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临床微生物检验1、微生物的分类：（三型八大类)**全部是重点**三型八大类特点非细胞型微生物病毒、亚病毒和朊粒无细胞结构，结构最简单，体积最微小，能通过滤菌器；单一核酸；活细胞内寄生。自我复制方式进行增殖原核细胞型微生物细菌、放线菌、螺旋体、支原体、衣原体、立克次体仅有原始核；缺乏完整细胞器。真核细胞型微生物真菌、原虫细胞核分化程度较高；有丝分裂进行繁殖；有多种完整细胞器。2、（正常菌群）条件致病性微生物——临床上多引起内源性感染。3、G+菌特有成分：磷壁酸（重要表面抗原，可用于细菌血清学分型）（外毒素）4、G-菌特有成分：外膜层（由脂多糖（内毒素）、脂质双层（磷脂）、脂蛋白）5、G+菌和G-菌细胞壁的共同成分是肽聚糖。结构由聚糖骨架、四肽侧链和五肽交联桥（G-菌无。是溶菌酶、青霉素作用部位）6、细菌的主要遗传物质：核质（染色体）、质粒（存在于胞质，双链闭合环状DNA分子）、转位因子7、细菌特殊结构：荚膜（保护，致病，抗原性，鉴别）、芽胞、鞭毛（运动器官）、菌毛（普通菌毛—粘附，致病性；性菌毛—接合方式转移遗传物质）*将芽胞是否被杀死而作为判断灭菌效果的指标8、L型（细胞壁缺陷）菌落：①“油煎蛋”（荷包蛋）样菌落（典型L型细菌）。②颗粒型菌落（简称G型菌落）③丝状菌落（简称F型菌落）。高渗环境生长。（环丙沙星）9、自营菌：以无机物为原料；异营菌(腐生菌：以无生命的有机物质为营养物质；寄生菌：以宿主体内有机物为原料),所有致病菌都是异营菌。10、细菌营养物质：水、碳源、氮源、无机盐类和生长因子。11、细菌个体的生长繁殖方式：无性二分裂，在对数期以几何级数增长12、细菌分类（伯杰）等级依次为界、门、纲、目、科、属、种（最小分类单位）。13、常用的细菌培养方法是：需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法；14、通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5%～10%CO2的气缸中培养，大部分细菌可于24～48h生长良好。15、血清学诊断时，一般要在病程早期和晚期分别采血清标本2～3份检查，抗体效价呈4倍或以上增长才有价值。16、透射电子显微镜适于观察细菌内部的超微结构；扫描电子显微镜适于对细菌表面结构及附件的观察。17、细菌染色的基本程序：涂片（干燥）→固定→初染→染色（媒染）→（脱色）→（复染，使脱色菌体着色）。18、胃部细菌喜酸，肠道细菌喜碱19、SS琼脂有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。因选择性过强，可影响检出率，所以，使用时最好加一种弱选择平板以配对互补。20、碱性琼脂或TCBS琼脂用于从粪便中分离霍乱弧菌及其他弧菌。21、痰标本：血平板、中国蓝／麦康凯、巧克力平板作分离。22、中国蓝／麦康凯用于筛选G-杆菌；23、含杆菌肽的巧克力平板（含有V和X因子）用于筛选嗜血杆菌24、连续划线分离法：杂菌不多的标本。分区划线分离法：杂菌量较多的标本。25、斜面接种法：该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性26、倾注平板法：牛乳、饮水和尿液细菌计数27、涂布接种法：常用于纸片法药物敏感性测定，也可用于被检标本中的细菌计数。28、半固体培养基用于观察细菌的动力（沿穿刺线生长呈模糊或根须状，并使培养基变混浊为动力阳性）29、α溶血：菌落周围血培养基变为绿色环状；红细胞外形完整无缺。β溶血：红细胞的溶解在菌落周围形成一个完全清晰透明的环。γ溶血：无溶血。双环：在菌落周围完全溶解的晕圈外有一个部分溶血的第二圆圈。30、氧化-发酵试验（O/F试验）：有氧参加——氧化型；无氧降解——发酵型；不分解葡萄糖而分解蛋白胨——产碱型。（肠杆菌科细菌发酵型全+）31、甲基红试验(与V-P试验相反)：阳性红色，阴性黄色。大肠埃希菌（+），产气肠杆菌(-)32、白喉棒状杆菌：G+，异染颗粒、毒力试验，Elek平板，亚碲酸钾血琼脂。外毒素（毒血症）只有携带β-棒状噬菌体的溶原性白喉杆菌才能产生外毒素。33、内毒素测定主要用于确诊患者是否发生G-细菌感染。常采用鲎试验。本方法灵敏度高，可检查出0.0005～0.005μg/ml内毒素。外毒素主要用于确诊患者是否感染革兰阳性菌及部分阴性菌。常用体内及体外毒力试验检测，也可通过ELISA法测定。34、葡萄球菌属：G+，耐热、耐干燥、耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。凝固酶阳性葡萄球菌：金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌和家畜葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）：表皮葡萄球菌（新生霉素敏感，医院感染，血培养污染）、腐生葡萄球菌（新生霉素耐药，凝固酶阴性。尿路感染）蛋白抗原：葡萄球菌A蛋白（SPA）：完全抗原，有种属特异性，无型特异性。抗吞噬作用。多糖抗原：半抗原，型特异性。35、金黄色葡萄球菌：触酶试验、凝固酶试验（最简单）、耐热DNA酶试验、甘露醇发酵试验均阳性。对新生霉素敏感。透明溶血环。致病性：感染（化脓性感染，食物中毒，表现为急性胃肠炎），医院内感染，毒素性疾病。主要致病物质有血浆凝固酶、葡萄球菌溶血素、杀白细胞素、肠毒素、表皮溶解毒素和毒性休克综合征毒素等。耐药性检测：检耐甲氧西林金葡菌（MRSA），耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌（MRSE），耐万古霉素金葡菌（VRSA），耐万古霉素表皮葡萄球菌（VRSE）。NCCLS/CLSI推荐用头孢西丁纸片法检测mecA基因介导对苯唑西林耐药的葡萄球菌。36、链球菌属：G+球菌，触酶阴性。在液体培养基中生长时易形成长链而表现为沉淀生长。5%CO2环境。抵抗力不强，对各种常用消毒剂敏感，60℃加热30分钟即可杀灭。A群链球菌（猩红热）——杆菌肽敏感；B群链球菌（败血症、肺炎、脑膜炎、咽喉炎）——CAMP试验阳性（与金葡菌，箭头状溶血），水解马尿酸；D群链球菌——七叶苷试验阳性（40%胆汁培养基，变黑）；甲型（α）溶血性链球菌：菌落呈灰色针尖状，菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，故又称草绿色链球菌。本菌为条件致病菌。乙型（β）溶血性链球菌：通称溶血性链球菌，菌落较小，灰白色，菌落周围有2～4mm宽的透明溶血环。该型细菌致病性最强，常引起人和动物多种疾病。丙型（γ）链球菌：呈灰白色细小菌落，在菌落周围无溶血环。一般无致病性。致病物质：链球菌溶血素、致热外毒素、透明质酸酶、链激酶、链道酶及M蛋白等。人类链球菌感染中85%以上由A群链球菌引起，对青霉素G高度敏感化脓型链球菌：杆菌肽敏感试验阳性。***肺炎链球菌：混浊生长，有荚膜（荚膜肿胀试验：阳性），大叶性肺炎。分解菊糖、胆汁溶解试验阳性、Optochin敏感试验阳性——与草绿色链球菌鉴别。37、肠球菌属：G+，触酶试验阴性，与同科链球菌的显著区别在于肠球菌能在高盐（6.5%NaCl）、高碱（pH9.6）、40%胆汁培养基上和10～45℃环境下生长，并对许多抗菌药物表现为固有耐药。重要医院感染病原菌，常引起尿路感染，其中大部分为医院感染，38、奈瑟菌属：G-双球菌，无鞭毛，无芽胞，有菌毛。专性需氧，氧化酶阳性。脑膜炎奈瑟菌：流行性脑脊髓膜炎（简称流脑），空气传播，对人致病的主要是A群。氧化酶、触酶试验阳性；分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气。39、淋病奈瑟菌：不酵解麦芽糖与蔗糖、30%H202试验阳性（与脑膜炎奈瑟菌鉴别）、40、卡他莫拉菌：社区呼吸道感染的主要病原体之一41、肠杆菌科：均为G-杆菌。均不形成芽胞。多数有周鞭毛运动，少数菌属细菌可形成荚膜。发酵葡萄糖产酸、产气，触酶阳性。(鉴别肠道致病菌和非致病菌常选用乳糖发酵试验)*菌体（O）抗原，鞭毛（H）抗原和表面抗原（如Vi抗原、K抗原）少数菌属如志贺菌属和克雷伯菌属无鞭毛，无运动能力。42、大肠埃希菌：俗称大肠杆菌，肠道正常菌群。泌尿系统感染。超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的主要产酶株。尿素酶试验阴性，吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐试验（IMViC）＋＋－－，克氏双糖铁琼脂（KIA）上斜面和底层均产酸产气，H2S阴性，动力、吲哚、尿素（MIU）＋＋－。硝酸盐还原、动力多数阳性。**引起肠道感染的大肠埃希菌有下列五个病原群。（1）肠产毒性大肠埃希菌（ETEC）：引起霍乱样肠毒素腹泻（水泻）。（2）肠致病性大肠埃希菌（EPEC）：主要引起婴儿腹泻。（3）肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）：可侵入结肠黏膜上皮，引起痢疾样腹泻（黏液脓血便）。（4）肠出血性大肠埃希菌（EHEC）：又称产志贺样毒素（VT）大肠埃希氏菌（SLTEC或UTEC），其中O157:H7（常规检测项目）可引起出血性大肠炎和溶血性尿毒综合征（HUS）。临床特征为严重的腹痛、痉挛，反复出血性腹泻，伴发热、呕吐等。严重者可发展为急性肾衰竭。（5）肠黏附性大肠埃希菌（EAggEC）：腹泻*与志贺菌相鉴别：醋酸钠和葡萄糖铵利用试验及粘质酸盐产酸三种试验。大肠埃希菌均为阳性，而志贺菌均为阴性。43、志贺菌属：痢疾杆菌（细菌性痢疾）。我国以福氏和宋内志贺菌引起的菌痢最常见。强选择鉴别培养基——沙门、志贺菌选择培养基（SS）；弱选择培养基——麦康凯或中国蓝培养基。MIU：一、＋／一、一；IMViC：－、＋、－、－分解葡萄糖产酸不产气，不分解乳糖（宋内志贺菌可迟缓分解乳糖），MR试验阳性，只有O抗原而无鞭毛抗原，A群痢疾志贺菌，甘露醇阴性，10个血清型。B群福氏志贺菌，有6个血清型和X、Y2个变种。C群鲍特志贺菌，15个血清型。D群宋内志贺菌，仅有一个血清型，有光滑型（S）和粗糙型（R）两种菌落。*与大肠埃希菌的鉴别（1）无动力，不发酵乳糖，靛基质阴性，赖氨酸阴性；（2）发酵糖产酸不产气（福氏志贺菌6型、鲍氏志贺菌13和14型、痢疾志贺菌3型除外）；（3）分解黏液酸，在醋酸盐和枸橼酸盐琼脂上产碱。*与伤寒沙门菌鉴别：硫化氢和动力阳性（伤寒）致病因素为侵袭力、内毒素及外毒素44、沙门菌属：无芽胞，无荚膜的革兰阴性直杆菌。有周身鞭毛（除鸡沙门菌外），能运动，多数有菌毛。KIA：K／A（K碱性，A酸性；葡萄糖发酵，乳糖不发酵）、产气＋／一、H2S＋／一，MIU：＋、一、＋，触酶＋，硝酸盐还原＋。肥达试验。S～R变异（光滑变粗糙，生理盐水中自凝）；H～O变异（失去鞭毛）；相位变异（双相变单相）；V～W变异（失去Vi抗原）。肠热症（伤寒与副伤寒病，慢性发热症状）。第1、2周采血液，第2、3周采粪便与尿液。整个病程中骨髓分离细菌阳性率较高。）45、变形杆菌属：迁徙生长。具有尿素酶，可以水解尿素，产生氨。硫化氢、明胶液化和脂酶（玉米油）均阳性。分解葡萄糖产酸产气，乳糖不分解，动力（＋）。抑制变形杆菌属菌的迁徙生长，可于血琼脂中加入苯酚（1g／L）或苯乙醇（0.25%）普通变形杆菌：靛基质和麦芽糖均阳性，鸟氨酸脱羧酶阴性；奇异变形杆菌相反。外-斐反应：普通变形杆菌OX19、OX2、0Xk的菌体抗原与某些立克次体有共同抗原，是用以诊断某些立克次体病的依据。46、鼠疫耶尔森菌：鼠疫。两极浓染。“钟乳石”状。28～30℃。KIA结果利用葡萄糖，不利用乳糖，不产H2S，MIU：-、-、-，丙氨酸脱氨酶试验呈阴性反应即可初步鉴定。甲紫亚硫酸钠琼脂。47、小肠结肠炎耶尔森菌：翻滚旋转状运动。VP试验25℃阳性，37℃阴性，鸟氨酸脱羧酶阳性。MIU：+（22℃）、-、+48、假结核耶尔森菌：两端浓染。25℃培养有周鞭毛，有动力，37℃培养无动力。49、肺炎克雷伯菌：医院感染，有荚膜，G-杆菌。灰白色大而黏的菌落，长丝状。触酶阳性、脲酶阳性。动力和鸟氨酸脱羧酶均阴性是本菌的最大特点。易产超广谱β-内酰胺酶。对氨苄西林天然耐药。对产ESBLs菌株的治疗可用碳青酶烯类、β-内酰胺类抗生素／酶抑制剂或头霉菌素类进行治疗。50、***肠杆菌属（阴沟肠杆菌、产气肠杆菌）有周鞭毛，能运动。IMVC：肠杆菌属多为－－＋＋；而大肠埃希菌是＋＋－－。51、黏质沙雷菌：革兰阴性细小杆菌。沙雷菌具DNA酶和葡萄糖酸盐阳性（与其他菌属细菌的根本区别）*爱德华菌属：IMVC为＋＋－－（与大肠埃希菌相同），但H2S阳性，甘露醇阴性。52、弧菌科:G-杆菌。共同特点是一群氧化酶阳性、具有极端鞭毛、动力阳性、发酵葡萄糖。弧菌属极端鞭毛、甘露醇、脂酶