第十章 核酸类药物分析(NO)

第十章核苷酸类药物的分析1、磷酸2、戊糖3、碱基二、核苷酸的组成核酸紫外吸收特征核酸的特征紫外吸收波长为260nm，是由碱基引起的。二、核酸的化学性质第二节嘌呤类核苷酸药物分析1、磷酸2、戊糖3、碱基（嘌呤碱）核苷酸的组成一、鉴别（一）戊糖的鉴别显色反应显色反应：核糖与地衣酚（3,5-二羟甲苯）试剂反应呈鲜绿色。脱氧核糖与二苯胺试剂反应生成蓝色化合物，而核糖无此反应。1.苔黑酚反应（RNA中核糖的反应）RNA+浓HCl+苔黑酚蓝绿色2.二苯胺反应（DNA中脱氧核糖的反应）DNA+二苯胺+浓H2SO4蓝色物100℃、Fecl3少量冰醋酸RNA与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变成糠醛，后者与3,5-二羟甲苯反应呈鲜绿色，该反应需用三氯化铁和氯化铜作催化剂，反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20~250微克范围内，光吸收与RNA浓度成正比。地衣酚反应特异性较差，凡是戊糖均有此反应。RNA和其他杂质也能给出类似的颜色。二苯胺反应根据对去氧戊糖的特异的显色反应进行DNA定量的方法。其原理是DNA经酸处理，使从嘌呤核苷酸中游离出的去氧核糖在乙醛存在下和二苯胺反应，然后测定反应液的蓝色。由于它不与RNA反应，所以可用来定量测定全核酸中的DNA含量。（595nm)3．核糖的鉴定取试管2支，按表操作将2支试管放入沸水浴内加热10min管号样品液5%硫酸3，5二羟甲苯试剂测定对照4滴——4滴6滴6滴4．脱氧核糖的测定取试管2支，按表操作将两管同时放人沸水浴l0min管号样品液5%硫酸二苯胺试剂测定对照20滴——20滴40滴40滴（二）嘌呤的鉴定嘌呤碱：用硝酸银与之反应生成白色的絮状嘌呤银化合物，遇光变红棕色。嘌呤碱的鉴定:取试管2，按表操作管号样品液5%硫酸浓氨水5%AgNO3测定对照20滴——20滴数滴使呈碱性数滴使呈碱性10滴10滴（三）磷酸的鉴别磷酸：用钼酸铵与之作用可生成磷钼酸，磷钼酸可被氨基奈酚磺酸还原形成蓝色钼蓝。1.钼蓝反应（核酸中磷酸的反应）Pi+(NH4)3MoO4+Vc钼蓝（蓝色）磷酸的鉴定取试管2支，按表操作管号样品液5%硫酸钼酸铵试剂氨基奈酚磺酸测定对照10滴——10滴5滴5滴20滴20滴（四）特征吸收光谱UVIR核酸的紫外吸收由于核酸分子所含的碱基中都有共轭双键，故具有特殊的紫外吸收光谱，吸收高峰在260nm处，蛋白质的紫外最大吸收峰是在280nm处，且核酸在230nm处有一低谷。λmax=260nm•红外特征光谱红外光谱仪横坐标波数，纵坐标百分透过率，谷底表示吸收峰。二、检查（一）一般检查酸度水分无机盐有机物颜色澄清度（二）蛋白质检查磺基水杨酸法原理：蛋白质为两性物资，在酸性环境中带正电荷，而磺基水杨酸根带负电，正好与蛋白质结合沉淀，发生浑浊。显示液体中有蛋白存在。λmax=260nm三、含量测定第三节嘧啶类药物的质量分析1、磷酸2、戊糖3、碱基（嘧啶）嘧啶核苷酸的组成