碳13检测方法

浅谈对尿素呼气试验的认识报告者：2014级全科规培学员一、幽门螺杆菌(Hp)检测的意义及方法二、幽门螺杆菌感染的诊断三、尿素呼气试验(UBT)原理及13C-UBT流程四、尿素呼气试验的优点五、尿素呼气试验假阴性的探讨一、幽门螺杆菌(Hp)检测的意义Hp感染及其相关疾病一直是消化领域的研究热点，现已明确Hp感染与慢性活动性胃炎，消化性溃疡，胃黏膜相关淋巴样组织（MALT）淋巴瘤和胃癌的发生密切相关，世界卫生组织将Hp定义为I类致癌原，因此Hp感染的检测和诊断具有重要临床意义。Hp世界感染率普遍高流行病学调查表明，我国成人Hp感染率达到40%~60%。一、幽门螺杆菌(Hp)检测的方法Hp的检测方法包括侵入性和非侵入性两类。侵入性检测方法依赖胃镜活检—快速尿素酶实验（RUT）—胃黏膜直接涂片染色镜检—胃黏膜组织切片染色镜检—细菌培养—基因方法检测（如PCR、基因芯片检测等）非侵入性检测方法不依赖胃镜检查—碳13或碳14尿素呼气试验（UBT）—粪便Hp抗原检测（HpSA）—血清及分泌物(唾液、尿液等)抗体检测二、幽门螺杆菌(Hp)感染的诊断符合下述三项之一者可判为现症感染：(1)胃黏膜组织RUT、组织切片染色或培养三项中任一项阳性；(2)碳13或碳14UBT阳性；(3)粪便Hp抗原检测（HpSA）检测阳性；血清Hp抗体检测（经临床验证、准确性高的试剂）阳性提示曾经感染，从未治疗者可视为现症感染。幽门螺杆菌(Hp)感染根除治疗后的判断应在根除治疗结束后至少4周后进行，首选UBT。符合下述三项之一者可判断为Hp根除：(1)碳13或碳14UBT阴性；(2)HpSA检测阴性；(3)基于胃窦、胃体两个部位取材的RUT均阴性。三、尿素呼气试验(UBT)原理Hp在体内产生大量的尿素酶，因此若给感染Hp的患者口服同位素标记的碳的尿素溶液，则尿素被分解后产生的同位素标记二氧化碳在小肠上端吸收后进入血液循环并随呼气呼出，可收集气体标本，用液体闪烁计数器或用气体同位素质谱仪检测同位素标记CO2的量。三、13C尿素呼气试验(UBT)流程1.受试者应在早上空腹时或禁食两小时以上受试。2.在贴有标签纸的2个气袋上，受试者填好所需资料。3.受试者维持正常呼气，将气体吹进气袋，直至气袋饱满，并立即扭紧气袋盖。此收集的为0分钟呼气。4.受试者用80~100ml凉饮水送服尿素13C颗粒一瓶后，静坐。三、13C尿素呼气试验(UBT)流程4.受试者用80-100ml凉饮水送服尿素13C颗粒一瓶后，静坐。5.受试者按上述收集呼气方法，收集服用尿素13C后30分钟的呼气，扭紧气袋盖。6.将收集的0分钟、30分钟分呼气气袋，在相应的仪器上进行13CO2的检测。7.常用δ‰来表示测定结果，称为千分差值。定义为：δ‰=1000×（13C-测定样品的同位素丰度—13C-参比样品的同位素丰度）/13C-参比样品的同位素丰度。三、13C尿素呼气试验(UBT)流程8.阳性值判断：幽门螺杆菌的诊断，通常以30分钟时样品的所测的13C-CO2的δ‰减去零时的呼气样品的δ‰值的差表示，即检测值=δ‰（30分钟）—δ‰（0分钟）。阳性判断值≥4.0±0.4时，可判定受试者为Hp阳性。图1.两个集气袋，服药前后用图2.用凉饮水冲服尿素13C颗粒图3.将收集的气袋，在仪器上进行13CO2的检测。图4.检查结果，DOB值≥4.0为阳性四、尿素呼气试验(UBT)的优点UBT可反映全胃Hp感染状况，克服了依赖于胃黏膜活检的检测方法因细菌灶性分布而造成的假阴性，准确性高且安全、无创、易于操作，是目前临床上开展最为广泛的Hp感染检测方法。UBT阳性可以诊断Hp现症感染，同时也是Hp感染根除治疗后复查的首选方法13C-UBT敏感性90%，特异性100%；UTB临床上应用最为广泛，恰恰该引起我们应思考，哪些因素可能影响检测结果的准确性？临床上研究发现在上消化道出血、胃大部切除术后、萎缩性胃炎等检测Hp时假阴性率高。五、尿素呼气试验(UBT)假阴性的探讨上消化道出血导致UBT结果阴性的可能原因为：1)Hp为微需氧菌，环境氧要求为5%~8%,在大气环境和高氧环境中不能生长。2)体外实验中，环境pH值上升至4.0~5.0时，尿素酶活性进行性降低。3)消化道出血时，胃内血液一方面可中和胃酸，提高胃内pH值，另一方面可释放大量氧气抑制Hp生长，导致UBT有较高的假阴性率。（有研究显示，假阴性率达38.7%、62.5%）五、尿素呼气试验(UBT)假阴性的探讨胆汁反流导致UBT结果阴性的可能原因为：1)胆汁反流至胃腔可破坏胃黏膜屏障，破坏粘膜下环境，不利于Hp生长；2)同时胆酸对Hp具有强烈抑制作用，在高浓度胆汁酸的作用下，Hp外形浓缩成团块状而失去活性，Hp生长受抑导致胃内Hp密度降低，可能造成胃内胆汁反流患者UBT假阴性率增高。五、尿素呼气试验(UBT)假阴性的探讨胃大部切除术后导致UBT假阴性可能的原因为：1)胃大部切除术后患者胃内Hp密度降低，同时残胃的排空速度加快，是标记的尿素在胃内停留的时间变短，难以与胃黏膜充分接触，从而影响呼气中的标记碳的CO2含量，导致UBT假阴性率增高。2)此外，胃大部切除术后所致的胃内胆汁反流以及残胃胃酸缺乏、pH值升高，可能亦是UBT假阴性率增高的原因之一。五、尿素呼气试验(UBT)假阴性的探讨临床上应重视胃黏膜病变本身对UBT结果的影响。对于有胃大部切除术史者以及合并胃内胆汁反流、上消化道出血者、MALT淋巴瘤、萎缩性胃炎、近期或正在应用PPI或抗生素时，有可能使许多检测方法（血清学检测外）包括UBT、RUT、细菌培养、组织学呈现假阴性，此时推荐血清学试验或多种方法检查确认。血清抗体检测：检测的抗体是IgG，反映一段时间内Hp感染情况，Hp根除后血清抗体可以维持很久（数月至数年），因此不能用于治疗后复查。本法主要适用于流行病学调查，在消化性溃疡出血或胃MALT淋巴瘤等可作为现症感染的诊断手段。《2012年第四次全国幽门螺杆菌感染处理报告共识》《幽门螺杆菌感染处理中若干问题共识解读》胡伏莲北京大学第一医院《14C-尿素呼气试验假阴性原因探讨》高峰李文晓石子河大学医学院参考文献:谢谢聆听！Nowadays,animalsarecrullykilled.Asamatteroffact,aninalsarefriendsofhumanbeings,andtheyhaverightsaswell.Therefore,weshouldprotectanimalrights.Inourdailylife,wecandosomethingstoprotectanimalrights.First,weshouldimprovethelivingenvironmentofanimals.Forexample,weshouldnotkeepanimalsaspetsandinzoos,andwecannotexploitthemtomakemoney.Andthen,wecannotuseanimalstodomedicineexperiments.Newmedicinesandvaccinescanbesafelydevelopedwithoutanimaltesting,whywemustuseanimals?Themostimportant,weshoulddonotkillwildanimals,donotusethefuroftheanimalstomakeclothes,donoteatthewildanimals'meat.Itisnothumannaturetoeatmeatoftheanimals.Animalsbelongstothenatureandtheyarefree.Inaword,wetreatthemashumanbeingsandprotectthem,fortheyhavetheirrights