动物细胞培养

一、动物细胞培养1.发展历史:20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。1、动物细胞培养（一）动物细胞、组织培养将动物体内的一部分组织取出分散成单个细胞人工控制的条件下细胞得以生存并保持生命活动现象生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡性能等机械消化或胰酶消化（1）定义（2）动物细胞的培养过程取动物胚胎或幼龄动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞(动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质)2、为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理？可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞思考1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？动物细胞生长特点：（1）贴壁生长：培养瓶中的悬浮液细胞，紧贴培养瓶内壁才能生长（2）接触抑制：当培养瓶中内壁生长细胞彼此紧密接触时，细胞不再分裂（3）细胞只分裂不分化细胞悬浮液单个细胞转入特殊培养液中进行原代培养细胞形成生长晕并增大将原代细胞分装到多个扁形瓶中进行传代培养细胞系或细胞株讨论：为什么要进行传代培养？从原代培养向传代培养的原因：原代培养的细胞生长比较缓慢，而且繁殖到一定的代数一般10代以内停止生长，需要重新更换培养基。如果不进行分装培养，贴壁生长以及接触抑制生长的细胞就会因细胞密度过大和代谢消耗引起营养枯竭，不能正常生长。有关概念:将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增值。从机体取出后立即进行的细胞、组织培养，到培养的细胞形成生长晕并增大为止。原代培养：传代培养：严格说，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶为传代培养。细胞系—有关概念:（2）连续细胞系:（1）有限细胞系：连续细胞株有限细胞株细胞株-可连续传代的细胞不能连续培养下去的细胞系能连续培养下去的细胞系大多数具有异倍体核型，有的是恶性细胞系，具有致瘤性，有的获得不死性（保留接触抑制，不致癌）例：二倍体细胞通过一定的选择或纯化方法，从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞具有恒定的染色体组型、同工酶类型、病毒敏感性和生化特性。细胞系泛指可传代的细胞细胞株是具有特殊性质的细胞系细胞系与细胞株的关系动物细胞培养的条件:1.无菌无毒的环境2.营养3.温度和pH4.气体环境从人的组织切片中取下小片样品转入特殊培养液中进行原代培养胰蛋白酶分装到多个扁形培养瓶中进行传代培养单个的成纤维细胞悬浮液（分解胶原纤维等）动物细胞培养过程于CO2培养箱中保温培养植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理培养基性质培养基特有成分培养结果培养目的细胞的全能性细胞增殖固体培养基液体培养基植物激素动物血清植物体细胞株、细胞系快速繁殖、培育无病毒植株获得细胞或细胞分泌蛋白动物细胞培养技术的应用•（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。•（3）用于检测有毒物质。•（2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。•（4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据。具体应用得到动物组织培养胚胎或幼龄动物的脏器单个细胞机械消化、胰蛋白酶消化原代培养培养液葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等传代培养大量的组织细胞(构成组织或器官)修复受损皮肤、器官等细胞株或细胞系动物组织培养胚胎或幼龄动物的脏器单个细胞机械消化、胰蛋白酶消化原代培养培养液葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等传代培养药物研究治疗癌症的药物及其疗效某物质检测有毒物质、致癌物质等细胞株或细胞系•2015年4月,美国一家非官方癌症研究中心发布信息说,“高露洁”牙膏中含有的抗菌化学物质三氯生可能是致畸物质。公众对此表示怀疑。科研人员欲采用一定的技术手段探究三氯生对人体是否有危害。请回答：1、根据所学的动物细胞工程知识，采取下列哪种技术手段最合适A、动物细胞融合B、动物细胞培养C、胚胎移植D、核移植2、根据上述选择，请你设计一个实验来探究“三氯生”对人体是否有危害。则该实验的原理是B许多致畸物质加入动物细胞培养液后，培养细胞会发生染色体结构或数目的变异。根据变异细胞占观察培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性（三）克隆培养法把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术1、定义：未经克隆的异质性细胞系纯系：克隆经克隆以后的细胞的后裔细胞群，来源于一个共同的祖细胞。2、产物:遗传性状均一、表现的性状相似3、细胞克隆的基本要求:必须保证所建成的克隆来源于单个细胞单细胞不如群体细胞原代培养细胞和有限细胞系不如无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞4、克隆对象的选择依据：选择对培养环境具有较大适应范围和具有较强独立生存能力的细胞。5、提高细胞克隆形成率的措施选择适宜的培养基、添加血清、以滋养细胞支持生长、激素刺激、使用CO2培养箱调节PH6、细胞克隆的用途从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系，方便科学研究