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我国甲肝疫苗的发展现状及质量监管毛群颖肝炎室生检所中检院2015年11月19日背景介绍•甲型肝炎（甲肝）由甲型肝炎病毒引起，临床表现为畏寒、发热、食欲减退、恶心、疲乏、肝大及肝功能异常•主要在发展中国家流行，每年发病人数约140万，流行强度与国家的发达程度、经济、卫生水平、卫生习惯密切相关•我国“甲肝高流行区”？我国甲肝流行情况甲肝减毒活疫苗上市国产甲肝灭活疫苗上市甲肝疫苗纳入我国计划免疫程序疫苗的应用有效降低了甲肝发病率中国由甲肝的高发区向中、低发区过渡美国甲肝流行情况•1996年：对高危人群实施推荐免疫，发病率未见明显改变•1999年：在西部17个州实施2岁儿童覆盖免疫，发病率显著降低•2005年：全国实施1-2岁儿童覆盖免疫，发病率降至0.4例/100,00017个州实施2岁儿童计划免疫全国实施1-2岁计划免疫阿根廷、澳大利亚、意大利、以色列等实施甲肝疫苗儿童计划免疫，均显著降低了HAV发病率实施国家儿童计划免疫，是控制HAV最优选、最经济的策略全球多国已计划将甲肝纳入计划免疫，全球甲肝防控已提上日程国际甲肝疫苗•1992年开始上市，均为甲肝灭活疫苗，主要包括：美国默克（Merck,VAQTA）法国赛诺菲巴斯德(SanofiPasteur,AVAXIM)瑞士伯尔纳（BernaBiotech,Epaxal）葛兰素史克公司(GSK,Havrix)1967年甲肝病毒感染绒猴成功1973年电镜观察到甲肝病毒颗粒1978年开始甲肝灭活疫苗研制1979年甲肝病毒细胞成功培养1992年第一支甲肝灭活疫苗上市（GSK,Havrix）我国甲肝疫苗包括冻干甲肝减毒活疫苗、甲型肝炎灭活疫苗冻干甲肝减毒活疫苗：系用甲肝病毒减毒株接种人二倍体细胞，经培养、收获和抽提病毒液，加入适宜稳定剂后冻干制成，为我国具有独立知识产权的疫苗，无佐剂，免疫程序（1剂次）甲型肝炎灭活疫苗：采用甲肝病毒接种人二倍体（或Vero）细胞，经培养、收获、病毒纯化和灭活后，加入铝佐剂制成，免疫程序（2剂次）20世纪80年代成功获得甲肝疫苗毒株1992年甲型肝炎减毒活疫苗上市2002年甲型肝炎灭活疫苗上市2006年纳入批签发管理系统2008年纳入国家计划免疫规划我国甲肝疫苗的生产和质控管理制品名称生产单位生产批准文号注册标准冻干甲肝减毒活疫苗浙江普康生物技术股份有限公司国药准字S20000063WS4-（ZB-070）-2010中国医学科学院医学生物学研究所国药准字S20060007YBS00902011长春生物制品研究所国药准字S20000029WS4-（ZB-060）-2010长春长生生物科技股份有限公司国药准字S20010055WS4-（ZB-071）-2010甲型肝炎灭活疫苗北京科兴生物制品有限公司国药准字S20020035国药准字S20020069WS4-（ZB-051）-2010中国医学科学院医学生物学研究所（江苏康淮生物科技有限公司）国药准字S20030061国药准字S20030062YBS00602011我国上市甲型肝炎疫苗一览表冻干甲肝减毒活疫苗：四家企业甲型肝炎灭活疫苗：两家企业2006年纳入批签发管理系统我国甲肝疫苗的生产和质控管理2009-2014年度甲肝疫苗批签发情况050010001500200025003000350040002009年2010年2011年2012年2013年2014年万支国产甲肝减毒活疫苗国产甲肝灭活疫苗进口甲肝灭活疫苗•冻干甲肝减毒活疫苗•甲型肝炎灭活疫苗冻干甲肝减毒活疫苗1992年-2003年，液体减毒活疫苗，有效期半年2003年-至今，冻干减毒活疫苗，稳定性更好，有效期为一年半~两年经20多年上千万人群的应用和临床研究证明具有良好的安全性和有效性冻干甲肝减毒活疫苗质量标准现行质量标准和检验依据为企业注册标准和《中国药典》2010年版三部检验项目质量标准检验方法安全性外观应为乳酪色疏松体，复溶后为澄明液体，无异物目测法无菌检查应无菌生长培养法异常毒性检查实验动物应全部健存，且无异常反应，到期时体重增加动物法牛血清白蛋白残留量应不高于50ng/剂酶联免疫法抗生素残留量*应不高于50ng/剂酶联免疫法三氯甲烷残留量应不高于0.006%气相色谱法有效性鉴别试验应证明含有甲肝病毒抗原酶联免疫法病毒滴度应不低于6.50lgCCID50/剂细胞培养法热稳定性试验疫苗放置37℃72小时，病毒滴度应不低于6.50lgCCID50/剂，且滴度下降应不高于0.50lg出厂前进行，细胞培养法水分应不高于3.0%库仑法*：2008年11月14日修订执行2005版中国药典2010版中国药典2015版中国药典检验项目质量标准检验方法质量标准检验方法质量标准检验方法安全性外观应为澄明液体，无异物目测法应为乳酪色疏松体，复溶后为澄明液体，无异物目测法应为乳酪色疏松体，复溶后为澄明液体，无异物目测法pH值////符合批准的要求电位法渗透压摩尔浓度////符合批准的要求冰点法无菌检查应无菌生长培养法应无菌生长薄膜过滤法应无菌生长薄膜过滤法异常毒性检查实验动物应全部健存，且无异常反应，到期时体重增加动物法实验动物应全部健存，且无异常反应，到期时体重增加动物法实验动物应全部健存，且无异常反应，到期时体重增加动物法牛血清白蛋白残留量应不高于50ng/剂酶联免疫法应不高于50ng/剂酶联免疫法应不高于50ng/剂酶联免疫法抗生素残留量//应不高于50ng/剂酶联免疫法应不高于50ng/剂酶联免疫法三氯甲烷残留量*应不高于0.006%气相色谱法应不高于0.006%气相色谱法应不高于0.006%气相色谱法细菌内毒素//应不高于50EU/ml凝胶法应不高于50EU/ml凝胶法有效性鉴别试验应证明含有甲肝病毒抗原酶联免疫法应证明含有甲肝病毒抗原酶联免疫法应证明含有甲肝病毒抗原酶联免疫法病毒滴定应不低于6.50lgCCID50/剂细胞培养法应不低于6.50lgCCID50/剂细胞培养法应不低于6.50lgCCID50/剂细胞培养法热稳定性试验疫苗放置37℃48小时，病毒滴度下降应不高于0.50lg出厂前进行，细胞培养法疫苗放置37℃72小时，病毒滴度应不低于6.50lgCCID50/剂，且滴度下降应不高于0.50lg出厂前进行，细胞培养法疫苗放置37℃72小时，病毒滴度应不低于6.50lgCCID50/剂，且滴度下降应不高于0.50lg出厂前进行，细胞培养法水分//应不高于3.0%库仑法应不高于3.0%库仑法冻干甲肝减毒活疫苗质量标准国家质量标准逐步提升2015年版将于今年12月1日实施灭活甲型肝炎疫苗质控标准2010年首次被《中国药典》收录，现行质量标准和检验依据为企业注册标准和《中国药典》2010年版三部检验项目质量标准检验方法安全性外观应为乳白色混悬液体，可因沉淀而分层，易摇散，不应有摇不散的块状物。目测法pH值应为5.5~7.0电位法无菌检查应无菌生长培养法异常毒性检查实验动物应全部健存，且无异常反应，到期时体重增加动物法细菌内毒素检查应不高于10EU/ml凝胶法游离甲醛含量应不高于50ug/ml比色法三氯甲烷残留量应不高于0.006%气相色谱法2-苯氧乙醇含量应为4.0~6.0mg/ml酶联免疫法抗生素残留量应不高于50ng/剂酶联免疫法有效性装量应不低于标示量容量法铝含量应不高于1.20mg/ml滴定法鉴别试验应证明含有甲肝抗原酶联免疫法体外相对效力应不低于0.75酶联免疫法国内外甲型肝炎疫苗质控标准比较质量标准ChP2010EP7.0/BP2013JPMRBP2006WHOTRS840通用名甲肝灭活疫苗HepatitisAVaccine（Humandiploidcell）,Inactivated甲肝疫苗HepatitisAVaccine冻干灭活甲肝疫苗FREEZE-DRIEDINACTIVATEDTISSUECULTUREHEPATITISAVACCINE甲肝疫苗（灭活）hapertitisAvaccine(inactivated）成品3.4.1鉴别试验采用酶联免疫方法检查，应证明含有甲型肝炎病毒抗原。3.4.2外观应为微乳白色混悬液体，可因沉淀而分层，易摇散，不应有摇不散的块状物。3.4.3装量检查依法检查（附录IA），应不低于标示量。3.4.4pH值pH应为5.5～7.0（附录VA）。3.4.5铝含量应不高于1.20mg/ml。3.4.6游离甲醛含量应不高于50μg/ml（附录VIL）。3.4.7三氯甲烷残留量应不高于0.006％。3.4.82-苯氧乙醇含量采用2-苯氧乙醇作为防腐剂的进行该项检测,应为4.0-6.0mg/ml3.4.9体外相对效力测定应不低于0.753.4.10抗生素残留量测定生产过程中加入抗生素的应进行该项检查。采用酶联免疫法，应不高于50ng/剂。3.4.11无菌检查应符合规定。3.4.12细菌内毒素检查应不高于10EU/ml3.4.13异常毒性检查应符合规定符合下列检查的疫苗才能签发上市。如加甲醛且在半成品检定符合规定的，成品可免检。效力试验在半成品检定进行且符合规定的，成品可免检。鉴别试验以特异性抗体或体内试验采用适宜的免疫化学方法，应证明含甲肝病毒抗原.铝含量(2.5.13)如采用氢氧化铝或磷酸铝为佐剂，每一次人用剂量应不高于1.25mg游离甲醛含量不超过0.2g/L防腐剂含量如加防腐剂，采用适宜的化学或理化测定方法，其含量应不低于最低有效剂量且不高于标示量的115%。无菌检查.应符合规定。效力测定可采用体内（小鼠ED50）或体外试验测定，应符合甲肝疫苗效力测定要求。3.4.1残余水分采用通用性试验的方法，应不高于3.0%。采用通用性试验的方法，pH值应为6.8-7.4。3.4.3游离甲醛含量采用通用性试验的方法，游离甲醛含量应不高于0.01%w/v。3.4.4无菌检查采用通用性试验的方法，应符合规定。3.4.5异常毒性检查采用通用性试验的方法，应符合规定。经管理当局许可，内毒素、蛋白含量、防腐剂和佐剂检测可在半成品进行，成品免检。A.6.1鉴别试验成品应进行以免疫反应为基础的鉴别试验。效力试验合格视作鉴别试验合格。A.6.2效力试验半成品未进行效力测定的成品应检测。疫苗效价和检测方法应基于临床试验的结果并经国家管理当局批准。A.6.3无菌检查每批成品应按照规定的方法进行无菌检查。(5).A.6.4异常毒性试验每批成品应采用批准的方法进行异常毒性试验。A.6.5内毒素检查每批成品应进行内毒素检查。检测方法和限度应符合批准的要求。A.6.6防腐剂含量测定如添加防腐剂，每批制品应进行防腐剂含量测定，检测方法和限度应符合批准的要求。A.6.7蛋白含量应确定成品蛋白含量的限度。A.6.8佐剂每批成品应检测佐剂含量，检测方法和限度应符合批准的要求A.6.9残余水分冻干疫苗成品应检测残余水分，其限度应符合批准的要求。A.6.10外观检查每批成品的每支疫苗应进行肉眼检视，如有异常应废弃。表4中国药典、欧洲药典、日本生物制品和WHO草案关于甲型肝炎疫苗质量控制标准与方法的比较安全性指标与国外标准基本一致，部分项目：如抗生素和异常毒性等严于国外，且方法和标准规定更为明确我国甲肝灭活疫苗剂量单位情况类别疫苗生产企业名称抗原含量单位成品剂量状态国产北京科兴u/ml儿童250u/0.5ml成人500u/ml已上市昆明所(转让江苏康淮)EU/ml儿童320EU/0.5ml成人640EU/ml已上市进口默沙东U/ml儿童25U/0.5ml成人50U/ml已上市巴斯德U/ml儿童80U/0.5ml已上市研发深圳康泰EU/ml儿童320EU/0.5ml成人640EU/ml临床研究辽宁成大EU/ml儿童320EU/0.5ml成人640EU/ml注册检验甲肝抗原含量是甲肝灭活疫苗质控和剂量确定的关键指标各企业抗原含量单位均不同（如u、EU、U），疫苗剂量缺乏可比性有必要研制甲型肝炎抗原国家标准品，规范和提高我国甲肝灭活疫苗质控标准甲肝抗原国家标准品研制目的：建立甲型肝炎疫苗抗原国家标准品，确定不同