血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)在RON介导的肺腺癌细胞侵袭性生长中的作用-百替生物

报告人：Adam2014-12-25血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1（SGK1）在RON介导的肺腺癌细胞侵袭性生长中的作用简介SGK1作为RON、ERK1/2、β-catenin和EMT信号传导的关键蛋白，在RON介导的肺腺癌发生、发展中有重要作用。1.RON的激活方式2.RON的致癌机制3.EMT的意义及分型Questions：肺腺癌：肺腺癌（lungadenocarcinoma）是肺癌的一种，属于非小细胞癌。肺腺癌大多起源于较小的支气管粘膜分泌粘液的上皮细胞，因此大多数肺腺癌的早期症状位于肺的周围部分，呈球形肿块，靠近胸膜。腺癌对放射治疗敏感度差。吸烟是引致肺腺癌的主要成因，接触某些化学物质，例如石棉、铀、铭、镍等都可能与肺腺癌有关。关键词受体酪氨酸激酶RON：RON是受体酪氨酸家族MET原癌基因亚家族中的一员,主要在上皮细胞中表达,其配体是巨噬细胞刺激蛋白(macrophagestimulatingprotein,MSP)。激活后的RON在体外引起细胞的分化、迁移、形变和基质侵袭。RON的过度表达、突变及其剪切变异体与人类的结直肠癌、乳腺癌、肺癌及肾癌等多种人体上皮源性肿瘤的发生、发展有关。关键词RON激活方式：研究显示RON激活的方式有2种,即配体依赖和配体非依赖方式。RON与MSP结合后,迅速通过二聚化产生自身激酶域的磷酸化,而导致催化效率极大提高,并且磷酸化的RON亦能发生构象变化,C末端产生特殊的结合信息分子的多功能锚定位点。而后通过不同的级联途径转导各种信号。这些级联径中包括Ras/有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK),磷脂酰肌醇-3-磷酸(PI-3K)/AKT,junN-末端激酶(JNK)/应激激活蛋白激酶,β-catenin,Smad和核因子-kB(NF-kB)分子等。关键词RON的致癌机制：过表达：积累的RON具有自身磷酸化活性,大量的野生型的RON在细胞内积聚可导致激酶呈持续性激活,从而引起细胞的增殖和运动。基因突变：发现RON激酶区域D1232H/V或M1254T的点突变能够引起裸鼠的肿瘤生长和转移。D1232V和M1254T点突变可引起β-catenin的磷酸化,从而导致下游传导通路中一系列因子的激活。剪切变异：目前已知有3种剪切变异体，实验发现与转化细胞活性，诱导肿瘤发生有关。诱导EMT：RON能独立或与其他因子[如转化生长因子-β(TGF-β)]合作诱导上皮-间质转换(EpithelialMesenchymalTransition,EMT)。上皮间质转化（EMT）：EMT指上皮组织丧失上皮特征而获得间质的表型。EMT包括上皮细胞获得纺锤形的形态、E-钙黏素表达减少、β-catenin重新分配、细胞骨架肌动蛋白组、波形蛋白(vimentin)表达增高及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。EMT的获得导致上皮源性肿瘤细胞侵袭和转移能力的增强。关键词EMT分类：I型EMT：与胚胎形成相关，涉及Wnt、Notch通路；II型EMT：与损伤修复相关，涉及Smads、ERK-MAPK、PI3K-AKT通路；III型EMT：与上皮细胞恶性肿瘤相关，涉及酪氨酸激酶受体、整合素、Wnt、NF-kB、TGF-β1通路。关键词血清和糖皮质激素调节蛋白激酶（SGK）：一种新的丝/苏氨酸蛋白激酶，与蛋白激酶B（PKB/Akt）具有高度同源性。当细胞受到糖皮质激素或血清刺激后，SGK的转录水平会迅速升高，因此命名为血清和糖皮质激素调节蛋白激酶，有SGK1、2、3三种异构体。SGK1参与了人体许多重要的生理过程，如离子通道活化、细胞增殖与凋亡等。关键词Erk1/2：细胞外调节蛋白激酶（extracellularregulatedproteinkinases,ERK)分为ERK1和ERK2,统称为ERK1/2,主要被各种生长因子、离子射线、过氧化氢等磷酸化而激活,进入细胞核作用于E1k-1,c-myc,c-fos,c-jun,ATF,NF-kB和AP-1等转录因子,促进某些基因的转录与表达,和细胞的增殖与分化密切相关。关键词关键词β-catenin：β-链蛋白(β-catenin)最早作为一种黏附因子被发现，后来人们发现β-catenin还是一种多功能的蛋白质。β-catenin主要位于细胞膜，而在胞浆中游离量较少。β-catenin的功能主要为介导细胞间黏附和参与基因的表达。β-catenin作为一种多功能的蛋白质，广泛存在于各种类型的细胞，如内皮细胞、成纤维细胞、成骨细胞中，在参与这些细胞的增殖、分化和凋亡等方面发挥了重要的调节作用。临床样本中指标检测A549细胞中指标检测siRNA干扰A549细胞SGK1抑制剂处理肺腺癌动物造模小鼠体内的siRNA干扰课题设计1.临床样本中指标检测实验分组：肺腺癌组织癌旁正常组织实验方法：WesternblotqRT-PCR检测指标：RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-β-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist2.A549细胞中指标检测实验分组：A549细胞实验方法：WesternblotqRT-PCR检测指标：RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-β-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist3.siRNA干扰A549细胞实验分组：对照组空白组干扰组实验方法：脂质体转染WesternblotqRT-PCRCCK-8流式细胞术Transwell检测裸鼠成瘤实验检测指标：RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-β-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist4.SGK1抑制剂处理实验分组：A549细胞A549+SGK1抑制剂处理实验方法：脂质体转染WesternblotqRT-PCRCCK-8流式细胞术Transwell检测裸鼠成瘤实验检测指标：RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-β-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist5.肺腺癌动物造模实验分组：正常小鼠模型小鼠实验方法：见下页检测指标：利用WB检测RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-β-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist6.小鼠体内的siRNA干扰实验分组：正常小鼠造模组siRNA干扰小鼠造模组实验方法：WesternblotHE染色检测指标：RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-β-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist预期结果SGK1作为RON、ERK1/2、β-catenin和EMT信号传导的关键蛋白，在RON介导的肺腺癌发生、发展中有重要作用。