血液病基因检测的临床意义

髓细胞系恶性肿瘤根据细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学以及临床特征WHO分型法将髓系肿瘤分为骨髓增生性疾病（MPD）（肿瘤，MPN）骨髓增生异常/骨髓增生性疾病（肿瘤）（MDS/MPD,MDS/MPN）骨髓增生异常综合征（MDS）急性髓细胞白血病（AML）四大类PH染色体[t(9;22)(q34;q11),BCR/ABL]阳性的慢性髓系白血病（CML）慢性中性粒细胞白血病（CNL）慢性嗜酸粒细胞白血病/高嗜酸粒细胞综征（CEL/HES）真性红细胞增多症（PV）慢性原发性骨髓纤维化（伴髓外造血）（CIMF）原发性血小板增多症（ET）不能分类骨髓增生性疾病七类骨髓增生性肿瘤（MPN）骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤（MDS/MPN）是一种克隆性造血干细胞疾病，特点表现为MDS与MPD交叠，有多种“有效”造血及病态造血存在。慢性粒-单核细胞白血病（CMML）不典型慢性髓系白血病（aCML）幼年型粒-单核细胞白血病（JMML）不能分类的MDS/MPD四类骨髓增生异常综合征（MDS）MDS也是克隆性疾病，以无效造血为其特征引起血细胞减少，骨髓及血象一至多系细胞病态造血。MDS亚型分类亚型外周血象骨髓象1.难治性贫血贫血；未见或罕见仅红系增生异常，（RA）原始细胞原始细胞＜5%，环形铁粒幼细胞＜15%2.难治性贫血伴贫血；未见或罕见仅红系增生异常，环形铁粒幼细胞原始细胞原始细胞＜5%，（ＲＡＲＳ）环形铁粒幼细胞≥15%3.难治性血细胞减少血细胞减少（二系或二系或多系细胞增生异常伴多系增生异常全系）；未见Auer小体；≥10%；原始细胞＜5%，（RCMD）未见或罕见原始细胞；未见Auer小体；单核细胞＜1×109/L环形铁粒幼细胞＜15%4.难治性血细胞减少血细胞减少（二系或二系或多系细胞增生异常伴多系增生异常和全系）；未见Auer小体；≥10%；原始细胞＜5%，环形铁粒幼细胞单核细胞＜1×109/L未见Auer小体；（RCMD-RS）环形铁粒幼细胞≥15%亚型外周血象骨髓象5.难治性贫血伴血细胞减少，一系或多系细胞增生异常；原始细胞增多1型原始细胞＜5%原始细胞5%~9%；（RAEB-1）未见Auer小体；未见Auer小体；单核细胞＜1×109/L6.难治性贫血伴血细胞减少，一系或多系细胞增生异常；原始细胞增多2型原始细胞5%~19%原始细胞10%~19%；（RAEB-2）Auer小体（±）；Auer小体（±）；单核细胞＜1×109/L7.未归类的MDS血细胞减少，单一髓系细胞增生异常；（MDS-U）未见或罕见原始细胞；原始细胞＜5%；未见Auer小体；未见Auer小体；8.5q-综合征贫血；少叶核巨核细胞正常或增多；[del（5q）]血小板计数正常或增高；原始细胞＜5%；原始细胞＜5%；细胞遗传学检测仅见del（5q）异常；未见Auer小体；AML是髓系原始细胞克隆性增生疾病，WHO分型将AML分为：1.伴有特殊染色体的AML2.伴有病态造血的AML3.治疗相关的AML和MDS※4.不伴特殊细胞遗传易位的AML四亚型。急性髓细胞白血病（AML）1．伴有特殊细胞遗传易位的AML（1）伴有t(8;21)(q22;q22)AML,AML1（CBFα）/ETO的AML（2）伴有inv(16)(p13;q22)或t(16;16)(p13;q22),CBFβ/MYH11的骨髓嗜酸粒细胞增多的AML（3）伴有t(15;17)(q22;q11-12),PML/RARα及变异的急性早幼粒细胞白血病（APL）（4）伴有11q23(MLL)异常增生的AML2．伴有多系血细胞增生异常的急性髓细胞白血病（1）由MDS或MDS/MPD转化而成（2）发病前无MDS病史3．治疗相关的AML和MDS（1）与烷化剂相关（2）与拓扑异构酶Ⅱ抑制剂相关（一些可以是淋巴系）（3）其他4．不伴特殊细胞遗传易位的AML（1）未分化AML（2）未成熟AML（3）成熟AML（4）急性粒-单核细胞白血病（5）急性单核细胞白血病（6）急性红白血病（7）急性巨核细胞白血病（8）急性嗜碱细胞白血病（9）伴骨髓纤维化的急性全髓增生（10）髓细胞肉瘤白血病FAB分型和WHO分型对比FAB分型WHO分型ALL—L1L2急性前体淋巴母细胞白血病/淋巴瘤PrecursorBandTlymphoblasticleukemia/lymphoma（ALL）L3Burkitt白血病/淋巴瘤（Burkittleukemia/lymphoma）AML—M0极微分化AML（AML，minimallydifferentiated）M1未成熟AML（AMLwithoutmaturation）M2a成熟AML（AMLwithmaturation）M2bAMLwitht（8；21）（q22；q22），（AML1/ETO）M3APL［AMLwitht（15；17）（q22；q12），（PML/RARα）andvariants］M4急性粒-单核细胞白血病（Acutemyelomonocyticleukemia）M4EOAMLwithinv（16）（p13q22）ort（16；16）（p13；q22），（CBFβ/MYH11）M5（M5a、M5b）急性单核细胞白血病（Acutemonoblasticandmonocyticleukemia）M6急性红白血病（Acuteerythroidleukemia）M7急性巨核细胞白血病（Acutemegakaryoblasticleukemia）淋系肿瘤：B系肿瘤和T/NK细胞系肿瘤又可分为两大类型：前体淋巴细胞肿瘤（淋系白血病）外周或成熟淋巴细胞肿瘤（淋巴瘤）前者指淋巴细胞分化的早期阶段起源的肿瘤后者是分化成熟阶段来源的肿瘤B细胞系肿瘤前体B细胞肿瘤前体B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤（B-ALL/LBL）成熟（周围）B细胞肿瘤B-慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞淋巴瘤（B-CLL/SLL）B-细胞幼淋巴性细胞白血病（B-PLL）淋巴浆细胞淋巴瘤（LPL）Burkitt淋巴瘤（BL）多毛细胞白血病（HCL）浆细胞骨髓瘤/浆细胞瘤（PCM/PCL）脾边缘区B细胞淋巴瘤，±绒毛状淋巴细胞（SMZL）结外边缘区B细胞淋巴瘤，MALT型（MALT-MZL）结型边缘区B细胞淋巴瘤，±单核细胞样B细胞（MZL）滤泡性淋巴瘤（FL）套细胞淋巴瘤（MCL）弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）T细胞和NK细胞系肿瘤前体T细胞肿瘤前体T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病（T-LBL/ALL）成熟（周围）T细胞肿瘤T-细胞幼淋巴细胞白血病（T-PLL）T-大颗粒淋巴细胞白血病（T-LGL）侵袭性NK细胞白血病（ANKCL）成人T细胞淋巴瘤/白血病（ATCL/L）结外NK/T细胞淋巴瘤，鼻型（NK/TCL）肠病型T细胞/淋巴瘤（ITCL）肝脾γδT细胞淋巴瘤皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤蕈样真菌病/Sezary综合征（MF/SS）间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）霍奇金淋巴瘤（霍奇金病）结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤（NLPHL）经典型霍奇金淋巴瘤结节硬化型霍奇金淋巴瘤，1和2级（NSHL）富于淋巴细胞经典霍奇金淋巴瘤混合细胞型霍奇金淋巴瘤（MCHL）淋巴细胞消减型霍奇金淋巴瘤（LDHL）白血病基因检测基因突变是指由于DNA分子中发生碱基对的_________________而引起的___________的改变。┯┯┯┯ＡＴＧＣＴＡＣＧ┷┷┷┷┯┯┯┯┯ＡＴＡＧＣＴＡＴＣＧ┷┷┷┷┷┯┯┯ＡＧＣＴＣＧ┷┷┷┯┯┯┯ＡＣＧＣＴＧＣＧ┷┷┷┷增添替换缺失（D）（d1）（d2）（d3）增添、缺失或替换基因结构•基因突变一定会导致生物性状的改变吗?mRNA:GAA甲乙丙丁DNA碱基对替换，不一定引起蛋白质结构的改变。结论:碱基对替换一定会导致蛋白质结构的改变吗?氨基酸:天冬氨酸天冬氨酸谷氨酸缬氨酸GAUGACGUA1、二战时，美国在日本的广岛、长崎投下两颗原子弹，导致白血病患者出生率增加。2、苏丹红进入人体可产生致癌作用。3、乙肝病毒使肝细胞进一步变异，肝细胞不凋亡，而且不断地再生，就形成了肝癌。内因：DNA复制时自身也偶尔发生错误物理因素化学因素生物因素基因突变原因：基因突变的特点大多数基因突变对生物体是有害的，只有少数是有利的，有些既无害也无益。多数有害结果：增殖过度，分化阻断，凋亡受抑白血病的分子检测SouthernblotNorthernblotWesternblotFISHPCR测序芯片白血病的分子检测PCR方法优点快速灵敏特异PCR方法缺点假阳性假阴性！白血病的分子检测PCR：仅适用于染色体断裂点丛集于相对小的范围内（2kb），如T-ALL中SIL-TAL1。RT-PCR：可用于染色体断裂点跨越很大的区域的融合基因。巢式RT-PCR：可显著提高反应的特异性，增加扩增效率。RQ-PCR：可定量扩增产物。白血病分子检测的临床应用白血病的分子生物学检查对白血病诊断分型及预后判断有以下几方面意义：补充MIC检查的不足发现新的亚型监测白血病的微小残留病灶（MRD）为研究白血病的发病机制打下基础白血病分子检测的临床应用PCR方法检测MRD常用的分子标志AML1-ETOt(8;21)(q22;q22)6~8%原发性AML，在M2中的阳性率为20~40%，在M2b中阳性率为90%少见于M4和M1，极少见于MDS和骨髓增生综合症AML1-ETO+白血病细胞有一定程度的分化能力，能分化至较成熟的嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，且对化疗反应较敏感AML1-ETO+患者对大剂量阿糖胞苷治疗效果好，具有较高的缓解率，无病生存期长，预后较其他AML亚型（M3除外）好AML1-ETO对初发患者进行t(8;21)和AML1-ETO融合基因的检测对其预后判断及治疗方案的制定相当重要AML1-ETO定性结果不能用于评价患者MRD情况RQ-PCR能实时反映体内AML1-ETO水平。连续定量AML1-ETO转录本水平可判定有高复发风险的患者，以便及早治疗干预以防血液学复发PML-RARαt(15;17)(q22;q21)，98%M3患者阳性继t(15;17)之后，又先后发现4种M3特异的累及RARα的变异性染色体易位：t(5;17)(q35;q21)，t(11;17)(q13;q21)，dup(17)(q21.3;q23)，t(11;17)(q23;q21)分别产生NPM-RARα，NuMA-RARα和PLZF-RARα，STAT5b-RARα融合基因临床上，具有PLZF-RARα或STAT5b-RARα融合基因患者对ATRA治疗不敏感，其余三种染色体易位患者经ATRA治疗可获完全缓解PML-RARαAPL累及的RARα基因及其伙伴基因结构示意图PML-RARα由于PML基因断裂点不同，产生3种不同的PML-RARα异构体约55%的M3患者为L型，40%为S型，5%为V型，且每位患者只表达一种PML-RARα融合蛋白形态学上S型白血病细胞常为低分化的并且这些患者可见继发细胞遗传学异常，V型APL患者的白血病细胞体外对ATRA的敏感度低PML-RARαRT-PCR检测PML-RARα是敏感且特异的APL诊断方法，还能用于治疗后MRD监测。PML-RARα阳性提示的分子复发常早于临床复发3-6个月，为临床采取进一步治疗措施提供了保障RQ-PCR能有效反映患者在发病、治疗、缓解、复发整个过程的白血病细胞负荷，在MRD监测中比RT-PCR具有更高价值FLT3基因突变Fms-relatedtyrosinekinase3FLT3为III型受体酪氨酸激酶家族（还包括c-FMS，PDGFRβ和c-KIT）成员之一，该类受体因在造血过程中造血细胞的增殖和存活中发挥重要调控作用据报道，FLT3-ITD和D835突变在AML中阳性率分别为24%(385/1585)和7%(30/429)，总阳性率超过30%，使其成为AML中最普遍发生突变的靶基因许多临床研究发现，FLT3突变还与临床预后密切