搜索
HbA1c行业标准解读内蒙古医科大学附属医院张军力目录一、HbA1c检测标准化意义与进展二、HbA1c行业标准要求三、HbA1c检测标准化现状一HbA1c检测标准化的意义与进展糖化血红蛋白（HbA1c）相关基础知识成人血红蛋白（Hb）通常由HbA（97%）、HbA2（2.5%）和HbF（0.5%）组成。对HbA进行色谱分析发现了几种次要血红蛋白，即：HbA1a、HbA1b和HbA1c，统称为HbA1，它们的糖基化位点是β链N末端的缬氨酸残基。没有连接糖类的血红蛋白称为HbA0。血红蛋白组成HbA1cHbA1c是糖化血红蛋白的主要组成成分,占总糖化血红蛋白的60%,目前临床定量测定及应用的是HbA1c结果。HbA1c由葡萄糖的游离醛基与HbA的β链N末端缬氨酸的氨基经非酶促结合反应,先形成不稳定的Schiff碱(醛亚胺),然后经过Amadori(葡糖胺)重排,最后形成稳定的酮胺化合物,糖化血红蛋白的个体内生物学变异小于2%。反应过去6-8周的平均血糖浓度，可为评估血糖的控制情况提供可靠的实验室指标。HbA1c为糖尿病患者心血管事件的独立预测危险因素。糖尿病诊断标准2010年美国糖尿病学会（ADA）推荐糖尿病诊断标准•1、HbA1c≥6.5%（48mmol/mol）。或•2、FPG≥126mg/dl（7.0mmol/L）。空腹定义是至少8小时没有进食热量。或•3、OGTT试验两小时血浆葡萄糖≥200mg/dl（11.1mmol/L）.该试验应遵循WHO要求，服用75g葡萄糖的糖水。或•4、在伴有典型的高血糖或高血糖危象症状的患者，随机血糖≥200mg/dl（11.1mmol/L）无明确高血糖症时，应通过重复检测来证实标准1-3•《2010年糖尿病诊疗指南》正式确定将HbA1c作为糖尿病诊断的一种方法，诊断界值为≥6.5%•如无明确高血糖，则HbA1c与血糖检测应通过重复检测来证实•将HbA1c5.7%-6.4%的患者归类为“糖尿病高危人群”HbA1c（糖化血红蛋白）•患者无需准备（任何时间段，无需空腹）•标本稳定性：非常好•生物学变异小：个体内生物学变异小于2.0%•阈值与眼底病变风险高度相关，比FPG提早预测•当结果是7.0%时，变化范围为0.5%（6.5-7.5%）•相对来讲不受急性的血糖波动的影响中国2型糖尿病防治指南（2010版）原因1：提出的诊断切点（6.5%）是否适用于中国人群有待验证未将HbA1c列入糖尿病诊断标准原因2：我国HbA1c测定标准化程度不够，各实验室间结果差异较大，如果采用HbA1c诊断糖尿病必然会造成很高的漏诊率和误诊率鉴于HbA1c检测在我国尚不普遍，检测方法的标准化程度不够，测定HbA1c的仪器和质量控制尚不能符合目前糖尿病诊断标准的要求。本指南仍不推荐在我国采用HbA1c诊断糖尿病。但对于用标准化检测方法，并有严格质量控制，正常参考值在4.0%-6.0%的医院，HbA1c≥6.5%可作为诊断糖尿病的参考。糖化血红蛋白标准化实验室指标：以数字形式参与临床评估美国I型糖尿病控制及并发症试验（DCCT）英国II型糖尿病控制及并发症关系研究（UKPDS）表明：糖化血红蛋白是糖尿病长期血糖控制的最佳评估指标微血管并发症HbA1c1%糖化血红蛋白控制的越好，糖尿病患者的预后越好14%14%21%21%心肌梗塞14%21%糖尿病相关的死亡37%HbA1c检测标准化至关重要若HbA1c检测应用于临床，需实验室测定结果具有跨时空、跨检测系统的一致、可比性：–才能建立起普遍可用的参考区间，而不是某个具体方法的参考范围–才能够有效地应用循证医学和检验医学实践–才可以合并分析、比较不同医学中心的研究资料，促进医学研究和研究成果的转化标准化工作是实现临床实验室测定结果可比性的关键目前糖化血红蛋白测定标准化最著名的是—美国国家糖化血红蛋白标准化计划（NationalGlycohemoglobinStandardizationProgram，NGSP）—国际临床化学和检验医学联合会（InternationalFederationofClinicalChemistryandLaboratoryMedicine,IFCC）糖化血红蛋白标准化计划NGSP糖化血红蛋白标准化1、NGSP成立1996年美国国家糖化血红蛋白标准化计划（NationalGlycohemoglobinStandardizationProgram，NGSP）替代了美国临床化学学会（AACC）成立的糖化血红蛋白标准化委员会，7月开始工作。NGSP糖化血红蛋白标准化2、NGSP标准化①对厂商的测定方法进行校准，使厂商实验室糖化血红蛋白结果和NGSP网络实验室结果具有可比性；②厂商确认他们的产品，也和NGSP的网络实验室结果具有可比性；③各临床实验室参加室间评估，对具有NGSP实验室网络定值的新鲜全血样品检测，验证他们日常报告的结果可比性。NGSP对实验室的认证由NGSP的二级参考实验室来对实验室进行认证工作得到认证的实验室所测结果是可靠的认证标准：逐步提高认证有效期：1年我国目前有近20家实验室得到认证IFCC糖化血红蛋白标准化1、IFCC1995年IFCC成立HbA1c标准化工作组，旨在建立具有高计量学水准的参考系统，实现检测的统一国际标准，发展和确认了2个候选参考方法和HbA1c、HbA0（非糖化血红蛋白）参考物，作为全球可比性分析准确度的基础。•首先确定HbA1c被测量-糖化部分β-链N-缬氨酰-1-果糖基血红蛋白（HbA1c）可被IFCC参考测量程序特异地测量，所以计量上可溯源至具有“毫摩尔每摩尔（mmol/mol）”计量单位某物质组分。•IFCC参考测量系统-发布了参考物质，是人全血分离的血红蛋白-发表了检测人全血中HbA1c的IFCC参考方法-实施参考检测实验室的网络-在IFCC参考检测实验室和NGSP实施比较研究-产生二级参考物质，分发给厂商和实验室，使其方法校正至IFCC参考系统地区标准化和国际标准化的区别NGSP/JDS/Mono-S美国/日本/瑞典IFCC级别地区级糖化血红蛋白标准化计划国际糖化血红蛋白标准化计划国内指南否指南：标准化唯一有效的参考系统原理•非特异性，色谱峰识别，HbA1c和其他成分同时检出•特异性检测，通过参考方法(HPLC-ESI/MS,HPLC-CE)检测HbA1c分子标准品基于DCCT参考值得出的标准品根据纯化的HbA1c和HbA0得出参考物质，制成标准品CAPSURVEY(mean±2SD)7.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.020.021.0%GHB19932003TotalGHBDCCTTargetHbA1HbA1c2003年，99%实验室以HbA1c报告结果，室间CV5%，测定值与靶值的偏倚0.8%HbA1c国内、外变异度对比靶值：5.4最大值：6.3最小值：4.6变异系数：3.5我国室间质评CAP能力验证靶值：5.5最大值：7.2最小值：3.9变异系数：8.41所有仪器组2AbbottArchitectSystem/Aeroset组3Bio-RadHPLC组4TOSOHG7组5DrewDS5/Bio-RadDiastat组6其它仪器组7PrimusHPLC组8NycoCardReaderII组9ARKRAYHA-8160组10BeckmanSynchronSystems组11OlypusAUSystems组12RocheCOBAS,Roche/Hitachi组13惠中MQ-2000组第一阶段第二阶段项目目的：促进HbA1c在我国广泛和正确使用，促进HbA1c检测方法的标准化在全国30个省会城市和直辖市开展医务工作者培训在全国30个省份的59个城市展开展医务工作者培训会议同步在全国31个省份开展患者面授培训项目目标：覆盖全国89个城市，培训医务工作者约1.8万人。面授培训糖尿病患者约2万人，媒体宣传覆盖全国糖尿病患者约30万人中国糖化血红蛋白教育计划二HbA1c行业标准要求临床实验室质量控制流程分析前控制样品的采集、运送、接收和保存分析中控制人员：培训仪器和试剂：管理、性能评价文控：操作规程、记录质控：IQC、EQA分析后控制结果报告、解释、与临床诊断的符合程度样品采集、处理和储存检测样品不受饮食和采血时间的影响按照适用于临床实验室检测的常规方法采集静脉血，末端毛细血管血一般情况下，全血样品在4℃储存，可以稳定1周在-70℃或更低温度可以长期储存，至少稳定1年以上，但不宜在-20℃长期储存各实验室应有样本采集、运送、接收（拒收）和储存的具体要求并记录任何对样品的不当处理，如置于高温环境，可引入大量未知干扰，干扰程度取决于所用方法影响检测质量的因素人员：能力参差不齐室内质控：少做、不做校准：不能定期、定时校准，不使用配套校准品试剂：色谱柱（适用时）：超限使用仪器：不能定期维护、保养使用方法种类多，有的方法没有进行标准化认证检测方法的原理•不同方法测定糖化血红蛋白不同的组分–HbA1c、HbA1（A1a+A1b+A1c）或总糖化血红蛋白•目前皆以HbA1c或等同于HbA1c来报告结果原理电荷不同•离子交换色谱法•电泳结构不同•免疫法•亲和层析法、酶法6.1分析系统选择6.1.1应选用测定结果可溯源至IFCC参考方法的分析系统,包括仪器、试剂及校准物。•例如:获得NGSP认证。可选用专用糖化血红蛋白分析仪,或全自动生化、免疫分析仪。6.1.2NGSP认证的分析系统(方法)有效期为1年。•注:查询网址:。6.1.3不同分析系统干扰因素是不同的,实验室应知晓所选分析系统可能存在的干扰因素。•注1:常见的变异及衍生血红蛋白对HbA1c测定的影响参见。•注2:多数POC(point-of-care)方法的精准性不能满足临床需求,目前不能用于糖尿病的诊断。IFCC参考方法•特异测定HbA1c：β-链N-缬氨酰-1-果糖基血红蛋白（HbA1c）谷氨酸内切酶HbA1c六肽HbA0六肽测定HbA1c国际公认的参考方法为IFCC推荐的高效液相色谱串联电喷雾电离一级质谱或高效液相色谱串联毛细管电泳。测定方法主要分为三步:1、首先制备溶血液;2、采用蛋白内切酶Glu-C将溶血液酶解消化,得到糖基化和非糖基化的β链N末端六肽(HbA1c六肽﹑HbA0六肽);3、采用高效液相色谱串联电喷雾电离一级质谱或高效液相色谱串联毛细管电泳对HbA1c六肽和HbA0六肽进行定量分析。参考方法流程溶血液制备酶解HPLC串联毛细管电泳HPLC串联质谱HbA1c测定指定比对方法(DesignatedComparisonMethod,DCM)1、美国国家糖化血红蛋白标准化计划(NGSP)使用离子交换高效液相色谱法为参考方法,目前为HbA1c测定的指定比对方法。方法原理主要基于HbA1c与其他组分所带的电荷不同,分别洗脱检出,由于受技术条件的限制,不能特异测定HbA1c,有其他组分同时检出,因此,测定结果高于IFCC结果。NGSP高于IFCCIFCC参考实验室及NGSP参考实验室经过几年的比对,得出结论:NGSP测定结果与IFCC测定结果之间存在非常确定的相关性,可用回归方程表为:NGSP-HbA1c=0.0915×(IFCC-HbA1c)+2.15%(r2=0.998),因此,现行的NGSP结果可以溯源到IFCC参考系统,即可以溯源到溯源链的最高等级国际单位(SI单位)制。2、另外还有两个HbA1c测定的指定比对方法,一个为日本的KO500方法,另一个为瑞典的MonoS方法。三个指定比对方法测定结果与IFCC测定结果之间存在非常确定的相关性,皆可用回归方程表示,方法特异性从高到低的顺序依次为:IFCC方法、瑞典方法、日本方法、美国方法,因此,测定结果从高到低的顺序依次为:美国结果、日本结果