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病理学技术（中级）专业知识精讲班2十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的光学附件：聚光镜聚光镜又名聚光器，装在载物台的下方。小型的显微镜往往无聚光镜，在使用数值孔径0.40以上的物镜时，则必须具有聚光镜。聚光镜不仅可以弥补光量的不足和适当改变从光源射来的光的性质，而且将光线聚焦于被检物体上，以得到最好的照明效果。聚光镜的的结构有多种，同时根据物镜数值孔径的大小，相应地对聚光镜的要求也不同。3十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的光学附件：聚光镜1、阿贝聚光镜由两片透镜组成，有较好的聚光能力，但是在物镜数值孔径高于0.60时，则色差、球差就显示出来。因此，多用于普通显微镜上。4十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的光学附件：聚光镜2、消色差聚光镜这种聚光镜又名“消色差消球差聚光镜”和“齐明聚光镜”；它由一系列透镜组成，对色差球差的校正程度很高，能得到理想的图象，是明场镜检中质量最高的一种聚光镜，其NA值达1.4。因此，在高级研究显微镜常配有此种聚光镜。它不适用于4X以下的低倍物镜，否则照明光源不能充满整个视场。5十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的光学附件：聚光镜3、摇出式聚光镜在使用低倍物镜时（如4X），由于视场大，光源所形成的光锥不能充满真整个视场，造成视场边缘部分黑暗，只中央部分被照亮。要使视场充满照明，就需将聚光镜的上透镜从光路中摇出。4、其它聚光镜：聚光镜除上述明场使用的类型外，还有作特殊用途的聚光镜。如暗视野聚光镜，相差聚光镜，偏光聚光镜，微分干涉聚光镜等，以上聚光镜分别适用于相应的观察方式。6十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的照明装置：透射式照明透射式照明法分中心照明和斜射照明两种形式：（1）中心照明：这是最常用的透射式照明法，其特点是照明光束的中轴与显微镜的光轴同在一条直线上。它又分为“临界照明”和“柯勒照明”两种。7十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的照明装置：透射式照明a）临界照明：这是普通的照明法。这种照明的特点是光源经聚光镜后成象在被检物体上，光束狭而强，这是它的优点。但是光源的灯丝象与被检物体的平面重合，这样就造成被检物体的照明呈现出不均匀性，在有灯丝的部分则明亮；无灯丝的部分则暗淡，不仅影响成象的质量，更不适合显微照相。其补救的方法是在光源的前方放置乳白和吸热滤色片，使照明变得较为均匀和避免光源的长时间的照射而损伤被检物体。8十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的照明装置：透射式照明b）柯勒照明：克服了临界照明的缺点，是研究用显微镜中的理想照明法。是进行显微照相所必须的一种照明法。光源的灯丝经聚光镜及可变视场光阑后，灯丝象第一次落在聚光镜孔径的平面处，聚光镜又将该处的后焦点平面处形成第二次的灯丝象。这样在被检物体的平面处没有灯丝象的形成，不影响观察。此外照明变得均匀。观察时，可改变聚光镜孔径光阑的大小，使光源充满不同物镜的入射光瞳，而使聚光镜的数值孔径与物镜的数值孔径匹配。同时聚光镜又将视场光阑成象在被检物体的平面处，改变视场光阑的大小可控制照明范围。此外，这种照明的热焦点不在被检物体的平面处，即使长时间的照明，也不致损伤被检物体。9十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的照明装置：透射式照明（2）斜射照明：这种照明光束的中轴与显微镜的光轴不在一直线上，而是与光轴形成一定的角度斜照在物体上，因此成斜射照明。相差显微术和暗视野显微术就是斜射照明。10十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的照明装置：落射式照明这种照明的光束来自物体的上方通过物镜后射到被检物体上，这样物镜又起着聚光镜的作用。这种照明法是适用于非透明物体，如金属，矿物等。11十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的光轴调节：光源灯丝调节在显微镜的光学系统中，光源、聚光镜、物镜和目镜的光轴以及光阑的中心必须与显微镜的光轴同在一直线上，所以在镜检前必须进行显微镜光轴的调节，否则不能达到最佳观察效果。光源灯丝调节旧式显微镜需要调节灯泡的位置。目前的新型显微镜的光源已经进行了予定心设置，所以不需要调整。12十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的光轴调节：聚光镜的中心调节实际上显微镜光轴的调整的重点即是聚光镜的位置调整。首先将视场光阑缩小，用10X物镜观察，在视场内可见到视场光阑的轮廓，如果不在中央，则利用聚光镜外侧的两个调整螺钉将其调至中央部分，当缓慢地增大视场光阑时，能看到光束向视场周缘均匀展开直至视场光阑的轮廓象完全与视场边缘内接，说明已经和轴。和轴后再略为增大视场光阑，使轮廓象刚好处于视场外切或略大。13十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的光轴调节：孔径光阑的调节孔径光阑安装在聚光镜内，研究用显微镜的聚光镜的外侧边缘上都有刻数及定位记号，这样便于调节聚光镜与物镜的数值孔径相匹配，原则上说更换物镜时需调整聚光镜的数值孔径，一般物镜的数值孔径乘0.6或0.8就是聚光镜的数值孔径。【掌握】显微镜的种类：明视野显微镜应用明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式，广泛应用于病理、检验，用于观察被染色的切片，所有显微镜均能完成此功能。十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的种类：暗视野显微镜应用暗视野实际是暗场照明法。它的特点和明视野不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。因此，视场成为黑暗的背景，而被检物体则呈现明亮的象。暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图象。暗视野观察的分辨率远高于明视野观察，最高达0.02～0.004mm。十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的种类：相差显微镜应用人眼只能区分光波的波长（颜色）和振幅（亮度），对于无色通明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时很难观察到标本。相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效地利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。这大大便利了活体细胞的观察，因此相差镜检法广泛应用于倒置显微镜。十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的种类：微分干涉显微镜应用能观察无色透明的物体，而且图象呈现出浮雕壮的立体感，并具有相差镜检术所不能达到的某些优点，观察效果更为逼真。微分干涉镜检术是利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等，光束分别在距离很近的两点上通过被检物体，在相位上略有差别。由于两光束的裂距极小，而不出现重影现象，使图象呈现出立体的三维感觉。十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的种类：荧光显微镜应用荧光镜检术是用短波长的光线照射用荧光素染色过的被检物体，使之受激发后而产生长波长的荧光，然后观察。荧光镜检术广泛应用于生物，医学等领域。十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的种类：偏光显微镜应用偏光显微镜是鉴定物质细微结构光学性质的一种显微镜。凡具有双折射的物质，在偏光显微镜下就能分辨的清楚，当然这些物质也可用染色法来进行观察，但有些则不可能，而必须利用偏光显微镜。偏光显微镜的特点，就是将普通光改变为偏光进行镜检的方法，以鉴别某一物质是单折射（各向同性）或双折射性（各向异性）。双折射性是晶体的基本特性。因此，偏光显微镜被广泛地应用在矿物，化学等领域。在生物学和植物学也有应用。十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的种类：倒置显微镜应用组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，物镜在载物台之下。倒置显微镜是为了适应生物学、医学等领域中的组织培养、细胞离体培养、浮游生物、环境保护、食品检验等显微观察。十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的种类：体视显微镜应用体视显微镜又称“实体显微镜”或“解剖镜”，是一种具有正象立体感的目视仪器，被广泛地应用于生物学、医学、农林、工业及海洋生物各部门。十显微镜及摄影技术【掌握】显微镜的种类：激光共聚焦显微镜应用它是在荧光显微镜成像的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激光荧光探针，利用计算机进行图像处理，不仅可观察固定的细胞、组织切片，还可对活细胞的结构、分子、离子进行实时动态地观察和检测。于细胞形态定位、立体结构重组、动态变化过程等研究，并提供定量荧光测定、定量图像分析等实用研究手段，结合其他相关生物技术，在形态学、生理学、免疫学、遗传学等分子细胞生物学领域得到广泛应用。十显微镜及摄影技术影响显微镜成像的相差有:（）A．色差B．球差C．场曲D．畸变E．以上均是【答案】E23高频考题显微镜镜头的数值孔径标准简写：（）A．ANB．FNC．NDD．NAE．NF【答案】D【解析】数值孔径简写NA，NA是物镜和聚光镜的主要技术参数，是判断两者性能高低的重要标志。24高频考题为提高显微镜的数值孔径常采用哪种方法:（）A.减小物镜入射光波长B.增大物镜入射光波长C.减小物镜与标本间介质折射率D.增大物镜与标本间介质折射率E.减小物镜入射角度【答案】D【解析】其余均不能提高数值孔径25高频考题暗视野显微镜常采用的照明为：（）A.斜射照明B.中心照明C.柯勒照明D.临界照明E.落射式照明【答案】A【解析】暗视野显微镜的聚光镜中央有挡光片，使照明光线不直接进入物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。分辨率比普通显微镜高50倍，能见到小至4~200nm的微粒子。26高频考题倒置显微镜的最大放大率是：（）A.10×B.20×C.40×D.60×E.100×【答案】D27高频考题有关体视显微镜的描述，下列错误的是：（）A.焦深大，便于观察被检物体的全层B.像是直立的，便于操作和描述C.视场直径大D.放大率不如常规显微镜，但工作距离很长E.双目镜筒中的左右光束平行【答案】E28高频考题下列显微镜的目镜和物镜组合中，成像效果哪项最佳？（）A.目镜×10物镜×10B.目镜×1物镜×100C.目镜×4物镜×20D.目镜×2物镜×40E.目镜×25物镜×4【答案】A29高频考题下列研究用显微镜物镜哪种性能最好？（）A.平场消色差物镜B.消色差物镜C.半复消色差物镜D.复消色差物镜E.平场复消色差物镜【答案】D30高频考题【解析】消色差物镜：外壳标有“Ach”。仅能校正轴上点的位置色差（红，蓝二色）和球差（黄绿光）以及消除近轴点慧差。不能校正其它色光的色差和球差，且场曲很大；复消色差物镜：外壳标有“Apo”，能校正红绿蓝三色光的色差，及红，蓝二色光的球差。比消色差物镜有更大的数值孔径，分辨率高，适用于高级研究镜检和显微照相；半复消色差物镜：外壳标有“FL”，成象质量远较消色差物镜为好，接近于复消色差物镜；平场物镜：是在物镜的透镜系统中增加一快半月形的厚透镜，以达到校正场曲的缺陷。平场物镜的视场平坦，更适用于镜检和显微照象。31高频考题图像上有阴影，不可能是下列哪种原因？（）A.视场光阑收缩得太多B.由于光路系统中的光学元件被污物黏附C.显微摄影装置或三目观察筒的光路选择移动杆没有到位D.所用的盖玻片太厚E.摄影装置中的棱镜或中继透镜上沾有小的碎屑或污物【答案】D32高频考题提高显微镜的分辨率，以下措施错误的是（）。A.增加明暗反差B.使用短波长光源C.缩小孔径角D.增大孔径角E.提高数值孔径值【答案】C33高频考题【解析】显微镜的分辨率是指能被显微镜清晰区分的两个物点的最小间距的能力。其计算公式是σ=λ/NA。式中σ为分辨率；λ为光线的波长；NA为物镜的数值孔径（NA=ηsina/2，η为介质的折射率，a为孔径角）。可见物镜的分辨率是由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定。NA值越大，照明光线波长越短，则σ值越小，分辨率就越高。要提高分辨率，即减小σ值，可采取以下措施（1）降低波长λ值，使用短波长光源。（2）增大介质η值。（3）增大孔径角a值。（4）增加明暗反差。34高频考题显微镜的标准目镜是（）。A.×40B.×4C.×20D.×10E.×100【答案】D35高频考题切片染色后常用中性树胶（加拿大树胶）封片，主要的原因是（）。A.树胶的折射率比玻璃小B.树胶与玻璃的折射率不相等C.树胶的折射率比玻璃大D.树胶与玻璃的