Customer 病毒去除

PlatzhalterBild赛多利斯的病毒去除技术2.病毒过滤3.病毒灭活4.病毒吸附1.法规方面内容概要内容概要2.VirusFiltration3.VirusInactivation4.VirusAdsorption1.法规方面检测原料血浆(献血者监控,检测/生产监控)生物工程(原料,细胞系,基因稳定性)哺乳动物细胞(细胞来源跟踪监控)验证病毒去除工艺病毒防护,病毒数降低程度,交叉污染控制检测成品法规:安全策略PaulEhrlichInstitute病毒去除–用户方面-用户须形成完备的病毒去除观念综合采用病毒灭活和病毒分离截留的方法缺少相关的内源和外源病毒样品法规要求病毒去除率应在12to20log10至少使用两种病毒去除方法至少有一种方法是针对无包膜的小病毒CPMP/ICH/295/95:NoteforGuidanceonQualityofBiotechnologicalProducts.“ViralSafetyEvaluationofBiotechnologyProductsDerivedfromCellLinesofHumanorAnimalOrigin.October1997”病毒污染-污染机会-病毒颗粒和相关病毒潜在的污染-病毒意外污染-细胞系源于被病毒侵染的动物操作处理中污染污染的试剂ICHQ5A:ViralSafetyEvaluationofBiotechnologyProductsDerivedfromCellLinesofHumanorAnimalOrigin,1997病毒去除–主要供应商-病毒过滤Asahi病毒吸附PallMilliporeGEHealthcareMerckBiorad病毒灭活GEHealthcareNewYorkBloodcenterpatentSartorius提供全部技术完整的病毒去除平台成品灌装亲和层析柱或其他纯化步骤病毒截留滤芯抛弃型滤器病毒去除针对所有病毒紫外灭活抛弃型紫外灭活装置病毒灭活针对非包膜小病毒膜吸附抛弃型层析装置病毒吸附针对所有病毒还可去除HCP,DNA/RNA和内毒素内容概要2.病毒截留过滤3.VirusInactivation4.VirusAdsorption1.RegulatoryAspectsVirosart®CPV–病毒截留过滤器-膜材质为聚醚砜典型病毒截留率PPV或PP7(约20nm粒径)，LRV4PR772(约50nm粒径)，LRV6完整性测试使用水(4.5bar@max22ml/min/10”)Sartopore0,1µm作为预过滤蒸汽或高压灭菌病毒去除至少3-4log，并且蛋白收率95%相关的特定和非特定的标准病毒去除特性料液情况(大分子蛋白，宿主细胞，ＤＮＡ等)病毒截留滤器在工艺中的位置挑战性物质(细胞碎片，宿主细胞等)具有可放大性病毒截留滤器应验证考察的方面CPV上表面CPV下表面0,2µm和CPV膜电镜对比0,2µm膜上表面0,2µm膜下表面VirosartCPV挑战实验，料液为2%BSA，PBSpH6,9病毒粒径nm核酸型包膜Log10TCID50/ml料液体积[ml]LRVPPV18-25ss-DNANo8.1506,0Reo-360-80ds-RNANo8.8507.9HAV27-32ss-RNANo5.6505.4BVDV40-70ss-RNAYes7.1505.9SV-4042ds-DNAYes7.6506.3MuLV80-110ss-RNAYes7.8506.2DatadeterminedbyAnalysisGmbHKöln,Germany2004Virosart®CPV–产品线-5cm²抛弃型Virosart®CPVMinisart®20cm²抛弃型Virosart®CPVMidisart®150cm²抛弃型Virosart®CPV囊式滤器0.7m²抛弃型Virosart®CPV囊式滤器1.4m²抛弃型Virosart®CPV囊式滤器2.1m²抛弃型Virosart®CPV囊式滤器AnalysisDr.AndreasImmelmannBiomedizinischeTestGmbHGottfriedHagen-Strasse62D51105KölnGermanyPhone:[phone]Fax:[phone]Email:[e-mail]:[phone]Email:[e-mail]®CPV–文件-Virosart®CPVlaunchpackageVirosart®CPV–完整的文件-文件货号产品手册85030-521-89产品信息85030-522-03操作手册SPK6520-e05021验证指南85030-522-02病毒信息指南85030-521-91Virosart®CPV–标准滤芯订货信息-产品货号Virosart®CPV10”滤芯5452528V1Virosart®CPV20”滤芯5452528V2Virosart®CPV30”滤芯5452528V3Virosart®CPV–囊式滤器定货信息-产品货号Virosart®CPV10”MaxiCaps®5452528V1--SSVirosart®CPV20”MaxiCaps®5452528V2--SSVirosart®CPV30”MaxiCaps®5452528V3--SS内容概要2.VirusFiltration3.病毒紫外灭活4.VirusAdsorption1.RegulatoryAspects紫外灭活自1940s紫外灭活病毒方法已经被证实有效WolfAM,MasonJ,etal.(1947).Ultravioletirradiationofhumanplasmatocontrolhomologousserumjaundice.JAMA135:476-477.最新的研究已经确认紫外法是一种有效的病毒灭活方法HartH,ReidK&HartW(1993).Inactivationofvirusesduringultravioletlighttreatmentofhumanintravenousimmunoglobulinandalbumin.VoxSang.64:82–88ChinS,JinR,etal.(1997).VirucidaltreatmentofbloodproteinproductswithUVCradiation.Photochem.Photobiol.65:432–435WangJ,MauserA,ChaoSF,RemingtonK,TreckmannR,KaiserK,PifatD,HottaJ.Virusinactivationandproteinrecoveryinanovelultraviolet-Creactor.VoxSang.2004May;86(4):230-8.紫外灭活技术X-raysUltravioletLightVisibleLightInfrared780400315280200100Hglowpressurelamp254nmSpectralcurveofDNA/RNAdamageWavelength[nm]UVCUVBUVAVacuumUV破坏病毒的DNA/RNADeanVortices迪恩涡技术优化病毒灭活工艺DeanVorticeslightintensitydepthofpenetrationMinimisedresidencetimes;controlledmixing&withinlaminarflowbydeanvortices紫外灭活病毒保留时间00,511,52相对保留时间病毒／蛋白量一般反应装置带有环状帽损伤蛋白区域低病毒灭活区域特氟龙螺旋管紫外灯石英玻璃管内部凸缘紫外灭活装置结构不同规模的紫外病毒灭活装置2to20l/h20to150l/h小试规模生产规模紫外病毒灭活装置验证方面参数MuLVBVDVReo-3HAVPPV单抗收率*包膜YesYesNoNoNo-核酸类型RNARNARNARNADNA-LRVat50J/m²4,35,736,814,736,5297%LRVat38J/m²3,33,852,562,923,1698%LRVat30J/m²3,33,402,033,043,4098%DatadeterminedbyAnalysisGmbH,Germany2004病毒灭活：蛋白完整性研究*紫外光照能量(J/cm²)单体a活性a%单体%收率mg/ml%收率0.00077.09100%4.98100%0.00976.94100%4.9299%0.02477.00100%4.8998%0.04976.6499%4.8698%0.07276.3799%4.7896%0.14475.1397%4.8197%0.28871.9193%4.4690%0.43169.4390%4.3287%(aaverageoftriplicatesamples)*WangJ,MauserA,ChaoSF,RemingtonK,TreckmannR,KaiserK,PifatD,HottaJ.Virusinactivationandproteinrecoveryinanovelultraviolet-Creactor.VoxSang.2004May;86(4):230-8.PlatzhalterBild病毒灭活:蛋白确认研究光照处理ＣＨＯ抗体(2mg/mlPBS缓冲液)侵染法检测PPV病毒去除log10值4log10PPV抗体性质研究(二维凝胶电泳,Maldi-Toff)紫外光照处理未进行紫外光照处理赛多利斯公司与用户进行研发和临床前研究研究紫外光照对目标蛋白的影响在赛多利斯公司或用户处进行单体活性裂解理化分析SDS电泳,HPLC,二维凝胶电泳...赛多利斯公司与用户进行临床研究1st生产Ｉ期临床样品前进行病毒挑战研究2nd生产III期临床样品前进行病毒挑战研究病毒灭活研究内容概要2.VirusFiltration3.VirusInactivation4.病毒吸附1.RegulatoryAspects膜层析技术:基本原理膜层析产品与颗粒胶电镜照片对比孔径–颗粒胶与层析膜对比-颗粒胶颗粒胶粒径分布为：15-160µm孔径分布为：15-40nm层析膜高开孔结构孔径：250-3000nm膜层析技术:基本原理“不是过滤膜”开放孔结构3µm低压力降单纯的对流传质扩散效应最小化应用于去除：宿主细胞蛋白，DNA，内毒素和病毒膜层析产品与颗粒胶电镜照片对比病毒去除至少3-4log，并且蛋白收率95%相关的特定和非特定的标准病毒去除特性物质平衡和独立的吸附机制具有可放大性膜层析系统应验证考察的方面层析膜形成层析床单张层析膜厚度0.275mm最多60层叠加形成16mm厚柱床36cm²膜面积=1ml床体积=30mg载量膜床体积：1µl到2.1ml载量：30µg到60mg抛弃型技术捕获，精致和病毒去除膜层析–抛弃型实验室规模产品-膜层析–生产规模抛弃型产品-膜床体积：7ml到530ml载量：0.2到16g抛弃型技术捕获，精致和病毒去除膜层析–可重复使用产品-膜床体积：35ml到2.130ml载量：1到64g反复使用技术捕获和精制膜层析去除病毒病毒粒径(nm)包膜SartobindQ去除因子(log10)Run1SartobindQ去除因子(log10)Run2SV-40:SimianVirus-4045no1.250.46