限制性内切酶

限制性内切酶生技2班张维嘉楼辉辉梁竟一冯夏艳孟慧毛荣殷智强限制性核酸内切酶是可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，简称限制酶。根据限制酶的结构，辅因子的需求切位与作用方式，可将限制酶分为三种类型，分别是第一型、第二型及第三型。Ⅰ型限制性内切酶既能催化宿主DNA的甲基化，又催化非甲基化的DNA的水解；Ⅱ型限制性内切酶只催化非甲基化的DNA的水解；III型限制性内切酶同时具有修饰及认知切割的作用。第一型限制酶同时具有修饰（modification）及识别切割（restriction）的作用；另有识别（recognize)DNA上特定碱基序列的能力，通常其切割位（cleavagesite）距离识别位（recognitionsite）可达数千个碱基之远。例如：EcoB、EcoK。第二型限制酶只具有识别切割的作用，修饰作用由其他酶进行。所识别的位置多为短的回文序列（palindromesequence）；所剪切的碱基序列通常即为所识别的序列。是遗传工程上，实用性较高的限制酶种类。例如：EcoRI、HindⅢ。第三型限制酶与第一型限制酶类似，同时具有修饰及识别切割的作用。可识别短的不对称序列，切割位与识别序列约距24-26个碱基对。例如：HinfⅢ。限制作用实际就是限制酶降解外源DNA，维护宿主遗传稳定的保护机制。甲基化是常见的修饰作用，可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保护。通过甲基化作用达到识别自身遗传物质和外来遗传物质的目的。所以，能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中可能有该酶识别的序列，只是该识别序列或酶切位点被甲基化了。但并不是说一旦甲基化了，所有限制酶都不能切割。大多数限制酶对DNA甲基化敏感，因此当限制酶目标序列与甲基化位点重叠时，对酶切的影响有3种可能，即不影响、部分影响、完全阻止。对甲基化DNA的切割能力是限制酶内在和不可预测的特性，因此，为有效的切割DNA，必须同时考虑DNA甲基化和限制酶对该类型甲基化的敏感性。另外，现在很多商业限制酶专门用于切割甲基化DNA。用于DNA基因组物理图谱的组建；基因的定位和基因分离；DNA分子碱基序列分析；比较相关的DNA分子和遗传工程。限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是提高自身的防御能力.限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA。ApaI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'GGGCC^C3‘BamHI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'G^GATCC3'BglII（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'A^GATCT3'EcoRI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'G^AATTC3'HindIII（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'A^AGCTT3'KpnI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'GGTAC^C3'NcoI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'C^CATGG3'NdeI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'CA^TATG3'NheI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'G^CTAGC3'NotI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'GC^GGCCGC3'SacI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'GAGCT^C3'SalI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'G^TCGAC3'SphI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'GCATG^C3'XbaI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'T^CTAGA3'XhoI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'C^TCGAG3'基因工程的基本流程