DH5α感受态细胞Cat#:BSD02L1试剂盒组成(20T)ComponentAmountDH5α感受态细胞0.1ml×20支SOC培养基1ml×20支阳性质控品200ul说明书1份产品描述DH5α是世界上最常用的生物工程菌株之一,特别是在克隆应用方面。本产品为克隆转化专用的感受态大肠杆菌,该菌株经过特殊方法处理而获得的高活性感受态细胞。使用pUC18(2.7kb)检验可获得高达>107cfu/ug。本产品在液氮中保存可在二个月内保持>107cfu/ug的转化效率,-70℃保存可在一个月内保持>106cfu/ug的转化效率。DH5α的基因型为:F-φ80lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169deoRrecA1endA1hsdR17(rk-,mk+)phoAsupE44λ-thi-1gyrA96relA1。操作方法(以下操作均按无菌条件的标准进行)1.取感受态细胞室温下使其解冻,解冻后立即置冰上;2.向感受态细胞中加入目的DNA(含量不超过50ng,体积不超过10μl),轻轻旋转离心管以混匀,冰上放置30分钟;3.将离心管置于42℃的水浴中放置60秒(时间必须准确控制)。然后快速将离心管转移到冰上,放置5分钟;4.向管中加入1ml培养基(不含Amp),混匀后37℃水浴或振荡培养1小时,使细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因(Amp);5.将上述菌液涂布于含Amp的筛选平板上(也可经过离心收集后再涂板),正面向上放置半小时,待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿,37℃培养16-24小时。重要提示1用于转化的连接产物或质粒的体积不能超过感受态细胞体积的15%;2质粒超过7.5kb后,随尺寸的增加转化效率会下降,质粒的尺寸超过10kb时,在大肠杆菌增殖过程中也可能会出现质粒缺失现象;3用于转化的质粒量在0.1pg~50ng间的效果最好,超过50ng则转化效率会下降;442℃热击时间与离心管的厚度、菌液的体积、转入片段的大小直接相关,一般建议热击60秒,热击时间不宜超过90秒,否则转化效率会下降很快;5本产品不能进行反复冻融和长期保存。DH5α感受态细胞Cat#:BSD02L1试剂盒组成(20T)ComponentAmountDH5α感受态细胞0.1ml×20支SOC培养基1ml×20支阳性质控品200ul说明书1份产品描述DH5α是世界上最常用的生物工程菌株之一,特别是在克隆应用方面。本产品为克隆转化专用的感受态大肠杆菌,该菌株经过特殊方法处理而获得的高活性感受态细胞。使用pUC18(2.7kb)检验可获得高达>107cfu/ug。本产品在液氮中保存可在二个月内保持>107cfu/ug的转化效率,-70℃保存可在一个月内保持>106cfu/ug的转化效率。DH5α的基因型为:F-φ80lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169deoRrecA1endA1hsdR17(rk-,mk+)phoAsupE44λ-thi-1gyrA96relA1。操作方法(以下操作均按无菌条件的标准进行)1.取感受态细胞室温下使其解冻,解冻后立即置冰上;2.向感受态细胞中加入目的DNA(含量不超过50ng,体积不超过10μl),轻轻旋转离心管以混匀,冰上放置30分钟;3.将离心管置于42℃的水浴中放置60秒(时间必须准确控制)。然后快速将离心管转移到冰上,放置5分钟;4.向管中加入1ml培养基(不含Amp),混匀后37℃水浴或振荡培养1小时,使细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因(Amp);5.将上述菌液涂布于含Amp的筛选平板上(也可经过离心收集后再涂板),正面向上放置半小时,待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿,37℃培养16-24小时。重要提示1用于转化的连接产物或质粒的体积不能超过感受态细胞体积的15%;2质粒超过7.5kb后,随尺寸的增加转化效率会下降,质粒的尺寸超过10kb时,在大肠杆菌增殖过程中也可能会出现质粒缺失现象;3用于转化的质粒量在0.1pg~50ng间的效果最好,超过50ng则转化效率会下降;442℃热击时间与离心管的厚度、菌液的体积、转入片段的大小直接相关,一般建议热击60秒,热击时间不宜超过90秒,否则转化效率会下降很快;5本产品不能进行反复冻融和长期保存。