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研究用CodeNo.9057说明书E.coliDH5αCompetentCellsv201412Da目录内容页码●制品内容1●制品说明1●使用方法1●注意事项1●转化效率2●β-半乳糖苷酶的α-互补性2●Genotype2●细胞浓度2●保存2●参考文献2●关联产品2●制品内容E.coliDH5αCompetentCells100μl×10pUC19plasmid(0.1ng/μl)10μlSOCmedium*1ml×10＊SOCmedium:2%Bactotryptone0.5%Bactoyeastextract10mMNaCl2.5mMKCl10mMMgSO410mMMgCl220mMGlucose●制品说明Takara公司在Hanahan'smethod基础上进行了改良，制备出E.coliDH5αCompetentCells。E.coliDH5αCompetentCells在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，利用β-半乳糖苷酶活性（α-互补性），通过蓝白斑方法可以很容易地鉴别重组体菌株。由于菌株无laclq，故不需要IPTG。因此，当制作基因文库或进行亚克隆时，可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。X-Gal:5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside●使用方法质粒载体转化1.E.coliDH5αCompetentCells使用前在冰上融化。2.轻微混匀，取100μl装入14ml圆底tube中（BDFalcon352059或352057）。注意：不能剧烈振荡混合细胞。3.加入DNA样品（建议≤10ng）。4.冰中放置30分钟。5.42℃放置45秒。6.冰中放置1-2分钟。7.添加SOC培养基（预先在37℃保温）至终体积1ml。8.37℃振荡培养1小时（160-225rpm）。9.取适量涂布于选择培养基*。10.37℃过夜培养。*：直径9cm的平板的涂布量不超过100μl。如有需要，使用步骤7中的培养基进行稀释。●注意事项1.将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。2.可使用1.5mlmicrocentrifugetubes代替14ml圆底tubes(BDcompanyCode:352059或352057,等)，但效率可能会降低。3.当使用100μl感受态细胞时，加入的高纯度DNA样品不要超过10ng。否则转化效率会降低。4.当改变感受态细胞数量或tube类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5mlmicrocentrifugetubes时，42℃放置60秒而不是45秒。5.L-broth或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。-1-·L-broth:IngredientperliterwaterBactotryptone10gBactoyeastextract5gNaCl5g用1NNaOH调整pH到7.5并高压灭菌。·φb-broth:IngredientperliterwaterBactotryptone20gBactoyeastextract5gMgSO4·7H2O5g用1NKOH调整pH到7.5并高压灭菌。6.当加入X-Gal时，按照以下操作进行：·将20mg/mlX-Gal(溶解于二甲基甲酰胺)按200-300μl/100ml的比例加入到agar培养基中。7.DH5α可用于M13mp载体的复制。但由于其不携带F因子，因而不能形成菌斑。8.不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。●转化效率转入1ng的pUC19，涂布于含有Amp+的选择培养基进行筛选。转化效率:1×108cfu/μgpUC19●β-半乳糖苷酶的α-互补性当使用pUC19plasmid进行转化时，含有100μg/mlAmpicillin和60μg/mlX-Gal的L-agarplate出现蓝色菌落。●GenotypeE.coliDH5α:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rK-,mK+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1●细胞浓度1-2×109cells/ml●保存-80℃注意：-80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化降低将会降低。请使用附带的pUC19对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。●参考文献Hanahan,D.(1983)J.Mol.Biol.166,557.●关联产品E.coliDH5αElectro-Cells(CodeNo.9027)pUC19DNA(CodeNo.3219)X-Gal(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside)(CodeNo.9031)-2-ThisdocumenthasbeentranslatedandpreparedbyTakaraBiotechnology(Dalian)Co.,Ltd.Forthelatestversionofthisdocument,pleaserefertotheTakaraBioInc.website.-3-NoteThisproductisforresearchuseonly.Itisnotintendedforuseintherapeuticordiagnosticproceduresforhumansoranimals.Also,donotusethisproductasfood,cosmetic,orhouseholditem,etc.Takaraproductsmaynotberesoldortransferred,modifiedforresaleortransfer,orusedtomanufacturecommercialproductswithoutwrittenapprovalfromTAKARABIOINC.Ifyourequirelicensesforotheruse,pleasecontactusbyphoneat+81775437247orfromourwebsiteat技术咨询热线：0411-87641685，876416864006518761，4006518769URL: