封闭抗体

封闭抗体与免疫治疗的临床应用问题思考：1：我们现有两种检测封闭抗体的方法（流式，ELISA），哪种检测更为准确？2：有些孕妇孕检过程中检测封闭抗体，意义何在？目录1：封闭抗体简介2：封闭抗体检测类别文献3：封闭抗体检测方法学文献3：淋巴细胞免疫治疗反复性自然流产的定义流产妊娠不足28周，胎儿体重不足1000g而终止者称为流产。自然流产孕20周前，胚胎或胎儿因某种原因自动脱离母体而排出者反复性自然流产的定义反复性自然流产（RSA）自然流产连续或不连续发生2次或2次以上者，约占总妊娠数的0.5%-3.0%习惯性流产连续流产3次或以上者流产的病因•遗传因素•内分泌因素•解剖因素•感染因素•血栓前状态•精神、心理因素•免疫因素①遗传因素约占4.5%-25%。②内分泌因素约占13%-20%。③生殖器官异常约占12%-15%。④感染因素约占2%。除此之外，原因不明者约占40%～60.00%，其中80%与免疫因素有关。•一、自身免疫型免疫因素—免疫类型1、抗心磷酯抗体（APL）（占1/3）2、抗核抗体（ANA）3、抗精子抗体（ASA）4、抗子宫内膜抗体（AEA）5、抗卵巢抗体（AOA）6、抗滋养细胞抗体（ATA）7、RH血型抗体•二、同种免疫型主要是封闭抗体免疫因素—免疫状态封闭抗体的概念•在正常孕妇的血清中，存在一种抗配偶淋巴细胞的特异性IgG抗体，既抗丈夫淋巴细胞抗体(Antipatemallymphocyteantibody,APLA)，它可抑制淋巴细胞反应（MLR），封闭母体淋巴细胞对培养的滋养层的细胞毒作用，防止辅助T细胞识别胎儿抗原的抑制物，并可阻止母亲免疫系统对胚胎的攻击。封闭抗体封闭同种抗原刺激的淋巴细胞产生巨噬细胞移动抑制因子（MIF），故称其为封闭抗体（blockingantibodies,BA）。封闭抗体是人类白细胞抗原(HLA)、滋养层及淋巴细胞交叉反应抗原(TLX)等刺激母体免疫系统，所产生的一类IgG型抗体。“封闭抗体”有很多种，至少包括：抗HLA-D/DR抗体、抗丈夫淋巴细胞毒抗体(APCA)、抗TLX抗体(滋养层及淋巴细胞交叉反应抗体，Ab1)、抗独特型抗体（Ab2）、混合淋巴细胞反应封闭抗体(MLR-Bf)、抗Fc受体抗体等封闭抗体的检测适用人群有：1）不育症患者（无精症患者除外）2）习惯性流产，胚胎停育患者；3）有不良生育史的患者；4）为了优生自愿做检查着。单项混合淋巴细胞反应封闭抗体（ME-BE）补体依赖性细胞毒试验（CDC）封闭抗体酶联免疫法（ELISA)EA玫瑰光环抑制试验（EAI）流式细胞术分析封闭抗体（FCM-CD-BE）二：检测方法：封闭抗体检测类别文献1：（总称）抗丈夫淋巴细胞抗体（Antipaternallymphocyteantibody，APLA）2：抗HLA-D/DR抗体3：抗Fc受体抗体4：流式检测文献1：抗丈夫淋巴细胞抗体（APLA）2：抗HLA-D/DR抗体3：抗Fc受体抗体4：流式检测文献封闭抗体检测方法学比较文献1：CDC法与ELISA法检测比较2：流式检测与ELISA法检测比较3:流式不同厂家间抗体检测比较一：CDC法与ELISA法检测比较优点：CDC法采用RSA患者丈夫的活体淋巴细胞，必须在补体介导下才能发挥效应，可反应RSA患者体内补体依赖型封闭抗体的总体水平，即丈夫APCA的总体水平，包括IgM和IgG抗体，是1种直接检测其封闭效应的方法。缺点：CDC法可反映RSA患者体内补体依赖型BA的总体水平，但敏感性较差。优点：ELISA法检测的是RSA患者广谱的HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗体，检测的是IgG抗体，包括无反应的抗体和丈夫淋巴细胞主动免疫治疗前可能存在的IgG抗体，但不包括IgM型抗体，HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗体(Ab1)强阳性可间接预期有较高的抗独特型抗体(Ab2抗体)水平，是一种间接检测封闭效应的方法。缺点：ELISA法检测HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗体的灵敏度较高，但它所能检出的抗体仅限于反应格局内的抗体，如产生的抗体不在此检测范围内也可能造成漏检。二：流式检测与ELISA法检测比较IF=1.695OneLambdaAntigenTraytest(OLATT)flowcytometriccrossmatch(FCXM).Insummary,theOLATTappearstobeaninterestingtoolthatallowseasyandinexpensivescreeningofRPLpatientsforanti-paternalantibodies.HoweveritappearsmandatorytofurthertestOLATTpositiveRPL-patientsforHLAspecificityoftheirantipaternalantibodiesbecauseonlynon-HLAantibodieshavebeenassociatedwithimmunologicalreactionsthatareharmfulforpregnancies.由于流式细胞仪在各实验室尚未普及，目前ＦＣＭ法检测ＢＡ的报道并不多见，应用不同厂家单克隆抗体测定ＢＡ的结果是否具有一致性，对临床决策有何影响？这一方面尚未见文献报道。为此，本实验室采用ＦＣＭ法，同时应用ＢＤ公司及ＢＣ公司的复合ＣＤ４／ＣＤ８／ＣＤ３三色荧光抗体，检测３０例ＲＳＡ患者的ＢＡ，比较两种试剂检查结果的差异。3:流式不同厂家间抗体检测比较文献从ＣＤ３／ＣＤ８散点图十字设门可见，ＢＤ抗体存在ＣＤ３＋ＣＤ８＋双阳性细胞与ＣＤ３＋单阳性细胞粘连较重的情况，而ＢＣ抗体两群细胞分布界限明显。以封闭效率小于０为阴性，则ＢＤ组检出５４项阴性而ＢＣ组检出４５项阴性，可见ＢＤ抗体灵敏度较高，两组差异也主要表现在对ＣＤ８－ＢＥ的检出率不同，ＢＣ组检出ＣＤ８－ＢＡ阴性１４项，而ＢＤ组检出２１项。结论：实验室应明确选用一种合适的抗体用于封闭抗体检测，不可随意更换试剂厂商，尤其是对同一患者治疗前后比较封闭抗体水平的变化时，更应采用相同的抗体，必要时可引入多种检测方法进行比较。免疫治疗文献文献1：混合淋巴细胞反应封闭抗体(MLR-Bf)缺乏进行丈夫淋巴细胞治疗IF=2.472mixedlymphocytereactionblockingantibodies(MLR-Bf)•治疗方法1、配制淋巴细胞浓缩液（T细胞，B细胞），4管，每管0.25ml2、淋巴细胞计数为：5×106/ml3、双侧前臂：皮内（ID），肌肉（IM），皮下（SC）和静脉（IV）多点注射（注射4针）.4、每4周一次，最多注射6次至MLR-Bf滴度＞305、封闭抗体上升，或微细胞毒交叉试验阳性即可受孕，怀孕12,24和36周评估封闭抗体含量。6、妊娠成功率达75%—85%。免疫治疗TheexactmechanismofPLimmunizationinwomenwithRSAisstillnotclear。SomeoftherecentstudiessuggestedthatPLimmunizationisalsocorrelatedwiththemodulationofimmunityinwomenwithunexplainedRSAasitreducedtheNKcellactivityandperformedtheshiftfromTh1-typereactivitytoTh2-typereactivity.谢谢！