胃肠道感染的病原菌及其检测方法

胃肠道感染的病原菌及其检测方法主要内容•食管炎的病原菌•胃炎主要的病原菌•急性胃肠炎的病原菌–细菌性–寄生虫–病毒食管炎•最常见原因是非感染性的，如胃食管反流性疾病•感染见于免疫功能受损患者食管炎的实验室诊断病原因子诊断方法最优标本转运要求最佳时间白色假丝酵母菌KOH，真菌培养，组织病理学检查食管刷食管活检无菌容器，室温2h福尔马林容器室温2-14dHSV培养，直接荧光抗体（DFA）食管刷或食管活检病毒转运装置，冰上，立即核酸扩增（NAAT）食管刷或食管活检密闭容器,室温,2h组织病理学检查食管活检福尔马林容器室温2-14dCMV培养DFA食管刷或食管活检病毒转运装置，冰上，立即NAAT食管刷或食管活检密闭容器,室温,2h免疫组织化学染色食管活检福尔马林容器室温2-14d胃炎病原因子诊断方法最优标本转运要求最佳时间幽门螺杆菌粪便抗原检测粪便密闭容器,RT,2h尿素呼吸试验放射性标记物呼气特殊收集装置革兰染色幽门螺杆菌培养胃窦部活检组织2块无菌容器，RT,立即组织病理学检查同上福尔马林容器室温2-14d快速尿酶检测同上密闭容器,RT,2h幽门螺杆菌•微需氧，初次分离需5-10%O2，5-12%CO2，5-10%H2,37度，湿度95%，•脑心浸液琼脂、布氏琼脂或哥伦比亚琼脂+5-10%马或羊血•改良Skirrow琼脂或在Karmail弯曲菌培养基上3-5天。•氧化酶+，触酶阳性，不发酵葡萄糖，尿素酶强阳性。胃粘膜溃疡病理切片革兰染色胃肠炎，感染性和中毒性腹泻病原因子（细菌性）诊断方法最优标本转运要求最佳时间沙门菌，志贺菌，弯曲菌常规粪便细菌培养粪便密闭容器，RT,2h。Cary-Blair转运培养基RT,24hEHEC,包括O157：H7和其他产志贺毒素的大肠埃希菌培养O157：H7志贺毒素免疫学检查NAAT测志贺毒素基因粪便密闭容器，RT,2h耶尔森菌属，弧菌属，气单胞菌，邻单胞菌属，迟钝爱德华菌，金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌（ETEC、EIEC、EPEC、EAggEC）特殊粪便培养粪便密闭容器，RT,2h蜡样芽孢杆菌，产气荚膜梭菌，金黄色葡萄球菌特殊过程进行毒素检测粪便密闭容器，RT,2h肉毒梭菌鼠致死试验粪便密闭容器，储存转运，4度，禁止冷冻艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原和毒素检测，细胞毒素或NAAT确证粪便密闭容器，RT,2h志贺菌与沙门菌SS平板双糖斜面初步观察粪便培养操作流程志贺菌、沙门菌重要的生化试验发酵葡萄糖产酸乳糖产酸吲哚动力H2S志贺菌+-宋内0%+福氏42%+痢疾40%+鲍氏37%+--沙门菌+--++/d志贺菌的血清分型•A群痢疾志贺菌1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15•B群福氏志贺菌1a,1b,2a,2b,3a,3b,4a,4b,4c,5a,5b,6Boyd88,6孟城型，6新城型，X,Y•C群鲍氏志贺菌1-19型•D群宋内志贺菌迟缓发酵乳糖，一个血清型，两个变异相伤寒副伤寒沙门菌的初步生化TSI/KIAMIU斜面/底层产气H2S动力吲哚脲酶伤寒沙门菌K/A-+/-(97%+)+--甲型副伤寒沙门菌K/A+-/+(10%+)+--乙型副伤寒沙门菌K/A+++--丙型副伤寒沙门菌K/A+++--其它产生H2S的肠杆菌科细菌•迟钝爱德华100%•奇异变形杆菌98%，普通变形95%，潘氏变形30%•魏氏枸橼酸杆菌100%，弗劳地枸橼酸杆菌78%，布氏枸橼酸杆菌60%•泉居布拉格菌89%沙门菌血清型确定流程1步系统生化反应符合沙门菌特点2步A-F多价O血清凝集3步O特异性群抗原凝集4步H因子血清第一相定型5步H因子第二相辅助定型A-F多价凝，O9凝，Hd凝为伤寒沙门菌沙门菌血清型确定流程1步系统生化反应符合沙门菌特点2步A-F多价O血清凝集不凝Vi抗原是否凝集，凝集则菌液沸水15-30分钟，冷却后，继续2-5步•Vi抗原不凝，①考虑A-F群以外的沙门菌②直接进行3步O特异性群抗原凝集，如凝集可能是A-F多价O血清效价不高原因A-F群沙门菌特异性群抗原•A群O2•B群O4•C1群O7•C2群O8•D群O9•E群O3，O10•F群O11弯曲菌•微需氧，有些菌株需氧或厌氧生长•初次分离需5%O2，10%CO2，85%N2,35-42度，含血平板生长良好•粪便选择性培养基CCDA(活性炭-头孢哌酮-去氧胆酸钠琼脂）CSM，Skirrow,Campy-CVA•氧化酶，触酶阳性，生化不活泼，既不氧化也不发酵血培养分离的弯曲菌常见致腹泻的大肠埃希菌血清型胃肠炎，感染性和中毒性腹泻病原因子（细菌性）诊断方法最优标本转运要求最佳时间沙门菌，志贺菌，弯曲菌常规粪便细菌培养粪便密闭容器，RT,2h。Cary-Blair转运培养基RT,24hEHEC,包括O157：H7和其他产志贺毒素的大肠埃希菌培养O157：H7志贺毒素免疫学检查NAAT测志贺毒素基因粪便密闭容器，RT,2h耶尔森菌属，弧菌属，气单胞菌，邻单胞菌属，迟钝爱德华菌，金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌（ETEC、EIEC、EPEC、EAggEC）特殊粪便培养粪便密闭容器，RT,2h蜡样芽孢杆菌，产气荚膜梭菌，金黄色葡萄球菌特殊过程进行毒素检测粪便密闭容器，RT,2h肉毒梭菌鼠致死试验粪便密闭容器，储存转运，4度，禁止冷冻艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原和毒素检测，细胞毒素或NAAT确证粪便密闭容器，RT,2h小肠结肠炎耶尔森菌•SS,MAC平板上生长缓慢，菌落小，25度24h直径0.1-0.3mm，圆形，扁平，光滑边缘整齐透明或半透明，无色或淡橘红色菌落.48hMAC0.5mm，SS1-2mm•最佳分离培养基是耶尔森CIN培养基，形成1mm牛眼样菌落迟钝爱德华菌•肠杆科，爱德华菌属•MAC,SS上不发酵乳糖，SS上产H2S黑色中心•普通营养琼脂平板上24h，35-37度，形成0.5-1.0mm的较小的菌落。周鞭毛•对人可引起胃肠炎和腹泻，类沙门菌肠炎弧菌属•O/F(F),氧化酶+，动力+。•耐碱不耐酸，霍乱弧菌PH8.8-9.0蛋白胨水中6-8h表面形成菌膜。•硫代硫酸钠-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂（TCBS）霍乱弧菌黄色，副溶血弧菌绿色•4号琼脂上还原亚锑酸钾成金属锑，菌落中心灰黑色霍乱弧菌在4号琼脂上霍乱弧菌的血清型•据O抗原的不同，霍乱弧菌现分为155个血清型•O1，O139群可引起霍乱•其余的血清群分布于地表水中，可引起人类胃肠炎等疾病，但从未引起霍乱的流行，称为非O1群，非O139群霍乱弧菌。副溶血弧菌和其他弧菌•副溶血弧菌主要引起肠道感染，通常与食用生的或未烹饪熟的鱼或甲壳类水生生物有关。•副溶血弧菌所致的肠道感染，症状包括反胃、腹部疼痛痉挛、呕吐、低烧、寒战、水样腹泻等。•河流弧菌引起散发的人类腹泻•豪氏弧菌引起中到中度的腹泻弧菌和气单胞菌试验弧菌科气单胞菌科邻单胞菌发光杆菌属O/129（150ug/片）敏感SRSSTCBS培养基生长+--+精氨酸双水解酶-/++++甘露醇发酵+/-+--嗜盐性+/---+氧化酶+（麦氏弧菌除外）++v外鞘端生鞭毛+---气单胞菌•主要存在水生系统，适宜在盐水和淡水交界处生活，污水中密度较高•病原菌以嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和维氏气单胞菌最多•可产产毒素，引起肠内感染，出现腹泻和水样便。•TCBS和4号上不生长。分离碱性胨水转血平板金黄色葡萄球菌、芽孢杆菌、产气荚膜梭菌•是食物中毒的主要病原•典型的胃肠道症状开始于食入污染食物24h内，比沙门菌、志贺菌、弯曲菌的潜伏期长。•芽孢杆菌有两种不同的肠道症状–短潜伏期疾病（呕吐综合征）–长潜伏期疾病（腹泻综合征）•产毒素细菌导致的疾病常在24h内缓解，不需要抗生素治疗大便金黄色葡萄球菌抗生素相关腹泻（AAD）•抗生素引起腹泻的机制–肠粘膜对抗生素过敏–抗生素的毒性效应–胃肠道动力改变（如红霉素）–正常肠道菌群的改变。导致碳水化合物或者胆汁酸经肠道菌群代谢障碍，或致致病菌过度繁殖•与AAD相关的细菌：产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌、产酸克雷伯菌、假丝酵母菌、艰难梭菌难辨梭状芽孢杆菌生存条件致病机制致病性诊断方法培养方法艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测治疗-轻中度感染治疗—中度/特重多次复发者治疗胃肠炎，感染性和中毒性腹泻病原因子（寄生虫）诊断方法最优标本转运要求最佳时间溶组织阿米巴，人芽囊原虫（Blastocystishominis）脆弱双核阿米巴（Dientamoebafragilis），大肠纤毛虫（Balantidiumcoli），蓝氏贾第鞭毛虫，线虫类包括似蚓蛔线虫②（Ascarislumbricoides）、粪类圆线虫i、毛首鞭形线虫（Trichuristrichiura）、钩虫（Hookworms），绦虫（Cestodes，Tapeworms），吸虫（Trematodes）虫卵和寄生虫检查粪便未加固定剂的粪便标本RT，1h溶组织阿米巴种特异性免疫检查粪便蓝氏贾地鞭毛虫酶免疫检查粪便隐孢子虫属直接荧光免疫粪便隐孢子虫，环孢子虫浓缩标本改良抗酸染色粪便微孢子虫浓缩标本改良三色染色粪便蛲虫胶带拭取肛周RT,2h钩虫隐孢子虫概述形态致病性临床表现流行病学•通过水污染物传播•1993年美国威斯康星州密尔沃基市，水源污染导致37万人感染•动物间的传播（羊和牛）•人与人接触（看护者和被看护者）以及娱乐用水实验诊断隐孢子虫改良抗酸染色治疗•无症状患者和免疫力较强的患者只需补液、补充电解质•1-11岁的儿童患者推荐使用硝唑尼特胃肠炎，感染性和中毒性腹泻病原因子（病毒）诊断方法最优标本转运要求最佳时间杯状病毒（calicivirus）诺如病毒（norovirus）肠道腺病毒肠道病毒/副埃可病毒轮状病毒NAAT粪便密闭容器，RT,2h。轮状病毒和肠道腺病毒EIA粪便密闭容器，RT,2h肠道腺病毒肠道病毒/副埃可病毒病毒培养粪便病毒转运培养基，置冰上,2hCMV组织病理学活检福尔马林容器，RT,2-14d病毒培养活检无菌容器，常温立即杯状病毒（calicivirus）诺如病毒（norovirus公共卫生爆发调查粪便密闭容器，RT,2h小结•胃肠道感染的病原菌比较复杂，有细菌、寄生虫、病毒•了解感染的种类有助于采取针对性的检测方法和治疗方法•针对我们不熟悉的病原体应多学习了解其检测方法的新进展谢谢！