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毕业生：指导教师：2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩研究背景及意义实验部分报告内容CONTENTS结果与讨论结论2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩黄酮类化合物是一类分布很广的多酚类天然产物，几乎存在于所有的绿色植物中，具有多种明显的药理活性。目前对骨碎补总黄酮的研究主要在抗炎、抑制疼痛等方面。同时黄酮也是一种很强的抗氧化剂，可有效清除体内的超氧阴离子自由基，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。1.研究背景及意义2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩黄酮的提取工艺采用乙醇热回流法提取。工艺流程：骨碎补粉碎→过筛（40目）→石油醚脱酯→乙醇热回流提取→过滤→滤液浓缩→总黄酮提取液2.实验部分2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩乙醇浓度对提取率的影响提取温度对提取率的影响料液比对提取率的影响提取时间对提取率的影响单因素实验2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩正交试验设计为了全面考查影响因素，设计了4因素3水平的正交试验，试验因素水平见下表：2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩骨碎补总黄酮的抗氧化活性研究采用邻苯三酚自氧化法取50mmol/LTris-HCI缓冲溶液(pH=8.2)4.5mL，与4.1mL蒸馏水混匀后在25℃水浴中保温20min，分别加入0.1mL的不同浓度的黄酮样品液，取出后立即加入在25℃预热过的3mmol/L邻苯三酚0.3mL，迅速摇匀后倒人比色杯，420nm下测定吸光度Ai。以蒸馏水为空白作为对照，测定吸光度A0。清除率的计算：清除率（%）=(A0-Ai)/A0×100%式中：A0以蒸馏水为空白实验的吸光度；Ai为加入不同浓度黄酮粗提取液的吸光度。黄酮清除O2-·自由基能力的测定2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩黄酮清除·OH能力的测定采用邻菲罗啉法在6个25mL容量瓶中一次加入9mmol/LFeSO4，9mmol/L水杨酸各2mL，不同浓度的黄酮粗提取溶液1mL，8.8mmol/LH2O2启动反应1h，用蒸馏水定容，静置，于510nm处测定吸光度Ai。以蒸馏水为空白，测定吸光度A0。清除率（%）=(A0-Ai)/A0×100%其中：A0为空白实验的吸光度；Ai为不同浓度反应液的吸光度。2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩乙醇浓度对提取率的影响3.实验结果与讨论4050607080903.053.103.153.203.253.30总黄酮含量(%)乙醇浓度(%)图1乙醇浓度与总黄酮含量的关系曲线由图1得知:随着乙醇浓度的增加，黄酮的得率升高。当浓度大于60％时，得率的有所降低。故最佳乙醇浓度为60％。2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩提取温度对提取率的影响由图2可知：40℃到60℃总黄酮含量有较大的增长,但60℃到90℃黄酮含量减小。而60℃时总黄酮含量最大。故最佳提取温度为60℃。4050607080902.02.53.03.54.0总黄酮含量(%)提取温度(℃)图2提取温度与总黄酮含量的关系曲线2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩料液比对提取率的影响由图3可知：随着料液比的提高，黄酮得率上升，但超过1:30后上升趋势不明显，料液比为1:30最好。1:201:301:401:501:601:703.163.183.203.223.243.26总黄酮含量(%)料液比(mL/g)图3料液比与总黄酮含量的关系曲线2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩提取时间对提取率的影响由图4可知：黄酮含量随着提取时间的增加而增大，当超过3h时，总黄酮含量反而降低。故选用3h为宜。1.01.52.02.53.03.52.52.62.72.82.93.03.13.23.3总黄酮含量(%)提取时间(h)图4提取时间与总黄酮含量的关系曲线2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩正交试验结果比较左表中4因素的R值的大小，可以看出A因素，即乙醇浓度为最重要因素。四因素对黄酮提取量影响的主次顺序为乙醇浓度浸提时间浸提温度料液比，并且最佳的提取工艺条件为：乙醇浓度60%、料液比1:30、提取时间3h、提取温度60℃，即A1B2C3D2。2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩黄酮清除O2-·自由基能力的实验结果0.00.20.40.60.81.01416182022242628清除率(%)图5提取浓度与清除率的关系曲线由图5可知：在实验浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对清除O﹣2·自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩黄酮清除·OH自由基能力的实验结果0.00.20.40.60.81.068101214161820清除率(%)图6提取浓度与清除率的关系曲线由图6可知：在一定的浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对清除·OH自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。2012年长春工业大学本科生毕业论文答辩4.结论（1）采用乙醇热回流提取法，从骨碎补中提取总黄酮。（2）在单因素实验基础上，通过正交试验设计，研究得到骨碎补中总黄酮提取的最佳工艺条件：乙醇浓度60%、料液比1:30、提取时间3h、提取温度60℃。在此条件下，用紫外分光光度法测得总黄酮的含量为3.51%。（3）测定黄酮对自由基的清除能力来研究骨碎补中总黄酮抗氧化活性。并且骨碎补中黄酮类化合物在实验浓度范围内清除O2-·、·OH效果都随黄酮浓度的增加而加强。欢迎各位老师提问和指导