搜索
呼吸道病原体检测探讨•呼吸道感染的概况•常见非典型病原体•实验室检测方法学•间接免疫荧光法—IgM抗体检测主要内容呼吸道病原体感染概况上呼吸道感染鼻腔、咽、喉部-----常见病因病毒，少数为细菌；下呼吸道感染(最常见的感染性疾患)气管、支气管、肺部----由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起。以社区获得性肺炎(CAP)多见呼吸道病原体感染概况一、典型“致病菌”细菌：肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌等症状：典型，咳嗽、脓性痰、胸膜炎性胸痛，一般都伴有发热，或有脓血痰病史：①悠久，古代的“瘟疫”很多细菌性肺炎②重症致死性肺炎很多是细菌性③上世纪50年代以前的肺炎90%以上为细菌性肺炎，现在报道约在40%左右④肺炎链球菌大约占在60%呼吸道病原体感染概况二、非典型病原体非典型肺炎：泛指所有由某种未知的病原体引起的肺炎。病原体可能是病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体或军团菌、真菌等1、20世纪60年代首次发现了非典型的病原体——肺炎支原体2、临床症状差异大3、在CAP中感染的比例逐年增加，据报道大约占40-60%（一）最常见的非典型病原体肺炎支原体、肺炎衣原体、军团菌和立克次体等①感染比例高，超过50%②临床症状：干咳为主，少痰或无痰，肺外症状较常见明显，尤其军团菌感染，表现相对较重，多脏器受累明显。可有高热、耳鸣、相对缓脉、血尿、腹痛、腹泻、肝酶升高、电解质紊乱、精神神经症状等③β-内酰胺类（青霉素类、头孢类）等药物无效④治疗：喹诺酮类、大环内酯类（二）病毒类流感病毒、副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、冠状病毒、禽流感病毒等①季节性或区域性流行②临床症状：干咳为主，少痰或无痰、呼吸困难，低氧血症（三）真菌性肺炎念珠菌，曲菌，新型隐球菌，放线菌，组织胞浆菌，毛霉菌属等①多数为条件致病②多发生在免疫低下患者和长时间接受广谱抗生素治疗的患者白色念珠菌肺炎一项来至亚太地区的研究表明Ø肺炎链球菌是社区获得性呼吸道感染的常见致病菌Ø近年来随着检测手段的提高，非典型病原体亦是社区获得性呼吸道感染的常见致病菌之一各病原体感染率欧洲一项回顾性评价1511例CAP患者病原学研究结果（1996-2001）共计610例患者有病原学证据可供评价，其中细菌/非典型病原体致感染患者采用常规方法检测病原体，混合感染和化脓性肺炎患者具有血清学诊断证据国内CAP流行病学---非典型性肺炎应引起足够重视9.2%10.2%6.6%10.3%20.7%0%10%20%30%40%肺炎支原体肺炎链球菌流感嗜血杆菌肺炎衣原体混合感染肺炎链球菌和非典型病原体为主要致病菌N=126N=63N=56N=40N=62刘又宁等．中华结核和呼吸杂志，2006;29(l):3-8.阳性率(%)7个城市、12个研究中心、665例各病原体在CAP中感染率病原菌感染率（%）肺炎链球菌27肺炎支原体15流感嗜血杆菌12肺炎衣原体7军团菌4.8病毒类8.5混合感染（两种或以上）17其他及不明原因13a在养老院获得的肺炎数据来源：《各国社区获得性肺炎指南对非典型病原体的重视情况》《肺炎的诊断与治疗研究进展》《重视非典型病原体在CAP致病中的作用》《要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用》等呼吸系统疾病死亡率排第四位《2013年北京市卫生工作统计资料简编》儿童肺炎是全球儿童死亡第一病因嗜肺军团菌肺炎支原体Q热立克次体肺炎衣原体腺病毒呼吸道合胞病毒流感病毒(甲型、乙型)副流感病毒常见的非典型病原体嗜肺军团菌广泛分布于天然淡水域或人工水域，空调冷凝水，革兰氏阴性短小杆菌。其中1型在人军团菌肺炎中占70%~90%。易感人群为老年人、吸烟者、慢性肺部患者、免疫功能低下、癌症病人、肾透析病人和艾滋病人。症状表现为：发冷、不适、肌痛、头晕、头痛，伴有烦躁、呼吸困难、胸痛。９０％以上患者体温急剧上升，咳嗽、粘痰，偶尔出现腹泻呕吐胃肠道紊乱，重症患者可发生肝功能变化及肾衰治疗：大环内酯类如阿奇霉素红霉素肺炎支原体介于病毒与细菌之间一种没有细胞壁的病原体；40%以上的非典型肺炎病例是由肺炎支原体引起的；MP好发于1岁以上年长儿，近年来发病年龄明显提前，发病率也有所增加，婴幼儿发病也逐渐增多。病原菌培养是目前公认的检测标准，IgM抗体检测治疗：大环内酯类首选、喹诺酮类药物。Q热立克次体介于最小细菌和病毒之间一类的细胞内寄生原核细胞型微生物大部分病例发于春天或初夏，流行分布全世界节肢动物如蜱，虱、蚤、螨和家畜类羊、牛是主要传染源，宠物和屠宰场。多见于男性青壮年，潜伏期12～39天，平均18天多急骤起病，发热、头痛、寒颤，肌痛、胸痛，体温可升至40℃持续1～3周少数患者有关节痛和胃肠道、呼吸道症状,以及肝脏和中枢神经系统症状，可见血小板减少，白细胞减少，贫血以及肝脏天冬氨酸氨基转移酶水平升高治疗：氯霉素、四环素、强力霉素效果突出肺炎衣原体5-15岁青年易被感染，尤其是人群聚集处多起病缓慢，潜伏期30天左右临床多出现流感样的症状，发热一般低于38度，数天至数周后出现持续性干咳，若不及时治疗会持续数月阳性率一般在1-3%左右治疗：大环内酯类红霉素、罗红霉素、阿奇霉素大环内酯类抗生素①红霉素：衣原体肺炎的抗生素应首选红霉素。重症或不能口服者，可静脉给药。②罗红霉素③阿奇霉素腺病毒无外壳的双链DNA病毒，与人类呼吸道感染密切有关多发生于2～48月婴幼，冬春两季常见约占病毒性肺炎的20%～30%，居第二位潜伏期3～8天，急骤发热，自第1～2日即39℃以上的高热，第3～4日呈不规则的高热；60%以上的病例体温超过40℃在呼吸、神经、循环、消化等系统都有症状显现治疗：西多福韦等抗病毒药物或中药疗法呼吸道合胞病毒RNA病毒，重要的婴幼儿急性呼吸道感染病原体，引起间质性肺炎及毛细支气管炎等疾病过90%的儿童在2岁以前感染过RSV，而且都经历过1次或多次感染，0.1%的感染者会致命超占病毒性肺炎的25%-35%；居儿童病毒性感染第一位潜伏期3-7天，IgM抗体在发病1周出现，持续2～3个月治疗：利巴韦林流感病毒球形RNA病毒根据其核蛋白的抗原性可以分为三类:甲型、乙型、丙型甲型感染包括野生鸟类、驯养家禽、猪、马等温血动物和人。在新宿主体内变异产生新类型的毒株和新抗原，使人群对其普遍敏感而广泛流行乙型常致流感局部暴发，病毒不变异，一般不会感染人以外的动物治疗：甲流:扎那米韦、奥司他韦、金刚烷胺、金刚乙胺乙流：扎那米韦、奥司他韦乙流乙流乙流乙流那米韦、奥司他韦，金刚烷胺、金刚乙胺副流感病毒*单链的RNA病毒，感染随年龄的增长而逐渐下降*急性呼吸道感染的儿童中，40%感染过HPIV;*住院的急性呼吸道疾病患儿中，20%由HPIV感染引起;*而在5岁以下儿童中HPIV感染占因发热和(或)急性呼吸道疾病住院总数的6.8%,*第1和第3型常见于幼儿，局部流行发生于托儿所、儿科病房、小学及其他儿童场所，第3型为地方性流行治疗：利巴韦林、干扰素、蛋白酶抑制剂等呼吸道病原体实验室检测方法间接免疫荧光法抗原与抗体检测标本采集抗体检测抗原和病原体检测咽拭子痰抗原与抗体检测标本采集抗原与抗体的标本保存•抗体—血清•抗原—宿主细胞最新文献报道“从105份患者病历资料分析显示，肺部有明显病理改变，有典型临床症状，但用药物(佩罗欣、其仙、明可欣等)治疗后，······出现阴性结果，说明药物干预后对抗原的检测有一定程度影响。”另外“由于Mp细胞膜上的糖脂抗原与其它微生物及机体组织存在非特交叉反应，故血清学检测方法中所用诊断抗原的质量直接影响血清学检测的特异性。”------《用量子点标记技术检测肺炎支原体抗原》，中国医科大学基础医学院病原生物学教研室，何梦博，曾晶晶，张晗，杨颖，赵之娜，王桂珍。发表于《中国卫生检验杂志》2012年2月第22卷第2期。------SillisM．ThelimitationofIgMassaysintheserologicaldiagnosisofMycoplasmapneumoniaeinfections［J］．JMedMicrobiol，1990，33(4):253－258．------LindK，Hoier－MadsenM，WiikA．AutoantibodiestothemitoticspindleapparatusinMycoplasmapneumoniaedisease［J］．InfectIm-mun，1988，56(3):714－715．抗原检测受药物和其他微生物的干扰抗原抗体的检测方法•胶体金法：抗体•凝集法：抗体•微孔板法和磁珠法：抗体、抗原•直接免疫荧光法：抗原--抗体•间接免疫荧光法：抗原--抗体--二抗检测IgG抗体还是IgM抗体？•IgM•IgG潜伏期和IgM抗体出现潜伏期IgM抗体出现时间军团菌4-10天4-7天肺炎支原体14-21天感染后1周立克次氏体12-19天感染后2周衣原体30天左右感染后2-3周腺病毒2-14天4-7天合胞病毒3-7天1-7天流感病毒2-8天2-7天副流感病毒3-8天2-7天间接免疫荧光法——九项呼吸道病原体IgM抗体检测检测原理阳性反应阴性反应NEGATIVEPOSITIVENEGATIVEPOSITIVEPOSITIVENEGATIVEPOSITIVENEGATIVEPOSITIVENEGATIVE检测结果显示特点优势1、西班牙VIRCELL公司原装进口产品。2、一卡九项，同步完成多种疑似病原体鉴别诊断。3、检测IgM抗体，近期感染的有效指标，特别适合于住院患者。4、标本为血清标本，容易采集、容易保存。5、采用间接免疫荧光法，检测抗体，受干扰较少6、质控孔和阴阳性对照双重保险7、试验操作简易，2.5小时完成。一：儿童儿童呼吸道感染的入院筛查项目二：呼吸科入院筛查项目呼吸道感染的入院筛查项目三：易发生呼吸道感染的病人人群文献报道：恶性肿瘤继发下呼吸道感染肺癌合并肺部感染，发病率60%左右，肺部感染是妇科肿瘤术后常见并发症恶性淋巴瘤临床表现有呼吸道感染呼吸道感染导致肾功能衰竭呼吸道感染诱发加重肾功能不全病毒感染时肾病综合征常见并发症临床应用2：其他科室1心内科先天性心脏病常引起肺炎并迁延反复发作，呼吸道感染常诱发心肌炎2呼吸道感染常诱发眼部疾病3脑外伤病人常并发呼吸道感染4很多鼻炎患者常并发呼吸道感染5肺炎支原体可引起支原体脑炎6风湿病患者可引起下呼吸道感染7肝胆外科术后常并发呼吸道感染8川崎病常伴随呼吸道感染，并易发心血管病变9老年糖尿病患者冬季易发呼吸道感染，并发展为肺部感染10血液病患者院内感染以呼吸道感染最为常见内科病人以及外科病人术后易发呼吸道感染或免疫力低下易受到感染的患者皆可临床应用应用科室：呼吸科，儿科，消化科，肿瘤科，血液科，肾病科，结核科，感染科，心内科，耳鼻喉科，神经科，外科，风湿免疫科，新生儿科，肝胆外科等易发呼吸道感染的临床科室。临床应用科室标本要求•1、静脉采血。•2、采血量：试验用血清30ul，2ml即可。•3、避免高脂高溶和污染血清。国内发表的有关九联检的文章举例Ø快速准确的呼吸道联检试剂,对于呼吸道感染的病原学诊断,有着重要的临床指导意义。-------呼吸道联检试剂在急性呼吸道感染诊断中的应用价值河南省郑州市第五人民医院呼吸内科(郑州450053)王敏ØMIF法(vircell)与颗粒凝集法和微量凝集法有高度的相关性-------昆明地区小非典型肺炎病原体临床实验研究昆明市儿童医院中心实验室倪林仙ØMP、LP1是昆明地区儿童非典型病原体感染的主要病原,临床表现无特异性,应重视非典型病原体的实验室依据,合理诊治------昆明地区儿童非典型病原体感染病原学回顾性分析吴茜,倪林仙,樊茂,赵明波,高丽(昆明市儿童医院,云南昆明650034)