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TOPBiotek&MolecularDevices-1-MolecularDevices微孔板检测系统SpectraMaxM5/M5e操作简介TOPBiotek&MolecularDevices-2-仪器和软件总体介绍3硬件操作步骤及注意事项4仪器安装连接4仪器保养注意4软件操作步骤5总体介绍5软件界面61.菜单栏62.图标栏63.文档区域7仪器检测参数设定8四种检测类别：91.终点法检测92.动力学法检测113.波长扫描检测114.单孔多点检测11检测样品分组设定131.设定本底参照(BLANK)142.设定标准样品(Standards)及相应的标准曲线143.设定未知样品(Unknowns)并根据标准样品计算相应的浓度18TOPBiotek&MolecularDevices-3-仪器和软件总体介绍微孔板检测系统(酶标仪)，仪器正面左边角有型号名SpectraMaxM5/M5e：酶标仪需要用专门连接线(仪器自带)与电脑连接，下图为连接线两边插头、仪器背面的插口和电脑背面的9针串口(COM)。另外酶标仪对电源要求很高，我们要求的电源有接地，并通过不间断电源UPS来对仪器和电脑接点，防止：1）大电流的冲击，2）电压不稳，3）突然断电。推荐SANTAK公司出品的UPS不间断电源，图片如下：仪器的所用功能都可以通过专业软件SoftMaxProv5.0.1来控制，在电脑中安装后在桌面上会有如下的图标：TOPBiotek&MolecularDevices-4-硬件操作步骤及注意事项仪器安装连接仪器与电脑连接完毕并连接上高质量的电源以后，按仪器背面的按钮可以直接启动仪器，经过几分钟后的仪器自检后就可以开始用于检测。电脑和仪器哪个先开没有关系。仪器保养注意1）有良好的电源，保持24小时开机。2）保持避光和干净的室内环境，维持一定的湿度(30%-80%)。3）维持室内比较恒定的温度，以20-22度为最适宜。4）适用6-384孔板。96孔微孔板内每孔可检测100-300ul溶液，最佳检测体积为200ul。5）384孔微孔板内每孔可检测50-100ul溶液，最佳检测体积为80ul。6）检测后的微孔板和比色皿不要长期置于仪器插槽中，检测完后就从仪器中取出，避免溶液蒸发腐蚀或损坏仪器内部光路系统。如果为有腐蚀性或挥发性溶液，请带盖检测。7）对于可见光吸收检测，使用全透明微孔板；紫外光吸收检测，使用紫外可透全透明微孔板；荧光强度和荧光偏振，使用黑色不透明板，需要检测底读的用黑色底透微孔板；化学发光和时间分辨荧光，使用白色不透明微孔板。8）SpectraMaxM5/M5e随仪器有一块紫红色的适配板，在检测96孔板和384孔板光吸收以及荧光顶读的时候必须预先以下图方向置于插槽中，然后再如图放入微孔板进行检测。强烈建议！！！在连有优质电源的情况下，保持仪器24小时开机(对高能氙闪灯源没有损耗)，不要罩防尘罩以保持透气和除湿。隔1-2个月关机重启一次即可。适配框，正面朝上放置微孔板孔A1的位置微孔板孔H12的位置TOPBiotek&MolecularDevices-5-软件操作步骤总体介绍以SoftMaxProv5.0.1做本次操作简介的蓝本。双击图标可以打开以下软件操作界面：文档区域即所有检测条件的设定，样品类型的设定，实验结果，数据分析结果区域，文档可以另存为两种格式：1）*.pda格式，即数据格式。该文档含有包括参数设定，实验数据，结果分析等所有实验内容。2）*.ppr格式，即模版格式。该文档含有参数设定，分析公式等实验设定内容，可以应用于多次重复实验而使用统一模版。TOPBiotek&MolecularDevices-6-软件界面1.菜单栏‘File’下拉菜单内含另存，保存，输出，打印等命令。‘Edit’下拉菜单内含剪切，复制，粘贴，删除，重新计算等命令。‘Experiment’下拉菜单内含新实验，新记录，新微孔板，新比色皿，新图等命令。‘View’下拉菜单内含关于页面显示的命令。‘Protocols’下拉菜单内含超过120种可以应用于各类生化和细胞实验的模版。‘Control’下拉菜单内含开关插槽，震板，温控等命令。‘Window’下拉菜单内含页面排列的命令。‘Help’下拉菜单内含软件版本号，SoftMaxProUserGuide和FormulaReferenceGuide.2.图标栏如果仪器和电脑连接不正常的时候图标栏显示为：，这可能是因为连接不好，仪器未开机，仪器型号设定不对或串口设定不对引起，修改后重性连接正常后会显示。1）单击可进入如下界面：a)b)c)TOPBiotek&MolecularDevices-7-a)在该界面可以修改Reader的型号，包括MolecularDevices所有类型（单功能和多功能）的酶标仪。选择您所购买的那款酶标仪型号，本例为SpectraMaxM5/M5e。b)在SerialPort下拉菜单选择仪器连接线与电脑所接的串口号(COM)。c)软件安装后默认用户在做完实验后自己保存数据。如果用户希望每次实验检测后自动保存可以在’SaveDataAfterRead’前打勾。2）实验检测参数都设定完毕后，把微孔板或比色皿放入相对应的插槽，然后按可以启动仪器进行检测。3）仪器可以设定温度，均在室温以上加温，相应温度范围请查阅用户所使用的是何种型号的仪器，按可以出现对话框选择开启温度控制或者关闭温度控制。当开启温度控制后需使仪器的微孔板插槽置于关闭状态保持所设温度，如果处于打开状态，仪器会发出报警声，然后自动关闭微孔板插槽。4）如果需要手动震板，可以按住不放，仪器会维持震板，至板内溶液均匀后可以放开该键，震板停止。5）按可以控制仪器的微孔板插槽打开和关闭。3.文档区域文档区默认为1个实验Experiment，即：可以在菜单栏’Experiment’里选择增加实验。每个实验分为三个部分：1）’Note’，在这个区域中可以写入实验记录，如实验名称、所用样品、实验时间、实验总结等。2）‘Plate’，在这个区域中可以编辑对微孔板进行检测设定和对所检测样品的分组。TOPBiotek&MolecularDevices-8-3）‘CuvetteSet’，在这个区域中可以编辑对比色皿进行检测设定和对所检测样品的分组。如果酶标仪为没有比色皿插槽的型号，则没有’CuvetteSet’.仪器检测参数设定所有对仪器的参数设定都可以在’Settings’中完成。按’Settings’键后出现如下对话框：如果用户使用的是其它型号的酶标仪，则在选项上会与如下的介绍略有增减，但整体模型不变。TOPBiotek&MolecularDevices-9-四种检测类别：在上图中分别代表：终点法检测，即获得在单一时间点的样品检测值。动力学法检测，即获得在预先设定的时间段中样品在不同时间点的检测值。波长扫描检测，即获得样品在连续多个波长处的检测值。单孔多点检测，即获得每孔样品在多个位置进行检测并且平均后的检测值。根据用户所需要获得的结果类型选择合适的检测类型，然后从左边的列表(如下左图)中从上往下依次用鼠标点中选项，并在右栏(如下右图)中选择对应的参数设定。全部设定完成后按界面右下角的OK，如果需要取消则按Cancel。1.终点法检测1）ReadMode可选择Fluorescence(荧光强度)，Absorbance(光吸收)，Luminescence(化学发光)，TimeResolved(时间分辨荧光)，FluorescencePolarization(荧光偏振)五种读板模式。按实验选择其一。仪器默认读板方式为Topread(顶读)，适用于均相溶液和悬浮细胞的检测；若在’ReadFromTOPBiotek&MolecularDevices-10-Bottom’选项前打勾，则仪器则改为BottomRead(底读)读板方式，适用于贴壁细胞的检测。2）Wavelengths处可以选择检测几种波长，光吸收模式最多为6种，其他模式均为4种。a)对于光吸收模式，可以在Lm1后面的框中填入检测所用波长。b)对于荧光强度，时间分辨荧光和荧光偏振模式，可以在2个框中分别填入激发波长和发射波长。Cutoff一般选为自动(Auto)。c)对于化学发光模式，一般使用’All’。当同时检测不止一色化学发光的时候可填入相应的检测波长。3）PathCheck仅用于光吸收模式，即将微孔板检测得到的原始光吸收值通过参比校正到1cm光径长度时的光吸收值。可选择’WaterConstant’(以水做参比)和’CuvetteRefence’(在比色皿中加入相应溶液预读一次作为参比)。另外可以选择’Platebackgroundconstants(inODs)’来扣除微孔板的本底值，即拿同批次的微孔板加入相同体积的水预先读一次检测波长，得到所有孔的数据取平均值，将平均值填入下面的框中。默认OD为0，类似于做空白对照。4）Automix&Blanking选中Automix后可以选择读板之前震板，可选择0-999秒。Blanking仅适用于光吸收模式，即’Pre-ReadPlate’(预读板)。在正式读板前先放入同批次板加入相同体积的水进行预读，软件自动记录每孔光吸收值，正式读板结束后每孔一一对应减去各自的预读值得到校正后的光吸收值。’Platebackgroundconstants(inODs)’和’blanking’均为扣除本底，只能两者选一或者都不选，不可以同时选择。5）Sensitivity应用于荧光相关的检测。对于荧光强度模式，默认’Readings’(每孔检测次数)为6次(即灯闪次数)，如须得到更为精确结果可拖曳横栏增加’Readings’。对于时间分辨荧光和荧光偏振默认为100次。‘PMTsettings’默认为AutoPMT，即应用软件根据实际每孔荧光强度自动调节电压改变信号增加倍数，然后通过回算过程按比例得到格孔互相可比较的相对荧光强度(RFUs)。使用AutoPMT则板跟板天跟天之间的数据可比。如果对实验有特殊要求，可以选择’Low’,‘medium’,‘high’。6）Autocalibrate软件默认’autocalibrate’，即每次读板前自动校正光路。强烈推荐一直选用’On’！7）AssayPlateType对于不同实验可以选择6-384孔板及其具体的板型。选择原则见硬件操作步骤及注意事项。8）WellstoRead可用鼠标先选中起始孔按住不放，进行拖曳值选中微孔板上所有需要检测的孔。9）SettlingTime用于设定微孔板进入仪器内部检测去后延迟多少时间(ms)进行检测。默认是off，一般不选择。10）ColumnWavelengthPriority用于多个波长在同一实验检测中的优先方式。’ColumnPriority’是指每孔(每列)检测完多个波长后再移到下一个进行检测。’WavelengthPriority’是指一次实验中选取的所有孔先一次检测完一个波长后再从第一个孔开始按下一个波长读完所有孔直到把所有波长都检测完。TOPBiotek&MolecularDevices-11-11）CarriageSpeed用于调节进板速度，一般都使用’normal’。当需要做到一些对震动敏感比如凝集反应的时候则选择’slow’。12）AutoRead主要用于与机械臂/堆板机同时应用进行高通量测读的时候。也可以当文档区域中同时设置了多块plate的设定而且是针对同一块板的不同实验的时候可以选择AutoRead，这表示第一次读完后微孔板不会通过插槽打开从仪器中退出来，而是直接进行接下来的读板。2.动力学法检测Timing与终点法相比，动力学法的设定只是在左边版面多了时间的设定。选择Timing后可以看到右侧参数设定中包含有’Runtime’即整个检测反应时间以及’Intervel’即各检测点之间的时间间隔。鼠标点中这两个相应的数字框后可以进行时间的修改。如果时间间隔太短，会出现或者的警报。最小的间隔时间取决于一次微孔板检测中同时检测多少个孔。3.波长扫描检测与终