呼吸道病毒及检验.

呼吸道病毒及检验呼吸道病毒：是指主要以呼吸道为侵入门户，引起呼吸道以及全身感染。临床上的急性呼吸感染中有90～95%是由这群毒引起的。感染特点RNA病毒——正粘病毒科：流感病毒副粘病毒科：副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒；其他病毒如：风疹病毒、冠状病毒、鼻病毒等DNA病毒——腺病毒主要种类是指对人或某些动物红细胞表面的粘蛋白有亲和性的病毒。正、副粘病毒的分别以其核酸是否分节段为标准，分节段者为正粘病毒，不分节段者为副粘病毒。粘病毒（Orthomyxovirus）第一节流行性感冒病毒1918年西班牙流感6级甲型H1N1流感2009.4~5月全球发病人数：2万人截止2009.12，死亡人数9000截至2010年2月28日，全国31个省份累计报告甲型H1N1流感确诊病例12.7万例，死亡病例793例（influenzavirus）流感病毒是一种什么样的病毒？为什么容易引起流行?流感如何传播、有何症状？如何进行微生物学检查？怎样防治这种疾病？（一）形态与结构球形（80～120nm）丝状、杆状，长短不一一、生物学性状形态分三部分核心核蛋白（NP）——衣壳包膜结构：1、核心：含RNA及RNA多聚酶所以易发生基因重组，导致基因编码的蛋白抗原发生变异而出现新亚型。RNA分节段，7~8段特点呈螺旋对称其抗原性稳定，具有型特异性。2、衣壳：核蛋白（NP）核蛋白内层：基质蛋白（MP），分型依据。据NP和MP分型：A型—甲型流感病毒B型—乙型流感病毒C型—丙型流感病毒3、包膜外层：脂质双层，来源于宿主细胞膜（1）血凝素(HemagglutininHA)：（柱形）凝集红细胞—血凝现象，用于鉴定病毒吸附宿主细胞—与受体结合（侵入细胞的关键）抗原性—相应抗体，有中和作用易变异（分亚型）（2）神经氨酸酶（NeuraminidaseNA）：（蘑菇形）参与病毒释放，促进病毒扩散抗原性——非中和抗体易变异（分亚型）亚型（甲型流感病毒）目前已发现HA有15种（H1-H15），NA有9种（N1-N9），所有亚型均可从禽、鸟类中分离到，但带有病毒的禽鸟未必会发病。人类流行的亚型：主要是由H1、H2、H3和N1、N2几种抗原构成。流感病毒的传播路线易变异甲型的HA、NA抗原性最易变异乙型和丙型流感病毒抗原性比较稳定（二）为什么流感病毒易引起流行？原因（1）甲型流感病毒抗原变异的幅度小，属于量变，可引起小规模流感的流行，称抗原漂移（Antigenicdrift）（2）若抗原变异幅度大，系质变，形成新的亚型，可以引起大规模甚至世界性的流感流行，称抗原转变(Antigenicshift)。为什么抗原变异与流行密切相关？甲型流感病毒在不同年代的抗原变化流行年代亚型代表毒株*表面抗原HANA1918~甲0(原甲型)H0N1A/puertoRico/8/341947~甲1(亚甲型)H1N1A/FM/1/471957~甲2(亚洲甲型)H2N2A/Singpore/1/571968~甲3(香港甲型)H3N2A/HongKong/1/681977~甲1H1N1A/USSR/90/77甲3H3N22009~甲型H1N1*：型/分离地点/编号/分离年份二、流感病毒的致病性主要是病人、隐性感染者、病禽传染源传播途径飞沫（主要）、接触感染流行季节多为冬春季发热、畏寒咳嗽、咽痛全身酸痛、疲乏无力头痛腹泻、呕吐（部分病人）流感症状重者继发肺炎、呼吸衰竭、甚至死亡包括：体液免疫和细胞免疫中和抗体(抗－HA)：SlgA、IgG、IgM血清中的抗体可维持10年，但仅对同型病毒有免疫力。免疫性三、微生物学检验（一）分离培养与鉴定1、标本采集和处理鼻腔洗液、鼻咽拭子、咽漱液、支气管分泌物（接种前加入青霉素和链霉素）。时间：发病后3天内（鼻咽分泌物病毒量达104-107/ml）；尽快送检；低温保存。2、检验程序标本9~11日龄鸡胚33~35℃，3d收获羊水和尿液阳性阴性血凝抑制试验补体结合试验盲传3次MDCK细胞33~35℃，7~10d观察CPE红细胞吸附阳性阴性盲传血凝抑制试验补体结合试验（1）鸡胚培养初次分离：接种于鸡胚羊膜腔内传代：接种尿囊腔2～4日后：取羊水、尿囊液做血凝试验，检查有无病毒增殖。若试验为阴性，需在鸡胚中盲目传代三次后再试验。若血凝试验为阳性，可用已知流感病毒各型特异性抗体与新分离病毒进行血凝抑制试验，鉴定型别。3、检验方法（2）细胞培养原代人胚肾细胞、猴肾细胞、MDCK细胞，观察CPE。做血凝试验或红细胞吸附试验鉴定。（3）动物分离培养雪貂取病人急性期（发病3日内）和恢复期（发病2～4周）双份血清，同样与已知各亚型流感病毒进行血凝抑制试验或其他试验。恢复期血清的抗体效价是急性期的4倍或4倍以上，具有协助诊断意义。其他试验：补体结合试验、中和试验、酶免疫试验、固相放免等。（二）血清学试验（1）免疫荧光、免疫酶等方法检测感染细胞或培养细胞中的病毒抗原。敏感、快速。（2）分子杂交测病毒RNA：甲型（3）PCR法测病毒RNA（4）其他：免疫电镜（三）快速诊断四、怎样防治流感？1、一般性预防：双手要勤洗；打嚏掩口鼻居室常通风；无事少聚集脏手勿触口；吐痰包纸里感冒戴口罩；染疫要隔离制备的疫苗必须与流行型别相同2、接种流感疫苗：（最有效的预防方法）要求禁忌症鸡蛋过敏史免疫缺陷患病期间（1）抗病毒治疗（2）合并细菌感染：抗生素3、治疗：早期隔离治疗小结1、流感病毒的形态结构、变异与流行（掌握）2、流感的传染源、传播途径（掌握）3、流感病毒的微生物学检验（掌握）4、流感的防治原则（熟悉）思考题：请你对流感病毒的各种微生物学检验方法在临床的应用价值分别做一评价。课后：注意查阅流感病毒的相关研究进展及流行情况流感病毒粘附细胞1997：禽流感然而抗-HA的中和作用：阻止流感病毒感染细胞一、麻疹病毒二、腮腺炎病毒三、副流感病毒四、呼吸道合胞病毒第二节副粘病毒麻疹病毒（Measlesvirus）是引起麻疹的病原体。麻疹是儿童最常见一种急性呼吸道传染病。临床上以发热、上呼吸道炎症、结膜炎、口腔粘膜斑及全身丘疹为特征。麻疹病毒形态大致与流感病毒相似，为球形、丝状等多种形态，直径为140～180nm，长者可达270nm；结构由内向外为核衣壳和外面的脂蛋白包膜两部分，其核衣壳内的核酸为单股负链RNA，不分节段，不易发生重组；包膜结构与流感病毒相似，膜上也有两种糖蛋白剌突：一种称为H蛋白，能凝集猴、狒狒等动物的红细胞；另一种称为F蛋白。一、生物学性状麻疹病毒无神经氨酸酶，该病毒只有一个血清型。在人胚肾、人羊膜细胞及Hela、Vero等多种传代细胞中可增殖，出现细胞病变，形成多核巨细胞，胞核胞浆中可形成嗜酸性包涵体。麻疹是一种典型的全身出疹的急性传染病。其传染性强、易感接触后90%以上都发生麻疹，儿童初次感染几乎都发病，传染源是麻疹患儿。病毒呼吸道上皮细胞内血流全身淋巴组织单核吞噬细胞第一次病毒血症发热、咳嗽、眼结膜充血、口腔粘膜斑等第二次病毒血症损伤血管内皮，使全身相继出现红疹中枢N.S（亚急性硬化性全脑炎）极少数9～12天3～5天二、致病性与免疫性麻疹病毒感染的免疫力持久，一般不会出现二次感染。免疫性麻疹因临床症状典型，一般无需作微生物学检查。六个月以内的婴儿有被动免疫力，但随年龄增长逐渐消失，易感性增加，给6个月～1岁的儿童普遍接种麻疹减毒活疫苗是预防麻疹的最好方法。给有接触麻疹患儿病史的体弱易感儿注射丙种球蛋白或健康成人全血，有预防发病或减轻症状的作用。三、微生物学诊断和预防病毒形态结构致病特异预防免疫力麻疹病毒球形；有包膜，RNA麻疹：柯氏斑；全身丘疹，高热、咳嗽等亚急性硬化性全脑炎减毒活疫苗丙种球蛋白牢固腮腺炎V球形；有包膜，RNA腮腺炎并发：睾丸炎、卵巢炎减毒活疫苗牢固风疹病毒球形；有包膜，RNA风疹：先有上呼吸道症状；随之出现斑丘疹先天性风疹综合征风疹疫苗牢固其他呼吸道病毒经典的冠状病毒与SARS病毒的比较冠状病毒：1965年，Tyrrell首次用人胚器官培养成功。1968年正式命名，1975年建立冠状病毒科。形态结构：为单股正链RNA病毒致病：猪、牛、狗等动物感染后可引起腹泻，人和禽类主要通过呼吸道感染，只侵犯上呼吸道，引起普通感冒，尔偶引起腹泻。SARS病毒香港衛生署嚴重呼吸道症候群(SARS)病徵出現率参考资料：《医学微生物学》周正任主编《医学微生物学》陆德源主编《Nature》网站：禽流感病毒近年来发现禽流感病毒也可传染人，由禽类传染人的禽流感病毒有三种：甲型H5N1、甲型H7N7及甲型H9N2，其中H5N1型为高致病性禽流感病毒。甲型流感病毒除了感染人外，还可引起禽、猪等多种动物感染，禽流感病毒即属此类病毒。禽流感病毒为单负链RNA病毒，有包膜，表面有刺突。形态呈球形、杆状或丝状。1、形态结构与变异性禽流感病毒在电镜下的形态，左图中染成黄色的即为禽流感病毒假如已导致亚洲65人死亡的H5N1型禽流感病毒与人类流感病毒发生基因重组，从而变异为能在人际间传播的病毒，后果将会怎样？WHO负责公共医疗的专家预测，届时全球将有500万至1.5亿人被禽流感夺去性命。中国在人感染高致病性禽流感实验室诊断中主要采取3种办法，分别是病毒分离、核酸检测和检测抗体。2、禽流感病毒的检测流感病毒(Influenzavirus)核心M蛋白包膜血凝素神经氨酸酶流感病毒鸡胚尿囊腔接种鸡胚羊膜腔接种麻疹病毒Measlesvirus麻疹引致的口腔表徵–柯氏白斑麻疹引致的口腔柯氏白斑腺病毒(adenovirus)风疹病毒模式图风疹致盲风疹浅红色斑丘疹可致猪狗牛等动物腹泻冠状病毒coronavirusSARSvirus腮腺炎