移植物慢性排斥反应动脉硬化血管平滑肌细胞的形态及功能变化研究

ZJNSF浙江省自然科学基金申请书(2005版)第1页申请书版本号：58504619同行评议组别生理、病理及病理生理学项目编号Y205204浙江省自然科学基金申请书申报类别:一般项目项目名称:移植物慢性排斥反应动脉硬化血管平滑肌细胞的形态及功能变化研究申请者:王伟林电话:[phone]依托单位:浙江大学/医学院通信地址:浙江大学医学院附属第一医院肝胆外科邮政编码:310003E-mail:[e-mail]申报日期:2005-5-23浙江省自然科学基金委员会二OO五年制ZJNSF浙江省自然科学基金申请书(2005版)第2页申请书版本号：58504619基本信息申请者信息姓名王伟林性别男出生日期1963年06月05日最终学位硕士获学位年份1992职称教授主要研究领域肝胆胰疾病、肝脏移植、胰腺移植的临床与基础研究[e-mail]电话[phone]个人网页依托单位浙江大学/医学院证件类型身份证证件号码330102630605121申请者是否近三年调入在浙单位工作否调入时间申请者曾主持的浙江省自然科学基金资助项目编号:申请者正在主持的国家和省部资助经费在20万元及以上的研究项目名称、来源和研究期限:项目基本信息项目名称移植物慢性排斥反应动脉硬化血管平滑肌细胞的形态及功能变化研究申报类别一般项目研究属性纯基础研究同行评议组别医药科学/生理、病理及病理生理学依托基地名称卫生部多器官联合移植研究重点实验室---浙江大学预计研究年限2006年01月－2008年12月总经费预算6.0万元申请经费6.0万元项目研究目标、内容和意义简介(限400字)通过体外、体内实验研究慢性排斥反应时同种移植物血管平滑肌细胞（VSMC）的形态及功能状态，探讨排斥与非排斥时VSMC分泌生长因子和膜上受体以及细胞外基质蛋白和血管活性物质等的表达情况，采用蛋白质组学技术分析排斥与非排斥时VSMC蛋白质表达上的差异，测序、筛选和鉴定与同种移植慢性排斥反应移植物动脉硬化相关的蛋白质，阐明血管平滑肌细胞从血管中层迁移至内膜层的发生机制，揭示器官移植动脉硬化的病理生理过程，为今后慢性排斥时动脉硬化的防治提供新的思路。并利用中药黄芪的抑制VSMC的活化与增殖及抗氧化作用，减轻移植物慢性排斥反应动脉硬化的发生，同时研究其抑制VSMC的活化与增殖作用的靶点，为中药治疗移植物慢性排斥反应提供进一步的理论支持。对防治慢性排斥反应导致移植物慢性失功具有重大的临床意义。关键词（不超过4个）慢性排斥反应；VSMC；动脉硬化；蛋白质组学同行评议分组说明细胞病理及病理生理学重点资助方向重要疾病机理及防治研究ZJNSF浙江省自然科学基金申请书(2005版)第3页申请书版本号：58504619项目组主要成员编号姓名出生日期性别职称学位单位名称电话项目分工每年工作时间（月）（（(月)1王伟林1963年06月05日男教授硕士浙江大学/医学院0571-87236884负责人62贾长库1969.05.20男讲师博士浙江大学0571-87236570细胞培养43施邵华1967.07.15男讲师博士浙江大学0571-87236570蛋白印迹44毛斐斐1971.05.18女主管药师学士浙江大学0571-85164196分子生物45丁光超1978.04.26男药师其他浙江大学0571-85164196中药药理56金晶1980.05.24男硕士生学士浙江大学0571-87236570细胞培养87高磊1980.11.18男硕士生学士浙江大学0571-87236570动物模型8总人数高级中级初级博士后博士生硕士生参加单位数71310021说明：1.个人介绍部分申请者必须填写，其他人员可以不填写；2.高级、中级、初级、博士后、博士生、硕士生及参加单位数由申请者负责填报，总人数自动生成；3.第一人必须是申请者，信息从前面自动读入，但每年工作时间必须手工录入。ZJNSF浙江省自然科学基金申请书（2005版）第4页申请书版本号：58504619个人介绍：王伟林：男，42岁，外科学教授，硕士生导师。1992年获浙江医科大学外科学硕士学位，1997年1月-1999年8月在香港大学玛丽医院外科研修。多年来从事肝胆胰疾病、肝脏移植、胰腺移植及肝肾联合移植与胰肾联合移植的临床与基础研究，积累了丰富的临床经验，具有较强的临床与科研组织实施能力。其肝肾联合移植的临床研究获浙江省科技进步一等奖（本人排名7/16）。发表了多篇高质量的研究论文。1.WangWL,YangZF,LoCM.Intracerebralhemorrhageafterlivertransplantation.LiverTransplantation.2000,6:345-348.2.CheungST,TsuiTY,WangWL.Liverasanidealtargetforgenetherapy:ExpressionofCTLA4Igbyretroviralgenetransfer.JGastroenterolHepatol.2002,17:1008-1014.3.王伟林，范上达.活体肝移植的供肝切取手术40例临床分析.中华普通外科杂志.2000，5：521-523.4.王伟林，范上达.肝移植受体感染的相关因素分析。中华肝胆外科杂志.1999，5：163-167.5.范上达，王伟林.活体肝移植外科处理.中华肝胆外科杂志.2000，6：253-255.6.季峰，王伟林，杨自力，厉有名,黄怀德,陈卫东.基质金属蛋白酶-2mRNA在胃癌中的表达.中华消化杂志.1999，19:318-320.7.杨振帆，王伟林，卢宠茂，吴吕爱莲,范上达.肝移植的急性排斥反应.中华器官移植杂志.1999，20：237-239.8.范上达，王伟林，杨振帆.95例次肝移植临床分析.中华实用外科杂志.1999，19：532-534.贾长库：男，35岁，讲师。2003年6月获浙江大学外科学博士学位，多年来一直从事器官移植方面的临床和基础研究工作，了解并掌握了器官移植学、分子生物学、细胞生物学及免疫学的基础理论，擅长大鼠心脏移植和肝脏移植技术，能够熟练运用如原位杂交、Westernblot、EMSA、质谱分析、基因转染及分子克隆等多种实验方法和实验技术进行相关研究，具有丰富的科研工作经验。曾作为助理研究员于2003年1月前往香港大学进行合作研究。1.JiaCK,ZhengSS,XieHY.CsAdownregulatesIFN-gammagenetranscriptionafterlivertransplantationbyinhibitingNF-kappaBactivity.ChinMedJ.2003,116(11):1668-1672.2.JiaCK,ZhengSS,LiQY,ZhangAB.Immunotoleranceofliverallotransplantationinducedbyintrathymicinoculationofdonorsolubleliverspecificantigen.WorldJGastroenterol.2003,9(4):759-7643.JiaCK,ZhengSS,ZhuYF.Intrathymicinoculationofliverspecificantigenalleviateslivertransplantrejection.ChinMedSciJ.2004,19(1):38-43.4.JiaCK,ZhengSS,ZhangAB.Intrathymicinoculationofdonorliverspecificantigenalleviatesrejectionofliverallotransplantation.JZhejiangUnivSci.2003,4(4):485-490.5.JiaCK,WangY,ZhengSS,XuSH,YeJ.Allolymphocyteapoptosisinducedbysolubleliverspecificantigen.HepatobiliaryPancreatDisInt.2003,2(2):184-190.6.贾长库，郑树森，万云乐，赵志成，尉建锋，施邵华，谢海洋，蒋国平，宋朋红.肝特异抗原的同种异体免疫原性.中华器官移植杂志.2002，23（6）：353-3567.贾长库，郑树森，施邵华，徐世国，章爱斌，王慧萍.胸腺接种肝特异抗原对同种肝移植排斥反应的作用.中华器官移植杂志.2004，25（2）：103-1058.贾长库，郑树森，施邵华，章爱斌，谢海洋.肝移植后环孢素对核因子κB活性和γ干扰素基因转录表达的影响.中华外科杂志.2004，42(17)：1052－1055ZJNSF浙江省自然科学基金申请书（2005版）第5页申请书版本号：58504619申请经费预算6.0万元计划开支项目名称计算根据及理由金额（万元）1．信息费信息检索、购买参考书、复印、数据统计分析，论文发表等0.52．专题学术活动费会议费、差旅费等0.53．仪器和设备购置费0.04．能源材料费实验近交系大鼠、各种抗体、引物合成、细胞培养、蛋白质组学试剂及Westernblot检测等各种试剂4.15．计划管理费总经费的5％0.36．人员费总经费的10％0.6注：开支范围和标准参见《浙江省省级科技项目经费管理暂行办法》（浙财教字[2002]20号）。ZJNSF浙江省自然科学基金申请书（2005版）第6页申请书版本号：58504619申请者承诺：我保证：（1）申请书内容是真实的；（2）恪守科学道德，伦理道德的基本原则；（3）项目组成员知晓申请书内容，并自愿参与研究工作；（4）已如实填报申请者正在主持的国家和省部资助经费在20万元及以上的研究项目名称、来源和研究期限；（5）如果获得资助，我将履行项目负责人职责，严格遵守浙江省自然科学基金委员会的有关规定，切实保证研究工作时间，认真开展工作，按时报送有关材料。若填报失实或违反规定，本人将承担全部责任。签字：日期：项目依托单位承诺:已按规定对申请人的资格和申请书内容进行了审核。申请项目如获资助，我单位保证对计划实施所需要的人力、物力和工作时间等条件给予保障，严格遵守浙江省自然科学基金委员会有关规定，督促项目组遵守科学道德和伦理道德的基本原则，督促项目负责人和本单位项目管理部门按照规定及时报送有关材料。依托单位公章日期.ZJNSF浙江省自然科学基金申请书（2005版）第7页申请书版本号：58504619移植物慢性排斥反应动脉硬化血管平滑肌细胞的形态及功能变化研究一、项目研究意义由于移植免疫研究的深入和新型免疫抑制剂如环孢素A和FK506的临床应用，同种移植短期存活率已经得到明显的提高，但同种移植物长期存活率却未取得类似的改善[1,2]。慢性排斥反应导致移植物慢性失功，一直是影响移植物长期存活的主要原因之一[3]，随访4至5年30%肾移植患者具有慢性排斥反应的临床病理表现，心脏移植患者1年冠状动脉硬化发生率6%-18%，术后2年23%，5年达50%；对大宗成人肝移植病例的5年和5年以上的晚期死亡率分析表明，慢性排斥反应者占5%-19%[1,2]。慢性排斥反应的临床症状，因移植器官类型的不同而有相应表现，但具有一个共同组织学表现即移植物动脉硬化[4]，其特征是泡沫细胞性闭塞性动脉病变，如动脉内膜增厚、内膜的单核细胞和巨噬细胞浸润、内膜下无细胞基质的聚积、管腔狭窄、中膜萎缩及间质纤维化。继发于闭塞性动脉病变所致的移植物缺血缺氧，可引起移植肾肾小球硬化、间质纤维化、肾小管萎缩、终致肾梗死，移植肝的胆管消失和肝纤维化，移植心的缺血缺氧而致心绞痛、心肌梗死与猝死[5]。近年来，尽管在移植器官的保存、免疫抑制治疗等方面取得了巨大进步，但临床上移植物3年动脉硬化的累积发生率仍达40％，5年则高达50％[6]，故深入研究移植物动脉硬化的发生机制，对防治慢性排斥反应导致移植物慢性失功具有重大的临床意义。迄今为止，同种移植物动脉硬化的发生机理尚不十分明