检验方法评价

ByLaura检测系统的性能评价、确认和验证1.测量误差：测量结果减去被测量的真值的差，简称误差。2.随机误差：测量结果与在重复条件下，对同一被测量进行无限多次测量所得结果的平均值之差。3.系统误差：在重复性条件下，对同一被测量进行无限多次测量所得结果的平均值与被测量的真值之差称为系统误差。亦称为正确度．复习基础知识4、正确度：检测结果离真值的偏移程度5、精密度：表示测量结果中随机误差大小的程度。6、准确度：准确度是测量结果中系统误差（正确度）与随机误差（精密度）的综合。检验结果应该：准确精确迅速1.实验方法分级实验方法学与量值溯源2.参考物的分级3.值溯源4.方法学评价第一节、方法学与量值溯源```是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法。决定性方法参考方法是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。常规方法是指性能指标符合临床或其他目的需要，有足够的精密度、准确度、特异性和适当的分析范围，而且经济实用。一临床生化检验方法分级表3-1临床生化检验项目的决定性方法、参考方法、常规方法项目决定性方法参考方法常规方法钙ID-MS原子吸收分光光度法邻甲酚酞络合酮法、MTB法氯ID-MS、中子活化法电流滴定法硫氰酸汞法、选择性电极法镁ID-MS原子吸收分光光度法MTB法钾ID-MS、中子活化法火焰光度法离子选择电极法、火焰光度法钠中子活化法火焰光度法离子选择电极法、火焰光度法清蛋白-免疫化学法溴甲酚绿法总蛋白-凯氏定氮法双缩脲法肌肝ID-MS离子交换层析法苦味酸法、酶法尿素ID-MS尿素酶法二乙酰一肟法、酶法尿酸ID-MS尿酸酶法（紫外）磷钨酸比色法胆红素-重氮反应法J-G法、钒酸盐氧化法葡萄糖ID-MS已糖激酶法葡萄糖氧化酶法胆固醇ID-MSAbell-Kendall法酶法甘酒三脂ID-MS变色酸显色法酶法```（primaryreferencematerials）也称一级标准品，与决定性方法平行，用于验证决定性方法、评价与校准参考方法，以及为二级标准品定值。原级参考物质次级参考物质（secondaryreferencematerials）也称二级标准品，二级标准品的定值源于一级标准品和参考方法，主要用于评价常规方法，也可为质控物定值。常规校准品校准（calibration）指的是对由仪器、方法和试剂所组成的检测系统的校准过程。电解质、酶类、其他生化指标应合理选择校准品二临床生化检验的参考物质和校准品标准品校准品质控品一级标准品用高纯化学物质。一般由国家标准计量局出具证书。二级标准品某种成分的浓度可用公认的参考方法测定。由参考实验室或权威学术组织出具证书，如SRM、BCR、IFCC。标准品(standard）可用做校准品（calibrater），考虑血清成分复杂、难以避免基质效应。质控品多是成分相对稳定的混合血清，分为定值和非定值、冻干或液体，添加了防腐剂和保护剂等。图21-1各级参考物质和校准品的关系及其量值传递过程三量值溯源溯源性(traceability）是指通过一条具有规定不确定度（uncertainty）的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准（通常是国家或国际测量标准）联系起来的特性，称为溯源性。其不间断的比较链称为溯源链。溯源性图3-2量值溯源和量值传递途径第二节检测系统的性能评价、确认和验证教学：•检测系统的性能评价•检测系统的性能确认•检测系统的性能验证系统误差误差分类评价试验评价指标理想结果比例系统误差回收试验回收率95-105%恒定系统误差干扰试验干扰值接近0比例系统误差恒定系统误差方法对比试验Y=a+bXb接近1.0a接近0随机误差重复性试验（批内、批间、日间）、总不精密度CV3%一、、临床检验方法学性能评价第15页临床检测系统确认精密度的评价正确度的评价检测限的评价方法线性的评价临床可报告范围的评价参考区间的确认精密度验证一二三临床检测系统的性能验证正确度验证可报告范围的验证参考区间的验证（部分项目，如PT）四第17页测定系统方法学操作程序校准品仪器试剂配方和来源一、测定系统的关键要素二、评价文件（1）EP5-A：临床化学设备操作精密度评价核准指南EP6-A：定量分析方法的线性评价：EP7-P：临床化学实验干扰，用于干扰物对检测结果影响的定性。EP9-A：用病人标本进行方法学比较和偏倚评估，主要用于检测两种临床方法或设备间的偏倚。评价文件（2）EP10-A：定量实验室方法的初步评价EP14-A：基质效应的评价EP15-A：精密度和准确度性能的应用EP21-P（NEW）：临床实验方法总分析误差的评估1.批内方案2.批间方案3.EP方案（EP5-Ａ，EP15－A）四、评价、确认和验证方法（一）精密度ＥＰ5－Ａ方案（评价方法）1.试验样品一般选择2个，一个在参考区间附近，另一个为异常值2.批内精密度评价：即一个样品重复测定20次，计算出均值，标准差和变异系数。3.总精密度评价：用2个样品每天测定2批，批间测定间隔不得少于2h，每批平行测定2份，至少共测定20天，80个数据。每对结果间的差（共40个）代表批内差；2批均值之间的差（共20个）代表批间差；每天4个结果的均值（共20个）代表日间差。每批测定至少做一个质控。第22页EP15-A2（性能验证）实验步骤（1）每天分析1个批次、2个浓度，每个浓度重复测量3次，连续测量5天（2）记录实验数据（3）计算批内不精密度第23页sr为批内精密度；D为总天数或总批数（实验规定为5天）；n为每批重复测量次数（实验规定为3次）；为每批每次的结果；为一批中所有结果的均值。第24页（4）室内不精密度其中：为某批所有结果的均值；为所有结果的均值。sl为室内不精密度；n为每批重复测量次数（实验室规定为3次）。第25页321（5）结果判断与厂家声明的批内不精密度和室内不精密度比较与CLIA’88推荐的允许总误差（TEa）比较与国家标准比较4实验室自定标准1.用有量值溯源的参考物质进行测定2.使用决定性方法或参考方法3.与具有量值溯源检测系统进行比对（1）EP方案（EP9-Ａ，EP15－A）（2）简易比对方案（二）正确度评价试验1.EP15－A方案（验证）应来源于健康人或患者，无明显干扰因素。全部标本在整个线性范围内均匀分布，标本至少20例。标本要求测定方法注意：1，可一天，但不超过4小时内。2.可3-4天（但尽可能短）。3.每个标本只需测定1。4.二种方法都有室内质控计算偏移1.偏移2.相对偏移3.平均偏移4.相对平均偏移5.与质量要求比较1.选择高、中、低浓度五份样本同时用各台仪器按常规样本测定的方法，测定其各项参数，每份样本测定2次，求其均值。2.简易比对方法（验证）•3.计算与核对标准•[1]计算：按PT计算方法计算偏倚。•PT计算公式：（确定仪器测定值-比对仪器测定值）/确定仪器测定值×100•[2]标准：•偏移偏倚保持所有标本结果差异在CLIA88允许误差的1/4内检验科比对记录1.确定测量的线性范围。2.取线性范围内的高值标本，用稀释液稀释，最低预期值在线性低限。3.计算回收率：在可接受范。（三）临床可报告范围最大稀释倍数测定稀释倍数预期值实测值回收率％1：51：101：201：404.可报告范围计算：（1）上限为线性范围上线×稀释倍数（2）下限为线性范围低限1.参考区间的建立2.参考区间的转移3.参考区间的验证（五）参考区间的建立与验证在受试者总体中抽出20-60个参考个体,比较小样本和原始参考区间的可比性。20个检测结果中如果有2个以下的值在原始参考区间外，可被转移。否则需重新确认，或自建参考区间。参考区间的验证第二节，部分性能评价一、EP9A要点①比较方法的选择：最好选择参考方法作为对比方法。这样在解释结果，就可把方法间的任何分析误差都归于候选方法。掌握②测定步骤实验标本收集要求：新鲜的正常和异常的临床标本，各浓度应有合适的比例。收集样本数量：至少为40个标本，每个标本用2种方法分别作双份测定，2个小时内测定完。测定时间间隔：每天测定8个标本，双份测定时第一次按顺序1，2……7，8，第二次8，7……2，1，2个小时内测定完，共测试5天。进行统计处理：掌握每天分别用两种方法进行测定，–测定顺序：•1、2、3、4、5、6、7、8•8、7、6、5、4、3、2、1–测定次数：至少测定5天，共40个样本③统计处理方法比较试验所得的结果是配对资料，通常都选用相关和回归分析方法，可计算回归方程y=a+bx，截距a代表恒定误差，斜率b代表比例误差，相关系数代表两种方法的相关性是否密切。也可进行配对t检验。掌握④比较结果的可接受性判断•比较方法所得数值为横坐标，候选方法所得数值为纵坐标。•偏离程度可以接受？若b0.97，或b1.03。•相关系数r一般情况下，γ≥0.975或γ2≥0.95。二、检测限的评价1.可检测的最低分析物浓度为检测系统的分析灵敏度或称检测限。分析灵敏度：具有定性含义的：检测低限（LLD）空白具有定量含义的：生物检测限（BLD）加物功能灵敏度（FS）CV2.检测限的不同概念3.检测限实验4.结果可接受性评价与仪器或试剂厂家标示比较三、回收试验所谓回收即分析方法正确测定加入常规分析样品中的纯分析物的能力。目的是测定比例系统误差，以衡量候选方法的准确度。⒈方法将被分析的纯品标准液加入病人样品中，成为分析样品，原病人样品加入相同量的无分析物的溶液作基础样品，然后用实验方法分析，两者测定结果的差值为回收量。⒉回收率计算以测定血清钙为例说明如下：⑴样品制备1)基础样品：血清2ml＋蒸馏水0.1ml；2)分析样品：血清2ml＋4mmol/L钙标准液0.1ml；3)分析样品：血清2ml＋25mmol/L钙标准液0.1ml；⑵计算公式及计算结果故本例的②③管的加入量分别为：回收浓度＝分析样品测得浓度－基础样品测得浓度回收率（％）＝回收浓度/加入浓度×100％血清钙回收试验结果测得浓度（mmol/L）加入浓度（mmol/L）回收浓度（mmol/L）回收率％①1.70―――②1.880.190.1894.7③2.851.191.1596.6平均95.7理想的结果期望回收率达到100％，要求95%-105%。现在平均回收率为95.7％.⒊注意事项①准确吸量。②样品中加入标准液后，总的浓度必须在测定方法的分析范围内，须作加入高、中、低不同浓度的回收试验，计算平均回收率。③加入标准液后，使实验样品中被测浓度达到医学上具有决定意义的浓度。④加入标准液的体积在整个样品中要少，一般在10％以内。四、临床生化干扰试验－EP7-A干扰：在临床生化中，由于另一成分的影响或者样本的特性，待测的一定浓度的分析物出现有临床意义的偏倚。分析物：实验室测试的物质或者成分干扰物：样本中不同于分析物的能引起测量偏倚的组分。应用举例尿酸对GOD-POD法测定血糖的干扰：样本制备：①基础样本：血清0.9ml+0.1ml蒸馏水②分析样本1：血清0.9ml+4mmol/L尿酸0.1ml③分析样本2：血清0.9ml+8mmol/L尿酸0.1ml④尿酸样本：蒸馏水0.9ml+8mmol/L尿酸0.1ml用GOD-POD法测定，结果填入下表。干扰实验检测结果葡萄糖测得值（mmol/L）加入尿酸值(mmol/L)干扰值(mmol/L)基础样本6.50——分析样本16.200.400.30分析样本25.950.800.55尿酸样本0——干扰实验检测结果单位浓度尿酸使葡萄糖减少值=mmol/L表明正常血清尿酸0.4mmol/L，使血糖测定结果约减少0.28mmol/L。70804005503002121加入尿酸值加入尿酸值干扰值干扰值五、评价测定线性范围（EP6-A法）线性范围（linearrange）是指系统最终的输出值（浓度或活性）与被分析物的浓度或活性成比例的范围。线性检测系统反应，包括校准、线性化技术、系数和仪器反