药物稀释法与管碟法的抗菌试验

抗生素药物稀释法与管碟法的抗菌试验第二大组：唐鹏程张君曼许杰生肖伟亨谢秋惠蒋铭强李淑霞郑慧珠陈芃仲李文婷张妮何磊抗生素药物稀释法与管碟法的抗菌试验选取药物：氯霉素滴眼液规格：8ml20mg国药准字H44020212批号130115菌种：藤黄微球菌（Micrococcusluteus）研讨会试验方法：1.预试验1.1复苏：取藤黄微球菌（Micrococcusluteus）冻干粉一支自然解冻，准备一瓶灭菌好的营养肉汤100ml，无菌操作，（37℃,24h）摇床培养。1.2琼脂斜面：取复苏好的藤黄微球菌（Micrococcusluteus）用接种环顶点沾一下在灭菌好的斜面划线（37℃,24h）培养即可。菌液制备：从上面斜面的培养物中（用接种环顶点沾一下即可）接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养18h，用直径3mm的接种环取一环菌液接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养6h即可，4℃保存。确定梯度从上面斜面的培养物中（用接种环顶点沾一下即可）接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养18h，用直径3mm的接种环取一环菌液接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养6h取出，在无菌操作下，用生理盐水稀释至，取，，做细菌总数计数。稀释梯度至，细菌总数计数表编号1无法计数158442无法计数14452平均菌落数无法计数15148410510610结论：由稀释梯度至，细菌总数计数表可知，为我们所需要的梯度。610一．试管法（无菌操作2.1预实验（2批）：取营养肉汤100ml，试管10支，第一管加药物1ml+9ml肉汤充分混合，第二管取第一管中1ml+9ml肉汤混匀，第三管取第二管1ml+9ml肉汤混匀，以此类推至第九管，取出1ml弃去，第十管不加药，只加了营养肉汤9ml。稀释完毕后，十管的药物稀释度为，，…，，及阴性。2.2菌液制备：在上述的1.3中，菌液制备最后所得的菌液中取1ml用营养肉汤作为稀释剂梯度稀释至，用灭过菌的移液枪每管加0.05ml，第九管不加菌作为阴性对照，第十管不加药物加菌为阳性对照。加完菌后充分混匀，经37℃培养18h后判断结果。2.3确定（最大抗菌效价，6批）：每批取营养肉汤100ml，试管7支，第一管加药物1ml+9ml肉汤充分混合，第二管取第一管中2ml+18ml肉汤混匀，第三管取第二管10ml+10ml肉汤混匀，第四管取第三管10ml+10ml肉汤混匀，第五管取第四管10ml+10ml，第六管取第二管1ml+9ml，第七管不加菌作为阴性对照，第八管不加药物加菌为阳性对照。药物稀释度为1:10,1:100,1:200,1:400,1:800,1：1000，加完菌后充分混匀，经37℃培养18h后判断结果。药物稀释法找出最大抗菌效价表，加菌量0.05ml二、管碟法（2批）3.1菌液制备：每批取营养肉汤100ml，试管6支，第一管加药物1ml+9ml肉汤充分混合，第二管取第一管中2ml+18ml肉汤混匀，第三管取第二管10ml+10ml肉汤混匀，第四管取第三管10ml+10ml肉汤混匀，第五管取第四管10ml+10ml，第六管取第二管1ml+9ml，药物稀释度为1:10,1:100,1:200,1:400,1:800,1：1000。3.2培养基的制备：1、先倒下层（抗生素效价2号培养基，倒入6个平皿凝固。）2菌液制备（营养琼脂斜面加入2ml生理盐水混匀洗脱，倒入40ml抗生素效价2号培养基混匀，作为上层。）3、从40ml中每皿分别取5ml迅速加入6个平皿中，混匀，凝固后作好标记。（每皿做四个标记,1/10两个，1/100两个，1/200两个，1/400两个，1/800两个，1/1000两个.。）4、每皿加入4个牛津杯，滴加药液到小钢管中，分别按浓度加入1/10两个，1/100两个，1/200两个，1/400两个，1/800两个，1/1000两个。5、将平皿盖换成陶瓦盖。6、恒温培养。（24h，37℃）7、记录结果试验结果：本试验所采用的藤黄微球菌在抗生素效价2号培养基中，正常情况下均为混浊生长，培养基经培养正常，保持原来一样状态，在长满细菌的平皿中无出现抑菌圈为抑菌（杀菌），以出现抑菌圈的药液，最高稀释倍数为该药的抑菌效价，由管碟法测定最大抗菌效价表，可知1:400为最大稀释倍数，最大抗菌效价为2500/400=6.25u。讨论：由药物稀释法与管碟法的抗菌试验两者都可以直观看到结果，药物稀释法操作简单快捷，管碟法操作复杂，技术要求较高。药物稀释法的抗菌效价计算较为简单，管碟法无法计算其抗菌效价。