中药制剂分析

中药制剂分析•第一章绪论•中药制剂分析是以中医药理论为指导，运用现代分析理论和方法研究中药制剂质量的一门应用学科。•第一节概述•一、中药制剂分析的对象中药制剂分析的对象应该是制剂组方中起主要作用的有效成分、毒性成分、或影响疗效的化学成分，对其做出定性、定量等各方面的评价。二、中药制剂分析的特点一）中药制剂分析的对象是复杂的混合物。1.组成中成药的中药材具有复杂性。中药材的同名异物，同物异名现象普遍存在。有的中药更由于形态相似，容易误用。2.中成药化学成分的多样性、复杂性。11）由多味中药组成的复方制剂，其化学成分极为复杂多样。2)各种化学成分在中药中的含量相差悬殊。3）中药制剂由多种单味药材组成，所含化学成分相互影响。3.中成药的剂型繁多，所用之辅料多种多样，在测定前，样品必须经过预处理，以排除各种辅料的干扰，必要时还须进行辅料的检查和测定。4.工艺各异，很多在单味中药鲜品中存在的化学成分，经过炮制或制备工艺中经加热处理后已不复存在，或在制备过程中因挥发、分解、成盐(沉淀)反应等增加了中成药分析工程的困难。二）首先进行组方分析，随方决定测定主药，选择合适的检测指标，是目前质量分析方法的特点之一。在进行质量分析时首先以中医理论和用药原则为指导，进行组方分析，按功能主治分出主、辅、从、次药味和药群，选择某合适的化学成分为指标来说明其与质量的关系。三、影响中药制剂质量的因素(一)原料药材的品种、规格、产地、药用部位、采收季节、加工方法的影响(二)炮制方法的影响（三）生产工艺的影响(四)中药制剂的包装、贮藏、保管的影响四、中药制剂质量控制的现状和发展趋势一）国外药物分析发展趋势基本的方法主要为：分离分析法、电化学法、光谱法和联用分析方法等。各种色谱及其联用技术已成为占主导地位的常规分析方法，如HPTLC、HPLC、GC、HPCE、LC-MS联用等。体内药物分析研究，趋向于采用在线的联用微透析分析技术，如on-lineMD-CE、on-lineMD—LC等。手性药物作为化学药物的特殊群体，以HPLC和CE为主要拆分手段的手性药物分析方兴未艾，已成为全世界药物分析的研究热点。二）国内中药制剂分析现状与发展趋势1、国内中药制剂分析现状1）光谱法的应用A比色法如丹参素/丹参注射液，阿魏酸/当归浸膏--定量B紫外-可见分光光度法单波长法如蒽醌/何首乌，香豆素/祖师栗膏--定量；双波长法靛蓝、靛玉红/喉痛消炎丸--定量；三波长法小檗碱/三黄片--定量；一阶导数光谱法绿原酸/感冒咳嗽冲剂，麻黄碱/哮喘丸--定量二阶导数光谱法胆酸/清宫冲剂，血竭/七厘散--定量；三阶导数光谱法氢溴酸东莨菪碱/中麻2号注射液--定量。等C荧光法丹参素/丹参注射液D红外分光光度法-体、-体/山道年；番木鳖碱、马钱子碱/马钱子E质谱法F核磁共振光谱法2）色谱法的应用A纸色谱法已较少应用；B薄层色谱法应用广泛；C棒状薄层色谱法小檗碱/复方黄柏制剂、人参皂甙/人参、胆酸和去氧胆酸/熊胆--定量；D气相色谱法挥发性成分定量冰片/复方丹参片/牛黄解毒丸/冠心苏合丸等；厚朴酚、和厚朴酚/藿香正气水，麻黄碱/葛根汤；E高效液相色谱法应用广泛，以反相HPLC为主；黄连素/半夏泻心汤，红景天甙/红景天口服液，甘草酸/千金升白冲剂等…。3）电化学分析法的应用A库仑法B电位法药物电极测定法和电位溶出分析法4）其他A原子吸收光谱法和冷原子技术B原子发射光谱CX射线分析法目前，中药体系存在的突出问题具体表现在：(1)定量分析指标与其主要药效作用间缺乏相关性；(2)与化学药物相比，中药是一个由多成分、多因素构成的复杂体系，目前还没有建立起一套有效的中药复杂体系定量分析标准。2。国内中药制剂分析发展趋势(1)中药有效成分的筛选与确定；应用仿生学、基因组学等学科的理论和进展，发现新的药物靶标，从分子、基因、受体、组织和整体水平系统准确地确定中药复杂体系中的药效物质；(2)中药有效成分的提取与分析；中药化学成分非常复杂，而且有效成分也具有相对性。为了高效率地提取中药有效成分，应用各种现代提取技术，如SFE、SWE、UAE等，可用于中药复杂体系中有效成分的提取，利用准确的仪器分析方法和计算机技术，通过因子分析方法对中药复杂体系进行定性定量评价；(3)中药药效物质与中医药理论相关性研究；利用现代分析方法研究中药复杂体系中药效物质与中医药理论的定量关系，并结合现代医学理论，阐明其作用机制，在此基础上对中药及其复方进行全面质量控制。第二节中药制剂分析工作的基本程序中药制剂分析程序一般可分取样、测试样品溶液的制备和测定（包括定性鉴别、杂质检查、含量测定）等。一、取样1．供试品要具有代表性：原则是均匀、合理。2．严格按照规定的取样方法进行取样：一般应从每个包装的四角和中央五处取样，深度可达1/32/3处。取得的样品装入清洁、干燥、具磨口塞的容器或密封的塑料袋中，并注明品名、批号、数量、取样日期及取样人。3．抽取供试品的数量：各类中药制剂取样大致是至少够3次检验的用量。贵重药品可酌情取样。粉状制剂（散剂、颗粒剂）一般取样100g，可从包装的上、中、下三层及周围间隔相等部位取样若干，将所得样品混匀，按〝四分法〞从中取出所需供试量。液体制剂（口服液、药酒、糖浆、酊剂等）一般取样200ml。同时须注意均匀取样。固体中成药（丸剂、片剂）成品取样一般为100g，压片后取样200片。丸剂一般取10丸。胶囊剂称取不少于20个胶囊，倾出其中的药料，称定空胶囊的重量，由总重中减去，即为胶囊内药料的重量。依标示量及供试量称取部分药料供分析。一般取样量为100g。注射液的取样，灌注、熔封，灭菌前后应经过两次分析。灌封前将注射液混合均匀，如液体取样原则取样，再按标示量及供试量分别取部分进行检验；经灭菌后的注射液须按原来的方法进行分析检验。已封好的安瓿，取样量一般为200支。其它剂型的中成药，可根据具体情况随意抽取一定数量，作为随机抽样。供试样品检验完毕，应保留一半数量作为留样观察。二、测试样品溶液的制备中药制剂测试样品溶液的制备一般分为提取、分离、净化等过程。1.中药制剂样品的提取冷浸法，6~10~20倍药重溶剂，称重，浸泡12~24~48小时，称重,，等分取样或取总样测定。适宜遇热不稳定的有效成分；连续回流法，样品置索氏提取器中，利用溶剂反复提取，提取效率高，溶剂少，遇热不稳定的有效成分不宜用此法；超声波提取法，样品置容器中，溶剂提取，效率高，一般样品30min内即可完成。2．中药制剂样品的预处理液-液萃取法:溶剂直接萃取、离子对萃取，操作繁，易乳化。沉淀法：采用某些试剂沉淀杂质或沉淀待测成分。蒸馏法：利用待测成分或其分解产物具有挥发性的特点，采用蒸馏法、收集馏液进行含量测定，必须明确测定成分的结构才可用此法。色谱法（液-固萃取法），常用净化剂有三氧化二铝、氧化镁、硅胶、活性炭、大孔树脂、离子交换树脂、硅藻土、键合相硅胶C18、C8等。其中离子交换树脂、硅藻土、键合相硅胶C18、C8等目前有较多商品预处理柱，使用方便，操作简单，净化效率高。三、定性鉴别、检查和含量测定1．定性鉴别1）性状鉴别系指中成药的形状、颜色、气味等，凡药典收载品，在药典中均有规定，可按要求进行检查。2）显微鉴别因为含有中药原粉的中成药均保留中药材的显微特征。可以通过这些特征，对中成药进行定性鉴别。3）理化鉴别药典中常用的方法有：荧光法、显色法、沉淀法、微量升华法；纸色谱法、薄层色谱、液相色谱、气相色谱等。中药定性鉴别应选择其中主药（君药）、辅药（臣药）作为主要对象，其次应鉴别毒剧药及贵重药材。2．检查按我国药典要求，中药制剂需要检查的项目大致可分为三类：1）污染型中成药一般杂质检查项目有：异物、灰分、酸不溶性灰分、重金属、砷盐等；卫生学检查：微生物细菌检查；以及有的产品要求农药残留量的检测。2）特殊杂质型原料药材掺假、有毒成分的限量检查。3）剂型的要求检查类型（制剂通则要求检查项目）中成药一般质量要求的检查有：挥发油测定、水分测定（固体制剂）、乙醇含量测定、总固体、相对密度、pH值（酊剂、药酒）、装量差异（片重差异）、崩解度（片剂、胶囊剂）、熔点测定、旋光度测定等。3．含量测定中成药含量测定所采用的方法除经典的重量法、容量法(包括中和法、容量沉淀法、络合滴定法、氧化还原法及非水溶液滴定法等)外，还可采用电位法、库伦滴定法、比色法、可见-紫外分光光度法、红外分光光度法、液相色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、双波长薄层扫描法等。1）对有效成分明确的中药制剂要进行有效成分的含量测定。2）大致明确有效成分，要求测定这些成分的总量。3）对有效成分已知但无理想的测定方法的中药制剂，可通过测定其中某些化学成分的含量间接控制有效成分的含量。4）对有效成分不明确的中药制剂可采用以下方法：选择可能的有效成分或主要成分（指示性成分）进行含量测定；测定药物的总固体量；选择在原料加工炮制时或制备、贮存过程中易损失、破坏的成分进行含量或限量测定。5）中药制剂中含有剧毒性成分则要测定其含量。6）贵重药材在制剂中投料量应加以测定。第二章中药制剂定量分析方法第一节可见-紫外光谱法一、单一物质的定量定量依据是Beer-Lambert定律，A=lC。测定单一物质时，先测定物质的吸收光谱，然后选择最大吸收峰的波长max进行定量分析。一个物质若有几个吸收峰时，可选择吸收峰较高，在此吸收峰处吸光度随波长变化较小，并且其它物质无吸收的波长作为定量条件。一般不选择光谱最左边的末端吸收峰作定量测定的波长。常用定量方法：1.对照法C样=C标A样/A标；C标A样/（A标C样）=样品%，C样和C标分别为样品浓度和标准品浓度，C样为样品标示浓度。2.标准曲线法：从标准品吸光度-浓度曲线求得样品浓度。二、混合物的含量测定一）混合物中有a，b两种组分，若两者的最大吸收峰不重合，且在a的1max处，b无吸收；在b的2max处，a无吸收。可分别在1max、2max处用单一物质的定量方法从混合物中测定a、b的浓度。二）混合物中有a，b两种组分，吸收光谱部分重叠，在a的1处，b无吸收；在b的2处，a有吸收。先在2处测定总吸收Aa+b，再在1处测定Aa1；先从Aa1直接求出a的浓度，根据a的浓度求出Aa2。再从Aa+b减去Aa2后求得Ab2，就可求得b的浓度。（三）双波长测定法中药制剂分析中常用的方法为等吸收波长法和系数率法。1．等吸收波长法1）基本原理根据左图选出两个波长1与2，其选择原则是干扰组分a在1与2处吸收度相等，即Aa1=Aa2。而待测组分b在1与2处的差吸收度A应比较大，再在1与2处测混合组分溶液的差吸度A。设1为参比波长，2为测量波长，则等吸收波长法原理示意图A=Aa+b2-Aa+b1=（Aa2+Ab2）-（Aa1+Ab1）=Ab2-Ab1=（b2-b1）CbL2）应用举例喉痛消炎丸中靛蓝、靛玉红的测定ⅰ）选择等吸收波长：用2～8g/ml的靛蓝及靛玉红的氯仿溶液在分光光度计上扫描，并用同法扫描出空白样品溶液的吸收曲线。从左图可知靛蓝在540nm、634.4nm处有合适的等吸收波长；靛玉红却是在514．2nm和566nm处有等吸收波长，而空白样品液在上述波长处的吸收曲线几乎成一条直线、不干扰测图2-1-3靛蓝、靛玉红的吸收曲线(1)靛蓝(2)靛玉红(3)无青黛样品定，选取靛蓝的测定波长s1＝566nm、参比波长R1=514.2nm。可选靛玉红的测定波长s2=540nm、参比波长R2=634.4nm。ⅱ)标准曲线：精密吸取靛蓝对照品溶液0.25、0.50、…、2.0ml；靛玉红对照品溶液0.20、0.40、…、1.40ml，分别放入10ml量瓶中，用氯仿稀释至刻度，分别在上述等吸收波长处测其差吸收度：A1=A566nm-A514.2nm；A2=A540nm-A634.4nm；然后用A对C作标准曲线；并求出其一元回归方程：A1＝0.02241·C1(r1＝1.0000)A2＝