交叉配血知识

12020/2/28交叉配血知识讲座22020/2/28RBC表面有丰富唾液酸，在中性环境中带负电荷，互相分离。可通过缩短细胞间距，以及在致敏细胞上的抗体之间搭桥使RBC凝集。凝集一般为二个步骤抗体吸附于RBC抗原上成为致敏状态致敏RBC凝集形成块状ΫΫΫΫΫΫ32020/2/28标本的采集及要求一血型二不规则抗体的筛选三交叉配血四一二三四42020/2/28标本的采集与要求52020/2/281.标本要新鲜:前三个月内输血或妊娠:配血试验标本抽取48h,避免因回忆反应产生的抗体漏检。新近的输血或妊娠：可引起意外抗体迅速出现,如果对病人的输血史或人身史不明,使用的标本必须是输血前48h内抽取的。血量约为5ml。2.使用右旋糖酐、pvp等：治疗前抽取标本备用,防止RBC缗钱状凝集的干扰标本要具有代表性，能代表患者目前状况62020/2/283.24小时内输了12u血后：可输注未经交叉配血的ABO、RH同型的血液,因为原始交叉配血用的血清已不能代表患者血清的情况。4.防止血样的稀释和溶血的产生：溶血标本一般不使用,因为血清中游离血红蛋白可掩盖在输血前实验中抗体反映引起的溶血5.标本标识：唯一性标识无误、与输血申请单一致6.使用血浆标本：应排除纤维蛋白原的干扰7.输血后标本保存：2-8℃,至少一周。72020/2/28血型1.红细胞悬液的配制2.离心力的标准3.离心后结果观察4.盐水试验5.正反定型结果不一致原因及处理82020/2/281.红细胞悬液的配制洗涤洗涤目的:去除RBC表面物质①少量的血浆蛋白②已溶解红细胞的基质（有竞争抗体的作用）③抗凝剂（有抗补体的作用）至少要用大量生理盐水洗一次浓度2%：一般用于抗体效价的测定5%：一般用于血型鉴定、配血试验、抗球蛋白试验等大多数血型血清学试验10%：一般用于测定抗体的亲和力试验92020/2/282.离心力的标准不同规格离心机，力矩不同，统一离心转速，但没有统一离心力。离心转速换算公式：RCF=1.118×10-5×(rpm)2×R(cm)3.离心后结果观察注意事项将试管成30-45℃角拿在手上，细胞扣朝上，手腕轻轻用力，用液体去冲细胞扣。切不可用力使劲摇试管，那样凝集颗粒会被摇散，弱凝集则会误判为阴性。-细胞成细沙状沿试管壁流下+细胞成块状或成齿状沿试管壁流下102020/2/28常用的记录符号及所示的凝集强度4+一个大的凝集块,背景透明,无游离细胞3+数个大凝集块,背景透明,无游离细胞2+许多小凝集块,肉眼可见,大小均匀,背景基本透明,有游离细胞1+很小的凝集块,肉眼可见,背景不透明,游离细胞较多,需要用显微镜观察W+微小凝集块,肉眼很难看清,背景混浊,要用显微镜观察O无凝集,无溶血,全部是游离细胞,要用显微镜观察PH部分溶血H完全溶血WF混合外观112020/2/284.盐水试验多采用立即离心法正确的操作是：RBC悬液加到血清后立即离心并观察结果反应时间过长而延误离心对ABO血型系统的抗体检出影响室温2分钟后离心可能使3+～4+的凝集减弱为0+～1+,并有溶血室温5分钟后离心原有凝集可能消失,并有溶血有的标本延迟离心原有凝集会变为既不凝也不溶血,难以发现ABO血型的不配合。（多发生在O型人的血清抗体与A型、B型或AB型红细胞反应的试验中,发生率为2%-3%.发生机制是反应强的抗A、抗B和抗原强度强的A、B抗原作用,补体C1在有Ca2+存在的条件下,固定到红细胞膜上,妨碍了红细胞的凝集,进一步可能引起溶血）解决的方法：A:血清与红细胞混合后立即离心。B:用血浆或灭活的血清做试验C:用EDTA盐水配制红细胞悬液,D:稀释血清122020/2/28加样时先加血清再加红细胞，以避免漏加；抗体和抗原的比例一般为2：1。必须要做正反定型实验才能确定血型。正定型试验有条件可加做抗AB（检测弱A、弱B）反定型一定要加做O细胞,（发现不规则抗体）132020/2/285.正反定型结果不一致原因：技术、受检红细胞或血清本身（1）技术和管理错误器材不洁——假阳试剂污染或不足——假阳标本和试剂搞错——假阳、假阴离心过度或不足——假阳、假阴结果记录或判断错误——假阳、假阴漏加试剂——假阴阳性反应产生溶血现象未能识别——假阴142020/2/28（2）标准血清效价太低、亲和力不强。如抗A血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。（3）红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。（4）血清异常华通胶或血清蛋白异常引起串钱状形成，影响反定性结果（5）红细胞致敏在含高蛋白介质试剂中可发生凝集，产生假阳性（6）近期曾异型输血，病人血液标本成为不同型别的红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝集”现象。（7）疾病因素导致抗原减弱某些白血病病人ABO血型抗原可受到抑制，检出困难。（8）红细胞多凝集现象RBC因遗传或获得性的表面异常，发生多凝集现象。152020/2/28（9）获得性类B由于G-杆菌作用，RBC可获得“类B”活性（10）异常血浆蛋白病人血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例异常和高浓度的FIB等能导致缗钱状形成，造成假凝集现象（11）近期内进行大量的血浆置换治疗，影响抗体效价，造成反定型困难。（12）不规则抗体的产生受检者血浆中，含有ABO血型抗体以外的不规则抗体，如自身抗I，与试剂A、B细胞上的相应抗原起反应。（13）低丙种球蛋白血症可能会因免疫球蛋白水平全面下降使血清定型时不见凝集或仅见弱凝集反应。（14）药物等因素药物、右旋糖酐等静脉注射某些造影剂可引起红细胞聚集而类似凝集。（15）年龄因素如新生儿、老年人等。162020/2/28正反定型不一致的处理方法首先要重做试验一次。严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察结果，可解决明显的问题.对一些疑难问题需进一步检查。可初步采取以下措施：1)重新抽样，纠正因污染或搞错标本造成的不符。2)将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗A、抗B、抗A+B做实验，可得到其他有用信息。有条件加做抗H试验3)对受检者作直接抗人球蛋白试验，看RBC有没有被致敏4)如疑为A抗原或B抗原减弱，可将受检红细胞与抗A或抗B血清作吸收放散试验。5)如试验结果红细胞成缗钱状排列，加等渗盐水1滴混匀，往往可使缗钱现象消失。6)做反定型试验时需要加做O细胞。172020/2/28疑难血型病例1.白血病血型变异2.血浆蛋白紊乱3.类B4.多/全凝集5.冷凝集6.ABO亚型182020/2/28三、不规则抗体的筛选1.筛选目的2.筛选步骤3.不规则抗体筛选与交叉配血结果分析192020/2/28定义：抗A、抗B以外的血型抗体，多为ＩｇＧ抗体。主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生。血型抗体是体内免疫系统所产生的针对血型抗原发生特异性反应的一类免疫球蛋白类物质。人类血清中有5种类型：G、M、A、D、E，其中IgM、G是最重要的2种抗体。RBC血型抗体分为：完全抗体：能在盐水中凝集相应RBC，又称盐水抗体。主要是分子量较大的IgM不完全抗体：能结合RBC上抗原致敏RBC，但在盐水中不能使之凝集。主要是分子量小的IgG，需用抗球蛋白Ϋ202020/2/281.筛选目的：发现有临床意义的不规则抗体，以确保安全有效用血。最好献血者血清也作不规则抗体的筛选，如有发现不规则抗体，鉴定此抗体，找出能与其相配合的血液，不可随便用于输血。不规则抗体多为IgG抗体，盐水介质中不能凝集，只能致敏相应抗原的RBC,必须通过特殊介质(酶、抗人球蛋白、poly等)才能使致敏RBC出现凝集反应，这些方法的选择可按抗体的血清学行为和试验的具体条件来确定。临床上通常所称的“同型血”是指ABO血型系统和Rh血型系统相同,其它红细胞血型系统未必相同。如果交叉配血不仔细,或只用盐水介质配血,则可能检查不出ABO血型系统之外的不规则抗体,而此抗体与相应抗原发生免疫反应,可导致溶血性输血反应的发生。212020/2/282.筛选细胞：通常是由2-3个单人份的O型红细胞组成一套筛选细胞试剂，包括以下常见的抗原：Rh系统、MNSs系统、P系统、Lewis系统、Duffy系统等。3.抗体筛选试验局限性：不一定能检出所有有临床意义的不规则抗体。一些抗低频率抗原的抗体则可能漏检。222020/2/28不规则抗体筛选的操作步骤被检血清+抗体筛选细胞→盐水介质或非盐水介质（凝聚胺、抗球蛋白、酶）病人血清病人血清病人血清病人血清筛选细胞I筛选II筛选III病人红细胞血清+病人红细胞血清+筛选细胞IPolyGram100ulLIM600ul血清+筛选细胞II血清+筛选细胞IIIResuspending100ul非特异性凝集无凝集则重做特异性凝集低离子介质中孵育，促进抗体与RBC结合凝聚胺含多价阳离子，中和RBC表面负电荷，减少RBC间距离枸橼酸钠重悬液，为负电荷，中和凝聚胺正电荷，使正常RBC凝集解散1.2.3.4.对Kell系统抗体不理想，阴性结果需做抗球。中国人群几乎100%为kk型，具有K抗原的几乎为0，至今未发现Kell系统抗体232020/2/28④抗筛阳性，交叉配血相容自身抗-H抗-Lebh抗筛阳性，但献血者红细胞可能正好不含与相应的抗原，因此配血可以相合。⑤抗筛阳性，交叉配血不相容同种异体抗体存在，自身对照成阴性同种异体抗体存在，自身对照成阳性冷反应自身抗体能引起难以确定的阳性温反应自身抗体能引起难以确定的阳性“钱串状”红细胞形成引起非真实的阳性结果③抗筛阴性，酶试验、抗球蛋白交叉配血试验等不相容献血者红细胞DAT试验为阳性受血者血清抗体活性很弱，则抗筛试验成阴性抗体与低频率抗原反应②抗筛阴性，盐水直接离心交叉配血不相容献血者红细胞是ABO血型不相容存在在室温反应的同种异体抗体献血者的红细胞是多凝集红细胞4.抗筛和交叉配血结果分析242020/2/28输血前试验“三保险”血型、抗筛、交叉配血相合%随机64ABO99.4Rh99.8抗筛99.94交叉配血99.95自身输血100252020/2/28交叉配血试验也称配合性试验，实际上是检查不配合性，使病人，献血者血液之间没有相对应的抗原、抗体成分（如：患者体内有抗A抗体，献血者RBC上就不能有A抗原）试验应在37℃下进行。四、交叉配血262020/2/28盐水法用于IgM抗体的检出、盐水配血试验、用盐水抗体鉴定的血型抗原，如ABO、MN、P等血型系统的抗原。当IgG抗A、抗B的浓度足够大时，在盐水介质里也能与相应的红细胞发生凝集反应聚凝胺Poly是带高价阳离子的多聚物，溶解后能产生正电荷，中和RBC表面负电荷，缩短RBC间距，引起正常RBC可逆非特异性凝集、抗体致敏的红细胞则凝集不可逆酶技术蛋白水解酶能消化破坏RBC表面唾液酸，减少RBC表面负电菏，缩短RBC间距，IgG抗体能与有相应抗原的RBC产生凝集。适合：酶法能显著增强Rh和Kidd系统的抗原抗体反应，不适合：蛋白酶破坏M、N、S、s、Fya、Fyb抗原AGT抗人球又称Coombs试验,是检查IgG抗体的最有效方法。除可测定RBC上IgG抗体外,还可测定IgM、IgA,、补体C3、C4直接：测体内致敏RBC用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏,如新生儿溶血病、溶血性输血反应、自身免疫性溶血性贫血.间接：测血清中不完全抗体常用于血型鉴定、抗体的检出和鉴定、输血前交叉配血试验等.272020/2/28酶处理细胞的凝集试验方法一期酶法也称直接法，菠萝酶和木瓜酶适用于一期法。操作时在已标记好的试管中加入100ul的血清和50ul的红细胞悬液，再加50ul的酶溶液，37℃孵育15分钟，1000转/分离心1分钟，轻摇后观察结果二期酶法也称间接法，木瓜酶和无花果酶适用于二期法。二期分两步，第一步是酶处理红细胞：在1份洗涤的压积红细胞中加两份木瓜酶溶液，37℃孵育30分钟，用大量的Ph7。4的PBS洗涤3次，用生理盐水配成5%的悬液备用。第二步是在已标记好的