9临床常用免疫学检测-精选文档

第一节体液免疫检测一、免疫球蛋白immunoglobulinIg是指具有抗体活性或化学结构上与抗体相似的球蛋白，由浆细胞合成与分泌，存在于机体的血液、体液、分泌液和部分细胞的膜上，共有五大类。免疫球蛋白分5种，重链：IgAIgGIgMIgDIgE轻链：κ:λ=2:1重链（H链）和轻链（L链）可变区和恒定区免疫球蛋白IgGIgG主要由脾、淋巴结中的浆细胞合成和分泌，以单体形式存在。在个体发育过程中机体合成IgG的年龄要晚于IgM，在出生后的第三个月开始合成，3~5岁接近成年人的水平。40岁后逐渐下降。含量最多，抗细菌、病毒的主体，是唯一能通过胎盘屏障的Ig。生理变化：自然被动免疫胎儿从母体内获得IgG，然后逐渐减低，随着婴幼儿合成IgG，逐渐升高。病理IgG增高：各种慢性感染、慢性肝病、自身免疫性疾病、免疫增殖病病理IgG降低：免疫缺陷病、重链病、轻链病等临床意义IgA在正常人血清中的含量仅次于IgG，占血清免疫球蛋白含量的10～20%。血清型IgA存在于血清中，其含量占总IgA的85%左右，有IgG和IgM的某些功能。IgA分为分泌型和血清型。IgA不能通过胎盘。新生儿血清中无IgA抗体，但可从母乳中获得分泌型IgA。分泌型IgA存在于分泌液中，如唾液、泪液、初乳、鼻和支气管分泌液、胃肠液、尿液、汗液等。分泌型IgA是机体粘膜局部抗感染免疫的主要抗体，故又称粘膜局部抗体。增高：IgA型MM、SLE、类风湿降低：反复呼吸道感染IgAIgMIgM占血清免疫球蛋白总量的5%-10%，血清浓度约1mg/ml。单体IgM以膜结合型（mIgM)表达于细胞表面，构成B细胞抗原受体（BCR)。分泌型IgM为五聚体，是分子量最大的Ig，沉降系数为19S，称为巨球蛋白。在感染过程中IgM首先出现，但持续时间不长，是近期感染的标志。增高：初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿、SLE等。宫内感染、巨球蛋白血症，无症状性单克隆IgM病等。降低：IgG型重链病、IgA型MM、先天性免疫缺陷病、免疫抑制剂治疗等。IgD：含量少，功能不详。IgE：介导一型超敏反应增高：IgE型MM、重链病、过敏性哮喘等降低：先天性或获得性丙种球蛋白缺乏症1、单克隆免疫球蛋白增高：即仅一种Ig增高，见于免疫增殖性疾病。M蛋白是指丙种球蛋白如骨髓瘤、巨蛋白血症及恶性淋巴瘤等患者血清中出现的大量结构单一、但活性极低的免疫球蛋白。这几个病名的词首都是M，故称M蛋白。BIgG型浆细胞骨髓瘤C原发性巨球蛋白血症A正常人2、多克隆性免疫球蛋白增高：机体受抗原刺激后，引起多株浆细胞过度增生而引起多种Ig同时增高。3、免疫球蛋白减少：免疫缺陷病A正常人D多克隆性球蛋白血症E低球蛋白血症多发性骨髓瘤multiplemyeloma：x线摄片可见脊椎骨质疏松。多发性骨髓瘤：颅骨x线像，局部呈虫蚀状变化多发性骨髓瘤:椎骨髓腔内瘤组织形成灰红色结节，骨质破坏。多发性骨髓瘤的颅骨:颅盖见多个圆形红色骨髓瘤结节多发性骨髓瘤:颅骨内可见暗红色的肿瘤结节，骨质缺损多发性骨髓瘤:左锁骨外侧见灰白色小结节，内侧生长一直径4cm的出血性肿瘤多发性骨髓瘤:脊椎骨骨质缺损，出现病理性骨折多发性骨髓瘤:（腰椎骨骨髓）骨髓内多发性大小不等的结节状增生性病灶。多发性骨髓瘤：骨髓内可见异型性明显的浆细胞增生，细胞核圆形，胞浆丰富，略嗜碱性，并可见双核细胞多发性骨髓瘤:增生的浆细胞:λ链染色阳性，κ链染色阴性。阳性反应细胞浆呈棕褐色。多发性骨髓瘤:肾内可见灰黄色均质肿瘤组织浸润。多发性骨髓瘤肾：肾呈灰白色。多发性骨髓瘤:睾丸内可见灰黄色均质肿瘤组织浸润。多发性骨髓瘤肾:肾小管扩张，上皮变性脱落，内有蛋白管型多发性骨髓瘤：骨髓涂片可见骨髓瘤，瘤细胞核偏位多发性骨髓瘤：骨髓组织内可见各阶段的浆细胞浸润。多发性骨髓瘤:骨髓被浆细胞取代，一些浆细胞异形，极少见核分裂。多发性骨髓瘤:leishman染色的骨髓涂片，胞浆嗜碱性，其中一个浆细胞多核，可见近核的空晕。巨球蛋白血症：骨髓内弥漫性增生的有核细胞类似淋巴细胞。细胞浆丰富，略嗜碱性。细胞核内可见嗜酸性包含体（dutcher小体）。原发性巨球蛋白血症:淋巴结切片示大量浆样淋巴细胞巨球蛋白血症:骨髓涂片。浆样细胞，胞浆嗜碱性，淡透明。原发性巨球蛋白血症:淋巴结切片pas示核内免疫球蛋白阳性。原发性巨球蛋白血症:骨髓涂片，示浆样淋巴细胞缗钱状分布红细胞重链病淋巴结免疫球蛋白重链病：多形性浆细胞与淋巴细胞混合。重链病:肠粘膜固有层内大量接近成熟的浆细胞弥漫浸润。重链病：小肠粘膜浆细胞弥漫浸润。重链病：淋巴结内多形性浆细胞浸润。二、血清补体测定补体(Complement,C)是一组存在于人和脊椎动物及组织中具有酶样活性、不耐热和功能上连续反应的糖蛋白，由传统途径的九种成分（C142356789），旁路途径的三种成分及其衍生物，B、D、P、H、I等因子组成。是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件。（一）总补体溶血活性测定CH50以溶血素（抗体）致敏的绵羊红细胞（抗原抗体复合物）激活待测血清中的C1，进而引起补体活化的连锁发应，在绵羊红细胞上形成多分子聚合物，导致绵羊红细胞溶解。一般以50%溶血为检测终点CH50SRBCY抗体AbYSRBCT补体TTTTTTTCCCC溶血SRBCYYYYYYCCCC10100305070901234CH50增高：急性炎症、组织损伤、某些恶性肿瘤CH50减低：各种免疫复合物疾病，如肾小球肾炎、SLE、遗传性补体成分缺乏症。（二）补体C1q检测增加：骨髓炎、类风湿、痛风降低：SLE、混合型结缔组织病（三）补体C3检测增高：急性炎症、传染病早期降低：急性肾小球肾炎、狼疮性肾炎等。（四）补体C4检测升高：急性风湿热、结节性动脉炎降低：自身免疫性肝炎、狼疮肾炎（五）补体旁路B因子检测同补体旁路途径活性检测增高：自身免疫疾病、肾病综合征降低：肝病、急性肾小球肾炎第二节细胞免疫检测人体的淋巴细胞分为T、B和NK等细胞群，他们又分别有若干亚群，各有其特异的表面标志和功能。淋巴细胞主要包括T淋巴细胞（CD3+）B淋巴细胞（CD19+）NK细胞（CD16+CD56+）一、T细胞亚群的检测（一）T细胞花结形成试验用于检测T细胞的数量降低：免疫缺陷病，如恶性肿瘤、免疫性疾病、某些病毒感染、大面积烧伤增高：甲亢、甲状腺炎、重症肌无力、慢活肝、器官移植排斥T淋巴细胞被植物血凝素PHA和刀豆蛋白A刺激，出现母细胞化。（二）T细胞转化反映T细胞的免疫功能(三)T细胞分化抗原测定T细胞表面有多种抗原，统称为白细胞分化抗原CD。CD3代表总T细胞CD4代表T辅助T细胞，THCD8细胞毒性T细胞，TC(大多)抑制细胞，TS(少数)[临床意义]CD3降低：自身免疫性疾病，如SLE、类风湿关节炎等。CD4降低：恶性肿瘤、免疫缺陷CD8降低：自身免疫性疾病、变态反应性疾病CD4/CD8比值增高：排斥反应CD4/CD8比值降低：艾滋病二、B细胞分化抗原检测应用CD19、CD20和CD22等单克隆抗体，分别与B细胞表面抗原结合，求出CD19、CD20和CD22等阳性百分率和B淋巴细胞数。升高:急性淋巴细胞白血病降低:无丙球、化疗、免疫抑制剂三、自然杀伤细胞免疫检测1、自然杀伤细胞活性测定NK细胞介导天然免疫应答，不依赖抗体和补体，即能直接杀伤靶细胞，如肿瘤细胞或受病毒感染的细胞等。增高：抗肿瘤、抗病毒感染降低：免疫缺陷、艾滋病NKT细胞与CD4细胞共同作用抗肿瘤免疫的细胞效应机制2、抗体依赖性细胞介导的细胞毒测定ADCC作用，这类细胞表面有Fc受体，当相应的抗体结合后，抗体被激活，ADCC细胞得以与抗体的Fc受体段结合，引起靶细胞的杀伤与破坏。增高：自身免疫性疾病降低：恶性肿瘤、免疫缺陷病等抗体依赖细胞介导的细胞毒作用四、细胞因子检测细胞因子CK是活化免疫细胞为主分泌产生的免疫调节性小分子多肽，检测其可了解免疫活性细胞及其它细胞的免疫功能，临床上常见有白介素IL、肿瘤坏死因子TNF、干扰素IFN、集落刺激因子CSF、红细胞生成素EPO等。细胞因子1、IL-2活性和IL-2受体测定IL-2是白细胞介素中的一种，主要由活化T细胞产生，是具有多向性作用的细胞因子。它对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用。IL-2:年龄;IL-2:自身免疫疾病IL-2R：急性排斥反应和免疫疾病2、肿瘤坏死因子测定TNF-单核细胞、吞噬细胞TNF-T淋巴细胞都具能引起肿瘤组织出血、坏死和杀伤作用，都可引起抗感染的炎症反应效应，以及对免疫细胞的调节、诱生作用。有炎症介质作用、抗感染效应、抗肿瘤作用TNFα抑制剂作用示意图HIV-I:Nef-Fas和TNF的反向作用因子3、干扰素IFN测定IFN是宿主细胞受病毒感染后产生的一种非特异性防御因子，具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、控制细胞增殖的作用。增高：急性病毒感染、SLE降低：乙肝及其携带者、哮喘、活动性类风湿关节炎干扰素-Γ受体缺陷病干扰素-Γ受体缺陷病干扰素-γ受体(IFN-γR1)缺陷为常染色体隐性遗传性疾病以严重的分枝杆菌、沙门菌感染以及卡介苗(BCG)接种引起播散性感染为特征。第三节肿瘤标志物检测肿瘤标志物(tumormarker)是由肿瘤细胞本身合成、释放或由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。这类物质可反映细胞恶变各个阶段的表型及基因特征性。主要包括蛋白质类、糖类和酶类肿瘤标志物。理想的肿瘤标志物条件①特异性高；②灵敏度高；③器官特异性，可对肿瘤进行定位；④肿瘤标志物浓度变化与肿瘤的大小、生长、消退、转移、恶性程度有直接的定性或定量的比例关系；⑤易检测出，取材方便，检出方法简单灵敏。一、蛋白质肿瘤标志物的检测1.甲胎蛋白AFP甲胎蛋白是一种糖蛋白，主要来自胚胎的肝细胞，胎儿出生约两周后甲胎蛋白从血液中消失。阳性：肝癌、生殖腺胚胎肿瘤、胎儿产前监测原发性肝癌阳性率：67.8%-74.4%约18%原发性肝癌呈假阴性临床意义1.原发性肝细胞癌患者，约80～90％出现升高，400ug/L为诊断肝癌的医学决定水平。如果血清AFP持续大于400ng/ml，持续4周以上，转氨酶正常，应高度怀疑肝癌。2.病毒性肝炎、肝硬化，AFP升高为散在性和暂时性的，前者常50ug/L，后者300ug/L。3.其它消化道和生殖系统癌症，有升高。4.妊娠峰值为380～500ug/L。肝细胞癌大体标本原发性肝癌（块状型）原发性肝癌(结节型)原发性肝癌（小癌型）畸胎瘤2.癌胚抗原CEA：胃肠肿瘤正常胚胎组织所产生的成分，出生后逐渐消失，或仅存极微量。当内胚叶起源的消化系统癌变时，此类抗原表达可明显增多。CEA升高常见于大肠癌、胰腺癌、胃癌、小细胞肺癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌等。但吸烟、妊娠期和心血管疾病、糖尿病、非特异性结肠炎等疾病，也会出现假阳性。临床意义癌胚抗原的阳性率：胰腺癌为88%-91%，肺癌为76%，结肠癌为73%，肝癌为88%-96%，乳腺癌、卵巢癌为73%。CEA超过20ng/ml时往往提示有消化道肿瘤。但吸烟、妊娠期和心血管疾病、糖尿病、非特异性结肠炎等疾病，15％-53％的病人血清CEA也会升高。协助诊断消化系统恶性肿瘤；同AFP协同可对肝癌进行鉴别诊断：AFP阳性，CEA阴性多为原发性肝癌；两者都阳性或CEA阳性多为继发性肝癌。乳腺癌、胃癌和肺癌的第二标志物；消化系统炎症可有升高。甲状腺髓样癌结肠癌直肠癌3.组织多肽抗原TPA：恶性肿瘤组织多肽抗原是存在于胎盘和大部分肿瘤组织细胞膜和细胞质中的一种单链多肽。在恶性肿瘤患者血清中的检出率很高，但它的增高与肿瘤发生部位和组织类型无相关性。有助于恶性肿瘤的预后判断和治疗监测恶性肿瘤患者血清TPA水平可显著升高。经治疗好转后，TPA水平降低；若TPA再次增高，提示有肿瘤复发。4.前列腺特异抗原PSA:前列腺癌是前列腺分泌的单链糖蛋白。对前列腺癌的早期诊断和筛选，4ng/ml；以TPSA4.2ng/ml，F/T0.11为前列腺癌的诊断指标