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斜面4支，空气、手指皮肤、细菌分离培养物（上次实验平板）器材准备空气细菌检查结果分析细菌菌落直径1～3mm，有光滑型、粗糙型、粘液型。霉菌菌落比较大，呈棉絮状、绒毛状。计数菌落形成单位（CFU）。报告结果。37℃培养24小时37℃培养72小时37℃培养48小时空气的细菌学检查组号采样时间(min)采样地点菌落形成单位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU/m3＝50,000N÷AT≈86N(直径7cm平板）N：平板上的菌落数A：平板面积(38.5cm2)T：采样时间(15分钟)CFU：colonyformingunitWHO推荐的医院各部门空气细菌标准级别cfu/m3适用范围Ⅰ级区＜10器官移植、心血管、矫形等外科手术室，保护性隔离室，灌注或配制注射液实验室Ⅱ级区＜200无菌室、手术室、婴儿湿疹供应室、婴儿室、中心灭菌单位、术后恢复室、早产儿及产房、重症监护病房Ⅲ级区200～500一般病房、治疗室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、手术室浴室我国公共场所空气卫生细菌学标准（GB9663～9673-1996，GB16153-1996,平皿直径9cm）撞击法cfu/m3沉降法个/皿适用范围≤1000≤103～5星级宾馆、饭店≤1500≤202星级以下宾馆和非星级带空调宾馆、饭店≤2500≤30普通饭店、招待所、酒吧、茶座、咖啡厅、图书馆、博物馆、美术馆、飞机客舱≤4000≤40音乐厅、影剧院、游艺厅、舞厅、理发店、美容院（店）、游泳馆、体育馆、医院候诊室、候机室、旅客列车车厢、轮船客舱、饭馆（餐厅）≤7000≤75展览馆、商场（店）、书店、候车室、候船室13241324手指皮肤的细菌学检查第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。甲和乙、丙和丁共用1个平板上:甲、丙→常规洗手下:乙、丁→标准洗手甲（丙）乙（丁）丙丁手指皮肤细菌检查结果分析比较洗手前后细菌种类和数量。洗前细菌种类多、数量少。洗后细菌种类少、数量多。比较常规和标准洗手的细菌数量。常规洗手，平板上细菌数量少。标准洗手，平板上细菌数量多。常住菌数量大，牢固附着在皮肤上，常洗不掉，可洗松动，经摩擦接种、脱落到培养基上，显示细菌更多？手术室洗手？碘酒和酒精棉球消毒以后，有没有细菌生长？空白对照有没有细菌生长？医学微生物学实验综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三）菌落特征观察P11细菌纯培养P10油镜使用方法（讲解）脓汁和粪便标本检验（录像）菌落特征(ColonyCharacteristics)大小：大(直径约3mm以上)，中(直径约1～3mm)，小(直径约1mm以下)。形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等。边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、湿润或干燥。色素：一般为无色或灰白色，特殊色素有两类：脂溶性色素(菌落本身着色，培养基不着色)和水溶性色素(菌落及培养基均着色)。溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。金黄色葡萄球菌菌落特征X-SA琼脂培养基添加了婴儿湿疹显色酶基质，金黄色葡萄球菌形成淡蓝色菌落。血琼脂菌落直径约2mm、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐，菌落周围有透明的β溶血环，溶血菌株大多有致病性。Baird-Parker琼脂菌落黑色，奶油状，表面光滑，湿润，圆形，凸起，有光泽，边缘整齐，不透明，外层有一透明圈。链球菌菌落特征血琼脂甲型溶血性链球菌，菌落周围有1~2mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血。血琼脂乙型溶血性链球菌，菌落周围有2~4mm宽、红细胞完全溶解、透明的溶血环，称乙型溶血或β溶血。血琼脂丙型链球菌，不产生溶血素，菌落周围无溶血环，称不溶血性链球菌或γ溶血。甲型乙型丙型伤寒沙门菌菌落特征HE琼脂HektoenEntericAgar沙门菌产生蓝绿色、黑色中心菌落XLD琼脂木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂XyloseLysineDesoxycholateAgar沙门菌产生较小黑色菌落SS琼脂SalmonellaShigellaAgar沙门菌产生较小黑色菌落埃希菌产生较大红色菌落志贺菌菌落特征HE琼脂HektoenEntericAgar形成不发酵乳糖的深绿色菌落。麦康凯琼脂MacConkeyAgar形成较小的，无色半透明不发酵乳糖的菌落。SS琼脂SalmonellaShigellaAgar菌落圆形、液滴状、边缘整齐，湿润，无色半透明。大肠埃希菌菌落特征麦康凯琼脂MacConkeyAgar伊红美蓝琼脂eosinmethyleneblueAgar科玛嘉显色琼脂CHROMagar细菌的纯培养PureCultures脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明。37℃培养24小时粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落色素是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落，菌落直径2～3mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，淡粉红色，半透明，直径1～2mm。37℃培养24小时若培养、放置时间过长或者平板上某个部位细菌比较多、菌落比较密集，大肠杆菌菌落颜色可能会发生改变。因为大肠杆菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白质，蛋白质分解大多产生碱性物质，中和了乳糖分解时产生婴儿湿疹的酸。大肠杆菌菌落可能会由原来的紫黑色变成粉红色，或者菌落中心黑色，边缘粉红色。密集或半密集区域的菌落，不一定是单菌落，有可能是菌落形成单位（CFU）。37℃培养36小时斜面接种分工甲→普通平板→黄色菌落→1支斜面乙→普通平板→白色菌落→1支斜面丙→EMB平板→紫黑菌落→1支斜面丁→EMB平板→粉红菌落→1支斜面※斜面正面上2/3作标记：组号、黄色、白色、紫黑、粉红。※选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落。※在平皿底部玻璃上，画个大圈选取菌落，得到同组同学认可，才能挑取。画圈选菌落画圈选菌落画圈选菌落甲→黄色丙→紫黑乙→白色丁→粉红接种环→套住菌落→轻刮取菌斜面接种法StreakSlantMethod甲→黄色,乙→白色。丙→紫黑,丁→粉红。标记：组号，颜色细菌接种在斜面培养基的表面。生物安全警告接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。实验时应坐着，在火焰周围10～20厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。灭菌收集平板→灭菌桶内（平板底部朝下，盖朝上放置）→速送灭菌室→高压蒸汽灭菌→洗刷。奥林巴斯CX21型生物显微镜使用须知显微镜是精密光学仪器，请不要让其受到撞击，请小心操作。在搬运显微镜时，请按右图所示，以双手抓住镜臂孔的两侧，小心搬运。★如果拿住载物台①和镜筒②等部位搬运的话，有可能会造成损坏。开关与调整光强开或关之前，必须将亮度调整旋钮②按箭头相反方向转动到最小位置，以免损坏灯泡。电源开关①拨到∣侧为开，拨到○侧为关闭。按箭头方向转动亮度调整旋钮②变亮，相反方向转动则变暗。聚焦从显微镜的侧面观察，按箭头方向转动粗调旋钮①，使物镜③尽可能接近标本。一边看目镜，一边慢慢逆箭头方向转动粗调旋钮①，使载物台下降。看到标本以后，用微调旋钮②来正确对焦。★10倍物镜的工作距离（WD，从物镜到标本的距离）为10.5mm。★油镜的WD为0.13mm。调整聚光镜位置和孔径光阑用聚光镜上下移动旋钮①，将聚光镜转到最上面。在孔径光阑环②上刻有物镜倍率（10倍，100倍等），观察时将与使用物镜相对应的倍率放到正面。转换物镜旋转物镜转盘①，将希望使用的物镜（10倍、100倍）转到标本的上方。100倍浸油物镜使用方法油镜放入光路之前，一定要在标本的观察部位上加一滴浸油。旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距。如果浸油内有气泡，会影响观察，可稍微旋转物镜转盘，使油镜来回通过1～2次浸油，排除油内气泡。香柏油折射率n=1.515空气的折射率n=1.000玻璃的折射率n=1.520油浸镜的原理光线滴加香柏油可使光线更多进入物镜,避免光线通过折射率低的空气而散失,以提高物镜的分辨率,使物象明亮清晰。放大倍数：目镜10倍×物镜90或100倍。≈奥林巴斯CX21型生物显微镜（实验柜内，每人一台）注意：只能横放，不得竖放。显微镜油镜的使用P1310×物镜→标本位置→滴加香柏油→100×油镜→浸泡油中,几乎与标本接触（工作距离0.13mm）→细调节调焦，观察物像→记录结果→关闭电源。将聚光镜调到最高处；孔径光阑环上刻有的物镜倍率（10×，100×）必须转到正面，与使用的物镜相对应。油镜处理：擦镜纸拭去香柏油→擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3）混合液擦拭→擦镜纸擦拭油镜。显微镜罩上防尘罩→横放在实验柜内。★(顺德校区）实验台两侧的电源插座，只能插入一个插头，请选择离你最近的电源插座。★（校本部）实验台中间，三个位的插座，中间那位插孔没有电，不能使用，只能用两侧的插座。思考题在微生物学实验中,怎样才能避免杂菌的污染?空气的卫生标准规定如何?你的实验结果说明了什么问题?怎样从医务人员手指上分离和鉴定金黄色葡萄球菌?菌落特征主要描述哪几方面问题？如何挑选单菌落？常用器材摆放顺序：电源插座→试管架→酒精灯→污物盘。试管架上器材：靠近插座一侧第1列放置接种针,第2列放置接种环，另一侧中间两行放置油性笔和打火机。※器材使用后，必须放回原处，依次摆整齐。实验器材整齐有序