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第二章习题一、单选题1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（B）A．I类限制酶B.II类限制酶C.III类限制酶D.核酸内切酶E.RNAase2.下列关于同裂酶的叙述错误的是(B)A.是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。B.它们的识别序列完全相同。C.它们的切割方式可以相同，也可以不同。D.有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。E.两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。3.多数限制酶消化DNA的最佳温度是（A）A.37℃B.30℃C.25℃D.16℃E.33℃4.下列关于限制酶的叙述错误的是(B)A.I类限制酶反应需要Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。B.II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。C.III类限制酶反应需要Mg2+、ATP，S-腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。D.I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性，II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。E.II类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。5.如果一个限制酶识别长度为6bp,则其在DNA上识别6bp的切割概率为(D)A.1/44B.1/66C.1/64D.1/46E.1/1066.多数II类限制酶反应最适PH是(C)A.PH:2-4B.PH:4-6C.PH:6-8D.PH:8-10E.PH:4-107.下列关于限制酶反应的说法错误的是(D)A.限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。B.许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。C.有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。D.限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。E.BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。8.II类限制酶反应中必须的阳离子是（C）A.Na+B.Ca2+C.Mg2+D.Zn2+E.Mn2+9.RFLP形成的原因是（A）A.由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。B.使用不同的限制性内切酶进行切割。C.杂交时使用不同的探针。D.每种染色体存在两条。E.提取不同的染色体DNA酶切。10.下列关于限制酶命名的表示方法，正确的是（E）A.Sau.3AIB.B.amHIC.pstID.EcorIE.HindIII11.需进行DNA部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（D）A.反应时间B.反应体积C.PHD.限制酶量E.反应温度12.下列酶在反应中不需要ATP的是(D)A.EcoKB.T4DNA连接酶C.BamHID.EcoBE.DNApolI13.限制性内切酶可特异性识别(B)A.双链DNA的特定碱基对B.双链DNA的特定碱基序列C.单链RNA的特定碱基序列D.单链DNA的特定碱基序列E双链RNA的特定碱基对14.下列与RFLP相关的一条是(D)A.不同限制酶在单个染色体DNA上的限制性图谱。B.两种物种个体间的限制性图谱。C.同一个体等位基因的限制性图谱。D.同一物种不同个体的限制性图谱。E.非同源染色体用同种限制酶切形成的限制酶图谱。15．限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（A）A.识别和切割序列发生变化。B.切割活性大大提高。C.识别和切割序列与原来完全不同。D.可以任意切割DNA。E.只能部分切割DNA。二、多选题1.下列因素中影响限制酶切割的有(A,B,C,D,E)A.EDTA浓度B.甘油浓度C.DNA纯度D.酶的自身活性E.盐浓度2.限制酶反应中出现星活性的可能原因是（ABDE）A．酶浓度太高B低盐C盐浓度过高D高PHE甘油浓度5%（V/V）3．限制酶切割后的DNA电泳得到的电泳条带有些扩散，可能原因是（B，C，D，E）A．酶失活B有蛋白质与DNA结合C酶切条件不合适D有外切核酸酶污染E星号活性4．下列有关回文序列的描述正确的是（A，B，C）A．是II类限制酶的识别序列B是某些蛋白的识别序列C是基因的旁侧序列D是高度重复序列E是卫星序列5．下列有关回文序列的一般特征正确的是（B，C，D，E）A．可增强基因表达B有对称轴C是自我互补的序列D．两条链从5‘3‘方向的序列一致E是II类限制酶的识别序列6．关于II类限制酶说法正确的是（B，D）A．具内切核酸酶和甲基化酶活性B．仅有内切核酸酶活性C．只识别非甲基化的DNA序列D．II类限制酶反应条件只需要Mg2+E．II类限制酶反应需要Mg2+,ATP7．通过限制性片段分析，可对等位基因进行精确比较是因为（B，C）A．限制酶只切割两个变异等位基因中的一个B．限制酶位点可作为遗传标记C．它不依赖变异的等位基因的产物的功能D．不同组织等位基因的核苷酸序列存在差异E．同一组织等位基因核苷酸序列不会完全相同8.下列关于II类限制酶的叙述正确的是（B，C，D，E）A．它既有内切酶的活性，也有外切酶活性B．在特异位点对DNA进行切割C．同一限制酶切割双链DNA时产生相同的末端序列D．有些限制酶切割双链DNA产生粘末端E．有些限制酶切割双链DNA产生平末端9．限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是（A，B，C，D，E）A．限制酶无活性B存在抑制剂如SDS，EDTACDNA不纯D．缓冲液组成不合适EDNA甲基化10．下列关于限制酶的叙述正确的是（B，C，D）A．在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他限制酶就不能切割了。B．限制酶在DNA中的识别/切割位点的二、三级结构影响酶切效率。C．如果限制酶的识别位点位于DNA分子末端，那么接近末端的程度也影响切割。D．已知某限制酶在一环状DNA上有3个切点，因此该酶切割这一环状DNA，可得到3个片段。E．能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中没有该酶识别的序列。11．酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（A，B，C，E）A．储存温度不合适B稀释后储存C储存缓冲液不合适D．分装后储存E储存缓冲液中蛋白浓度低12．限制酶切反应结果显示为部分切割，可能原因是（A，B，C，D，E）A．限制酶失活B有抑制剂如SDS，EDTA等存在C反应条件不合适DDNA不纯EDNA结构（线形或超螺旋）的影响13．如果用限制酶切割DNA后得到的片段比预期的多，可能原因是（B，C，E）A．限制酶失活B限制酶的星号活性C有其他限制酶污染D有抑制剂存在E测试DNA中有其他DNA污染14．限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（A，B，C，E）A．限制酶去除不完全B平端连接C核酸外切酶污染D．连接反应温度低于16℃E．从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类15．下列限制酶属同裂酶的是（A，B，D，E）A．BamHIG↓GATCCSau3AI↓GATCCCTAG↑GCTAG↑B．SalIG↓TCGACXhoIC↓TCGAGCAGCT↓GGAGCT↓CC．BamHIG↓GATCCEcoRIG↓AATTCCCTAG↓GCTTAA↓GD.HpaIIG↓CGCMspIC↓CGGCGC↓GGGC↓CE.XbaIT↓CTAGANheIG↓CTAGCAGATC↓TCGATC↓G三．填空题1．限制酶是一类专门切割DNA的酶，它能特异性识别切割双链（单、双）DNA。2．II型限制酶识别位点一般长度为4~6个核苷酸对。3．个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性（RFLP）。4．限制酶命名采用Smith和Athens提议的方案，第一个字母大写取自来源细菌的属名；第二、三个字母取自来源细菌的种名；第四个字母（如果有）取自来源菌的株系。5．需要部分酶切时可采取的方法有（1）减少酶的用量（2）缩短反应时间（3）增大反应体积。6．限制酶识别序列为n个碱基，则其切割频率的理论值应是4n。7．限制性内切酶通常保存在50%浓度的甘油溶液中。8．甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一，在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在5%以下。9．限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的限制和对自身DNA的修饰来实现的。10．II型限制酶既具有识别位点的专一性，也具有切割位点的专一性。它作用时需要Mg2+离子作辅助因子。四．简答题1．在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（BSA）的目的与机理是什么？答：目的是保护酶的活性；机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓度，防止内切酶失活。2．如果用EcoRI酶切DNA时出现星活性，试分析原因？答：主要原因有：酶浓度太高；高PH；低盐；含Mn2+、Cu2+等非Mg2+金属离子；甘油浓度高于5%；存在某些有机溶剂。3．下列序列中哪些可能是II类限制酶的识别序列？ATATCGCCCGGGGATATCAGCCGAGAGTC答：CCCGGGGATATCGAGTC4．用Klenow酶可将5‘粘末端填补成平末端，而导致某些限制位点消失，下列酶切后用klenow处理再连接不会丢失识别位点的是哪些？XmaIC↓CCGGGBssHIIG↓CGCGCPstICTGCA↓GHhaIGCG↓CHpaIIG↓CGC答：BssHII,HpaII5．当两种限制酶反应条件不同时，若要用双酶切，应采取什么措施？为什么？答：要避免星活性及部分酶切。（1）先用低盐缓冲液中活性最高的酶切，再补盐和第二种酶；（2）用一种酶消化后，以酚：氯仿：异戊醇抽提，再经乙醇沉淀，将DNA重新溶解与适合第二种酶的缓冲液，加第二种酶消化；（3）先低温酶，后高温酶；（4）使用通用缓冲液。6．试计算下列三种限制酶各自在某染色体DNA序列上的切割概率Sau3AIGATCPstICTGCAGHinfIGANTCAcyIGPuCGPyC答：1/44；1/46；1/44；（1/44）x(1/22)7．一长为4.2kb的DNA片段，分别用EcoRI、PstI及EcoRI+PstI消化，电泳结果如下图所示，请根据结果绘出该片段限制性图谱0.7kb0.7kb0.8kb1.5kb1.4kb2.0kb2.0kb2.8kbEcoRIPstIEcoRI+PstI答：EcoRIPstIEcoRI0.7kb0.7kb0.8kb2.0kb回收与连接一．单选题1．用DEAE膜片法回收电泳分离的DNA片段时，在紧靠目的DNA片段前方的凝胶切一裂缝，以插入DEAE纤维素膜，该裂缝长度与DNA条带相比应（C）A．略短B.等长C.略长D.A或B都可E.A、B、C都可2．用透析膜插片凝胶电泳法回收DNA片段时，再区带前挖一小槽，将透析膜置于槽中，这时应注意（B）A．透析膜要接触DNA区带一侧的胶缘。B．透析膜不能接触DNA区带一侧的胶缘。C．透析膜要接触DNA区带相对一侧的胶缘。D．透析膜不能接触DNA区带相对一侧的胶缘。E．随意插入槽中即可。3．在回收DNA片段时，观察电泳结果为尽量减少对DNA的照射损伤应使用（A）A．长波长紫外B.短波长紫外C.长波长红外D.短波长红外E.ABCD都不可4．DNA回收时，如要除去EB（溴化乙锭）可用下列那种试剂（A）A．正丁醇B.苯酚C.氯仿D.异戊醇E.乙醇5．在DNA分子克隆时，常用到部分填补法，填补时应注意（E）A．控制反应温度B.控制酶的反应时间C.控制DNA聚合酶的用量D.控制反应PHE.限制dNTP的种类6．下列关于平末端连接的说法正确的是（B）A．同等条件下连接效率高于粘末端连接的连接效率。B．加入凝聚剂PEG8000可促进平末端连接。C．平末端连接时反应温度要比粘末端连接温度高。D．平末端连接方法的使用仅限于酶切后产生的两个平末端之间的连接。E．平末端连接比粘末端连接更易产生自身环化。7．用同一种酶切割载体和目的基因后进行连接，连接产物会含大量自身环化载体，采用下列哪种酶处理，可防止自身环化（E）A．核酸内切酶B.核苷酸激酶C.核酸外切酶D.末端转移酶E.碱性磷酸酶8．分子克隆中用T载体主要是与下列哪种产物连接（D）A．单酶切产物B.双酶切产物C.同裂酶产物D.PCR产物E.酶切后形成的平末端产物9．采用BamHI单切载体和目的基因后，进行重组连接前要（D）A．65℃处理10分钟