1第五节挥发性成分分析•一、概述挥发性成分是指中药中一类具有芳香气并易挥发的成分,其化学组成复杂,主要包括挥发油类成分和其他分子量较小、易挥发的化合物。挥发油通常情况下为具有特殊而浓烈气味的油状液体,具挥发性,可随水蒸气蒸馏。常见中药•肉桂、防风、川芎、薄荷、广藿香、荆芥、小茴香、当归、细辛、砂仁、丁香、苍术、香附、菊花、白术、紫苏、木香、香薷•止咳、平喘、发汗、解表、驱风、镇痛、抗菌4二、一般性质•中药制剂中挥发性成分主要指挥发油,多数挥发油比重小于1,一般在0.85~1.065之间,沸点在70℃~300℃之间;具有强烈的折光性,折光率在1.43~1.61之间;不溶于水而溶于大多数有机溶剂中,在高浓度的乙醇中能全部溶解。5显色反应:•含有酚类成分,加入三氯化铁的乙醇溶液,可产生蓝色、蓝紫色、或绿色反应。•含有羰基化合物,加入苯肼或苯肼衍生物、羟胺试剂,可生成结晶性的衍生物。•含有醛类化合物,加入硝酸银氨试液,可发生银镜反应。•含有内酯类化合物,于样品的吡啶溶液中加入亚硝酰铁氰化钠及氢氧化钠溶液,出现红色并逐渐消失。•含有不饱和化合物,于样品中加入溴。红棕色褪去。•含有肟类衍生物,加入浓硫酸,可产生蓝色或紫色反应。6三、鉴别(一)化学反应法-利用挥发性成分的结构或功能基的化学性质进行鉴别,但专属性不强。例三妙丸中挥发性成分的鉴别处方苍术、黄柏、牛膝取样品2g,置具塞试管中,加乙醚10ml,振摇10分钟,取上清液2ml,置具塞试管中,加高锰酸钾试液2滴,振摇1分钟,红色即消失。7例冰硼散中冰片(合成龙脑)的鉴别处方冰片、硼砂(煅)、朱砂、玄明粉取本品0.5g,加乙醚10ml,振摇,滤过,滤液置蒸发皿中,放置,俟乙醚挥发后,加新配制的1%香草醛硫酸溶液1~2滴,显紫色。8三、鉴别(二)薄层色谱法吸附剂:硅胶、氧化铝等展开剂:常用石油醚或正己烷,也可使用其它展开剂,如苯、乙醚、四氯化碳、氯仿、乙酸乙酯以及不同比例的混合展开剂9显色剂:•香草醛-浓硫酸试剂:与挥发油中各成分产生多种鲜艳的颜色•2%高锰酸钾水溶液:在粉红色背景下产生黄色斑点时表明含不饱和化合物•荧光素-溴试剂:在长波长的紫外灯下观察,如薄层显黄色荧光,表明含乙烯基化合物•2,4二硝基苯肼试剂:如产生黄色斑点,表明可能含有醛或酮类化合物10显色剂•异羟肟酸铁试剂:如产生淡红色斑点,表明含有内酯类化合物•三氯化铁试剂:斑点显蓝色或绿色,表明含有酚性物质•0.05%溴酚蓝乙醇溶液:斑点显黄色,表明含酸类物质•硝酸铈铵试剂:在黄色背景上显棕色斑点,表明含有醇类物质•碘化钾-冰醋酸-淀粉试剂:斑点显蓝色表明含过氧化物11例避瘟散中薄荷脑、冰片的鉴别处方檀香、白芷、丁香、木香、冰片、薄荷脑等。取本品0.5g,置具塞锥形瓶中,加石油醚(30~60℃)10ml,振摇数分钟,滤过,滤液低温浓缩至约2ml,作为供试品溶液。另取薄荷脑、冰片对照品,加石油醚(30~60℃)制成每1ml含0.5mg的混合溶液,作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各10µl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环已烷-乙酸乙酯(17:3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。12(三)气相色谱法•常用对照品对照法进行定性鉴别,即在相同的色谱条件下测定供试品与对照品的保留时间,以确定某组分的存在与否图一薄荷酮、胡薄荷酮混合对照品溶液GC图图二制剂GC图13四、含量测定•总挥发油测定:采用挥发油测定器,用蒸馏法测定,可分别测定相对密度在1.0以下和1.0以上的挥发油含量•单一成分测定:主要采用GC、TLCS、HPLC14例冠心苏合丸中冰片的含量测定处方苏合香、冰片、乳香、檀香、青木香色谱条件与系统适应性试验:以聚乙二醇(PEG)-20M为固定相,涂布浓度为10%;柱温为140℃;理论塔板数按十五烷峰计算应不低于1200。校正因子测定取十五烷适量,精密称定,加乙酸乙酯制成每1ml含7mg的溶液,作为内标溶液。另取冰片对照品约10mg,精密称定,置5ml量瓶中,精密加入内标溶液1ml,加乙酸乙酯至刻度,摇匀,取1µl注入气相色谱仪,计算校正因子。15测定法取本品10丸,精密称定,研细;或取本品10丸,精密称定,每丸各取四分之一,合并,精密称定,精密加入等量硅藻土,研匀。取适量(约相当于冰片12mg),精密称定,置具塞试管中,精密加入内标溶液1ml与乙酸乙酯4ml,密塞,振摇使冰片溶解,静置,取上清液1µl,注入气相色谱仪,测定,以龙脑、异龙脑峰面积之和计算,即得。16例养阴清肺丸中丹皮酚的含量测定处方地黄、牡丹皮、麦冬、甘草、白芍等。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水-冰醋酸(33﹕67﹕2)为流动相;检测波长为274nm。对照品溶液的制备取丹皮酚对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得。17供试品溶液的制备取重量差异项下的本品,剪碎,混匀,取约1g,精密称定,精密加入甲醇50ml,称定重量,加热回流1小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl,注入液相色谱仪中,测定,即得。