliveryPump(PDP)灌胶泵系统（加热炉内的）CapillaryArray毛细管整列胶管泵胶块胶瓶阳极缓冲液杯下胶块连接管样品舱门加热炉门废液槽Waste样品舱门指示灯缓冲液槽Buffer水槽Water进样器按钮照明灯开关状态指示灯电源开关AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第8页共40页2.仪器后视图激光管散热风扇不能被堵塞！3.主要部件功能电源开关：打开或关闭仪器电源；照明灯开关：打开或关闭仪器内部的照明灯；进样器按钮：使进样器抓取缓冲液槽到毛细管针端（或相反）；样品舱：放置等待上样的样品；阳极缓冲液杯：内装1X缓冲液（约67ml），电泳时作为阳极介质；缓冲液槽：装1X缓冲液（约80ml），电泳时作为阴极介质；水槽/废液槽：装去离子水，清洗毛细管用或放置废胶；泵胶块：泵入胶并将其灌入毛细管；下胶块：上装有阳极，阳极缓冲液杯装在此处；恒温加热炉：保证电泳时，毛细管处于一个均一、稳定的温度环境中；数据线：不是普通Ethernet网线，有一定方向性，主要用于仪器和电脑通讯仪器通风散热风扇激光管散热风扇仪器主电源数据线接口AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第9页共40页三、实验操作1.仪器准备A开机——先开电脑，再开仪器，最后开软件·（如有）开启UPS电源，确保UPS处于电池供电状态，稳定5分钟；·打开显示器和电脑的电源开关，登录到WindowsXP桌面；·检查确保仪器的加热炉门和仪器前门已关闭；·打开仪器电源开关，仪器进行一系列的初始化后，绿色状态灯亮，仪器启动完成；仪器的状态指示灯的不同状态显示了仪器处于不同的工作状态，具体请参考下表：状态指示灯操作·仪器已就绪·仪器正在运行自动向导程序，且仪器门已关闭绿灯长亮·仪器已就绪·仪器实验运行中绿灯闪烁·仪器与电脑无法通讯黄灯长亮·确认已进入Windows界面·确认网线连接正确·确认仪器门已关闭·确认各溶液槽位置正确·确保电脑名未更改，否则请改回原电脑名·确保电脑防火墙已关闭·确保电脑与仪器连接的IP地址为：192.168.0.1·确保电脑用于通讯的用户名3730User，密码为3730User，并且设置为永不过期·仪器正在下载firmware·仪器正在运行诊断程序·仪器加热炉门已打开·仪器门已打开·缓冲液槽未安装·毛细管未安装·仪器正在运行自动向导程序，仪器门打开状态黄灯闪烁·确认仪器门及加热炉门已关闭·确认毛细管及缓冲液槽已安装·仪器诊断检测到故障红灯长亮·关闭仪器，30秒后重新启动·打开DataCollection软件，在GAInstrumentsga3730instrumentnameInstrumentStatusEventLog察看日志中的信息·联系AB技术支持AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第10页共40页·点击桌面DataCollection软件快捷方式或AllProgramsAppliedBiosystemsUnifiedDataCollectionRunUnifiedDataCollectionv3.0，运行软件·等待ServiceConsole窗口中的指示灯全部变成绿色后，DC软件打开*参考第2页启动3730/3730xlDNAAnalyzer流程AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第11页共40页B安装毛细管·打开DataCollection软件，选择在GAInstrumentsga3730instrumentname·在菜单栏里选择WizardsInstallArrayWizard·根据向导提示，完成毛细管的安装·运行空间定位（SpatialCalibration），校正毛细管的位置注意：1.安装毛细管的全程需要带无粉手套2.不要拉扯毛细管3.拆下来暂时不用的毛细管需要使用原始包装保存，毛细管末端放在缓冲液槽及玻璃小瓶中，使用1XBuffer浸泡，使用保护罩保护毛细管的检测窗口毛细管安装图解AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第12页共40页C更换POP胶（3730系列仅支持POP7胶）·打开DataCollection软件，选择在GAInstrumentsga3730instrumentname·在菜单栏里选择WizardsChangePolymerWizard·根据向导提示，完成POP7胶的更换注意：1.胶在25℃的使用寿命为7天，使用过期的胶有可能会使实验灵敏度下降，2.胶在从4℃冰箱取出之后需要先回温到室温，建议放置1个小时，以防安装后有气泡产生3.每天都需要检查POP胶的剩余量96道毛细管每轮消耗约250μl，48道毛细管每轮消耗约110μl4.更换POP胶的全程需要带无粉手套D更换缓冲液及去离子水1.更换Buffer/DIWater的全程需要带无粉手套2.制备1XBuffer·将20ml10XBuffer加入量筒·补充180ml去离子水，至总体积200ml·充分混匀，待用3.关闭仪器门，确认绿色状态指示灯常亮4.点击按钮Tray（进样器按钮），弹出Buffer槽，打开仪器门5.拔下Buffer槽供电接头，拆开Buffer/Water/Waste槽组件，将原废液倒入废液缸6.使用去离子水清洗Buffer/Water/Waste槽7.更换Buffer及去离子水（约80ml/槽）8.组装Buffer/Water/Waste槽组件，擦干外表面液体9.取下阳极杯，将原废液倒入废液缸10.使用去离子水清洗阳极杯10.更换阳极杯1XBuffer（约67ml）11.安装各槽组件及阳极缓冲液杯胶瓶AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第13页共40页Buffer/Water/Waste槽组件组装示意图注意：1.组装溶液槽盖的时候，注意周围的橡皮垫正确安装2.组装灰色橡胶垫和白色固定器的时候，注意橡胶垫要平整以及进样孔要对齐3.1XBuffer在2~8℃可保存1个月，室温为1个星期4.建议24至48小时或每次实验前，更换Buffer及去离子水，以保证良好的实验灵敏度Water/Waste槽组件Buffer槽组件白色固定器灰色橡胶垫溶液槽盖溶液槽可加热基座普通基座供电接头AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第14页共40页2.空间定位（SpatialCalibration）A什么是毛细管空间定位?3730/3730xlAnalyzerDataCollection软件，通过毛细管空间定位程序，收集每道毛细管的背景信号，在CCD上形成图像，在图像上确定每根毛细管的具体位置及收集信号的位置B何时做毛细管空间定位?·安装新毛细管或用过的毛细管后·移除或调节了毛细管检测窗口的位置·搬动仪器后C如何做毛细管空间定位?·打开DataCollection软件，选择GAInstrumentsga3730instrumentnameSpatialRunScheduler·选择SpatialFill_1·点击，开始定位-罐胶模式（Fill），约需3～4分钟，-不灌胶模式（NoFill），约需2分钟AppliedBiosystems3730/3730xlDNAAnalyzer简明使用手册第15页共40页·人工估计定位结果，各道的信号高度相差不大