输血相容性检测

输血相容性检测内容提要一二三红细胞抗原抗体检测技术抗体的筛选及鉴定交叉配血四抗筛和配血结果分析五案例分析红细胞抗原抗体检测技术盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验酶介质凝集试验凝聚胺试验微柱凝胶免疫试验盐水介质凝集试验•盐水介质中红细胞上的抗原决定簇与相应抗体分子上的抗原结合位点结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集。•用于IgM抗体的检出、鉴定、盐水配血试验以及血型的鉴定。•当特异性的IgG类抗A、抗B的浓度足够大时，在盐水介质里也能与相应的红细胞发生凝集反应，与红细胞表面抗原位点数目和抗原决定簇位置有关。•方法：玻片法-便于显微镜观察结果试管法-适用于不同温度、便于洗涤•反应温度：4～22℃•临床意义：盐水凝集试验阳性，并在37℃也有活性的抗体有意义。室温有活性，37℃无活性者临床意义不大。•优点：简便、快捷、直观。缺点：不能发现不完全抗体。盐水介质凝集试验•抗人球蛋白试验是1945年由Coombs等人建立的，又称Coombs试验。抗人球蛋白试验的建立在血型血清学上有着非常重要的意义。•分为直接抗人球蛋白试验（DAT）和间接抗人球蛋白试验（IAT）。抗人球蛋白试验•IgG类血型抗体（主要是免疫抗体，如Rh血型抗体）分子量小，与红细胞相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，称之为不完全抗体，但在加入抗-IgG后，以其搭桥作用则可出现凝集反应。•补体成分在体内被红细胞抗原抗体复合物激活以后，结合在红细胞表面。在体外含补体的多克隆抗体，或抗C3b、抗C3d等单特异性抗体与补体致敏的红细胞反应，使之凝集也称为抗球蛋白试验。抗人球蛋白试验原理•DAT是检测体内致敏红细胞的一种方法，用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，尤其是IgG和C3d包被的红细胞。应用：•HDN和自身免疫性溶血性贫血的诊断•红细胞被药物抗体致敏的检查•急性和迟发性溶血性输血反应的检查直接抗人球蛋白试验•IAT是检测血清中不完全抗体的一种，用于测定在体外能引起红细胞致敏的抗体。应用：•血型的鉴定，如Rh血型•抗体的检出和鉴定•交叉配血间接抗人球蛋白试验•原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负电荷，是红细胞相互排斥的原理。蛋白水解酶能消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的间距，使IgG抗体分子能与有相应抗原的红细胞产生凝集•常用的酶（0.5%）：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、无花果酶酶介质凝集试验•优点：酶法能显著增强一些抗原抗体系统的反应活性，Rh和Kidd系统最明显•缺点：①酶法处理RBC，蛋白酶会使RBC的抗原结构破坏和变性（M、N、Fya、Fyb）②操作繁复，少数人对酶液过敏酶介质凝集试验•原理：凝聚胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有多个阳离子基团，能中和红细胞表面的负电荷，并借助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异性凝集。当红细胞与血清在低离子介质中孵育后，IgG抗体与红细胞上相应的抗原结合在凝聚胺的作用下发生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能区分，再加入枸橼酸钠重悬液，枸橼酸根的负电荷与凝聚胺上的正电荷中和，非特异性凝集现象消失，而真正的凝集不会消失。凝聚胺试验微柱凝胶试验•原理：微柱凝胶技术是用特定的化学物质做成微型凝胶柱，柱的上端有一个加样反应室。抗原抗体反应后离心，凝胶柱起过筛作用，红细胞凝集块不能通过凝胶的间隙而留在凝胶的上部，未凝集的红细胞通过凝胶的间隙，沉积到底部。微柱凝胶免疫反应的本质：凝集反应•红细胞抗原与相应抗体反应出现凝集。根据红细胞在胶质介质中的位置肉眼判断。微柱凝胶试验•特异性胶：抗A、抗B、抗D•中性胶：对照孔、反定型•抗人球蛋白胶：抗筛、交叉配血几种方法的比较方法优点缺点盐水法操作方便,费用低廉只能检出不相配合完全抗体,不能检出不相配合的不完全抗体抗球蛋白法检测不完全抗体最灵敏的方法操作复杂、不利于急诊检查和血库的大批量工作酶法增强Rh、Kidd系统破坏M、N、S、s、Fy(a)、Fy(b)抗原结构,易失活,寿命短,反应时间长凝聚胺法方便、应用最广Kell系统部分抗体如抗K、抗kp(a)、抗kp(b)检测不出,需要抗球蛋白试验.且肝素对其有影响,易引起假阴性.微柱凝胶法国际安全输血检查的推荐方法，灵敏度高、重复性好、特异性好、检测结果可较长时间保存费用高抗体的筛选及鉴定•有临床意义的抗体：能引起新生儿溶血病、引发溶血性输血反应，或者使输入的红细胞存活期减少的在37℃有反应的同种异型抗体•不规则抗体：抗A，抗B以外的抗体•包括：同种抗体和自身抗体抗体筛选方法•盐水介质凝集法•抗人球蛋白法•凝聚胺法•微柱凝胶法结果的判读与解释•溶血和血液凝集意义相同，都是抗原抗体反应阳性结果。先观察有无溶血，后观察有无凝集。•记录结果，并与以前结果对照。•抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意义的抗体。一些低频抗原的抗体或有剂量效应的抗体，可能被漏检。抗体鉴定•通过筛选，抗体一经检出，应进一步作抗体鉴定试验，以确定其特异性。•①自身细胞检查-排除非特异性②谱红细胞检查抗体鉴定•谱红细胞：一般是由8-16人份的已知血型表现型O型红细胞组成，具有各种不同的抗原成分，根据谱红细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。•方法：在盐水法基础上、灵活应用白蛋白介质法、酶技术及抗人球蛋白实验。交叉配血•主侧：受血者血清+供者红细胞检测对供者红细胞起反应的抗体•次侧：受血者红细胞+供者血清检测对受者红细胞起反应的抗体•自身对照：受血者红细胞+受血者血清排除自身抗体、直接抗球蛋白试验阳性及红细胞缗钱状凝集缗钱状凝集•也称串钱状凝集，是一种假凝集，红细胞像许多钱币堆积在一起。•血浆球蛋白异常，如高球蛋白血症、巨球蛋白血症。使用大分子右旋糖酐或羟乙基淀粉扩容。•将血清适当稀释。抗筛和配血结果分析•主侧交叉配血不相合的原因：①病人或供血者ABO血型错误②病人血清中存在同种抗体或自身抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。③供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗人球蛋白试验阳性。④病人血清异常，如白蛋白／球蛋白比例不正常引起缗钱状假凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性（用盐水添加试验来解决）。⑤试验系统被污染。抗筛和配血结果分析主侧：+，自身对照：-，抗筛：-①患者或供血者ABO血型错误→重新定型②患者血清中可能含ABO抗体→检查病人亚型、输血史及移植史③患者血清中有抗体，但筛选细胞上无相应抗原→对患者血清进行抗体鉴定④供血者红细胞直抗试验阳性→检查供血者直抗试验抗筛和配血结果分析主侧：+，自身对照：-，抗筛：+患者血清中的同种抗体与供血者红细胞上相应抗原反应→对患者血清进行抗体鉴定，选择无相应抗原的血抗筛和配血结果分析主侧：+，自身对照：+，抗筛：+①病人血清中可能同时存在自身抗体和同种抗体→对病人血清进行抗体吸收及鉴定，用吸收后血清配血②病人血清不正常：白/球比不正常、血浆扩容物→盐水添加试验③试验系统污染→重新抽样检测抗筛和配血结果分析•次测交叉配血不相合的原因：①供血者血浆中存在针对患者红细胞抗原的抗体。②病人与供血者的ABO血型不相合。③病人的红细胞已经包被了抗体，直抗试验阳性。案例分析案例1：患者女，85岁，因重度贫血，申请输注红细胞悬液3u。交叉配血结果为：患者血型为A型Rh阳性，抗筛（+），自身对照（-），交叉配血时主侧凝集程度为（+），次侧不凝集。问：如何处理？案例分析案例2：患者，女，61岁，行关节置换术。术中申请红细胞悬液3u，按操作要求进行配血。确定患者血型为A型Rh阳性，抗筛（-），在做交叉配血时发现，两位供血者提供的红细胞悬液在次端都与患者血浆发生反应，出现不同程度的凝集。此时，加做患者的直抗试验和自身配血对照，得到结果为：直抗试验为（+），自身配血对照出现“+”的凝集。问：如何处理？