人造血干细胞集落分析

MethoCult®集落形成细胞检测(人)技术手册货号#28404目录1.0简介..........................................................................42.0缩略词表........................................................................53.0StemCell公司用于人集落形成细胞检测的产品…….…………………….........64.0设备，耗材和试剂........................................94.1设备.........................................................94.2材料...............................................................94.3试剂..............................................................95.0MethoCult®培养基的贮存和使用..............................105.1MethoCult®完全培养基的融化和分装..................................105.1.1方法.....................................................105.2MethoCult®不完全培养基的融化和分装...........................115.2.1方法......................................................116.0MethoCult®培养基的人造血集落形成细胞检测.....................126.1检测操作简图....................................................126.2细胞样本的制备...................................................136.2.1细胞处理....................................................136.2.2细胞处理方法.................................................136.2.2.1氯化铵溶液去除RBC..................136.2.2.2用Ficoll-Paque®PLUS分离低密度（单核）细胞.............146.2.3细胞制备—正选的CD34+细胞或负选的造血祖细胞.................156.3细胞计数.......................................................156.3.1用3%的乙酸进行有核细胞计数....................................156.3.2用台盼蓝拒染法计数活细胞...................................166.4人集落形成细胞检测.............................................176.4.1MethoCult®完全培养基.........................................176.4.2MethoCult®不完全培养基.........................................187.0人集落形成细胞检测的评判.....................................187.1方法...................................................188.0人造血集落形成细胞的特征和照片.................208.1集落的一般特征.................................................208.2照片..........................................................20杭州百通生物技术有限公司电话：[phone]Email：[e-mail]2目录(续)9.0常见问题和解答............................259.1MethoCult®培养基和试剂.........................................269.2细胞样本的制备....................................................279.3体系建立和培养.............................................279.4人集落形成细胞检测的评判...................................2910.0参考书目...................................................2911.0附录....................................................3011.1MethoCult®的成分...............................................3011.1.1用于集落形成细胞检测的人集落形成细胞和细胞因子组合............3011.2正选的CD34+细胞或负选的造血祖细胞的样品制备……….....3211.2.1正选CD34+细胞...........................................3211.2.2负选的造血祖细胞......................3311.3相关产品...........................................................3411.3.1CollagenCult®和MegaCult®-C胶原-基质的培养基.....................3411.3.2StemSpan®无血清培养基.........................................3511.3.3MyeloCult®长期培养基..........................................3511.3.4熟练测试项目.....................................................3511.3.5质量控制.......................................................3611.3.6培训课程........................................................3611.3.7订单服务........................................................3711.3.8集落图谱........................................................3711.3.9人造血集落幻灯片..............................................37杭州百通生物技术有限公司电话：[phone]Email：[e-mail]31.0简介成人骨髓内存在少量的造血干细胞（HSCs），它们能生成不同类型的分裂活跃的造血祖细胞。这些造血祖细胞增殖分化，导致每天产生数以万计的成熟血细胞。造血干细胞也存在于脐带血中，胚胎发育过程中也存在于胚肝这类组织中。体外检测系统已能定量多潜能的祖细胞和定向分化为红细胞、粒细胞、单核－巨噬细胞和巨核细胞等髓系细胞的祖细胞。当在半固体的基质中培养时，单个的祖细胞，又称为集落形成细胞（CFCs），增生形成独立的细胞簇或集落。CFC检测法就是将细胞接种到半固体培养基中，如添加了营养成分和细胞因子的甲基纤维素或胶原蛋白，然后于37°C培养14到16天。我们就可以根据集落中形成的一种或多种血细胞系的形态特征对集落形成细胞进行分类和计数。可以在光学显微镜下原位进行集落评价和计数，也可以挑出单个克隆后用细胞化学和免疫细胞化学的方法染色后进行评估和计数。不同的胶状试剂包括琼脂、琼脂糖、甲基纤维素、胶原蛋白和纤维蛋白凝块都曾被用于集落形成细胞的检测。甲基纤维素是一种相对惰性的聚合物，它可形成透明稳定的凝胶。它在培养基中的终浓度通常为0.9-1.2%,添加的成分包括胎牛血清、牛血清白蛋白、2-巯基乙醇、胰岛素、转铁蛋白和重组细胞因子，也可用条件培养液作为集落刺激因子。在甲基纤维素培养基中，红系细胞的生长好于其它的半固体培养基，因此使得红系、粒细胞、单核细胞和多潜能集落形成细胞可以在同一个培养体系中进行检测。巨核细胞的祖细胞适合在胶原基质的培养基中生长，而且能够用特异性免疫细胞化学染色的方法得以确定。.本技术手册包括用MethoCult®甲基纤维素培养基对人红细胞－集落形成单位(CFU-E)、红细胞－爆式集落形成单位(BFU-E)、粒细胞、巨噬细胞－集落形成单位(CFU-GM)、粒细胞、红细胞、巨噬细胞、巨核细胞－集落形成单位(CFU-GEMM)进行检测和计数的方法。人巨核细胞－集落形成单位(CFU-Mk)在胶原培养基中的定量分析见“MegaCult®-C技术手册《人和小鼠巨核细胞祖细胞的定量检测》，其目录号为#28413。欢迎访问我们的网站，或与StemCellTechnologies的代理商联系。杭州百通生物技术有限公司电话：[phone]Email：[e-mail]42.0缩略词表缩写全称Agar-LCM琼脂白细胞条件培养基BIT牛血清白蛋白、胰岛素和转铁蛋白BM骨髓BFU-E红细胞爆式集落形成单位BSA牛血清白蛋白CB脐带血CD分化抗原簇CFC集落形成细胞CFU-E红细胞集落形成单位CFU-G粒细胞集落形成单位CFU-GEMM粒细胞、红细胞、巨噬细胞、巨核细胞－集落形成单位CFU-GM粒细胞、巨噬细胞－集落形成单位CFU-M巨噬细胞－集落形成单位FBS胎牛血清hEPO重组人红细胞生成素hG-CSF重组人粒细胞集落形成单位hGM-CSF重组人粒细胞、巨噬细胞－集落形成单位hIL-3重组人白介素-3hIL-6重组人白介素-6hSCF重组人干细胞因子hTpo重组人血小板生成素MPB动员的外周血PB外周血PHA-LCM植物凝血素白细胞条件培养液杭州百通生物技术有限公司电话：[phone]Email：[e-mail]5杭州百通生物技术有限公司电话：[phone]Email：[e-mail]63.0StemCell公司用于人集落形成细胞检测的产品MethoCult®甲基纤维素培养基StemCell公司对用于MethoCult®产品制造的原料进行严格的筛选。不同批号的甲基纤维素、胎牛血清和牛血清蛋白促进集落形成细胞生长的