临床实验室三大常规

重视实验室三大常规长沙市第一医院检验科李宁沙2011-08-01血球仪计数•三分群•五分群•全自动涂片染色加图形比对技术检测原理与基本结构检测原理与基本结构红细胞和血小板共用一个小孔管，正常人红细胞体积和血小板体积间有一个明显界限，血小板计数准确容易CPU对血小板和红细胞分布图进行判断红细胞和血小板的检测红细胞和血小板的检测浮动界标检测原理与基本结构检测原理与基本结构白细胞的检测OY对仪器的性能与要求•包括精度、互染、可比性、线性、漂移、异常样品的抗干扰影响即抗干扰能力等要按省卫生厅湘卫医发【2005】41号文件规定定期检查，达到规定要求才能使用。同时室内质控措施要坚持并有规范的记录。无室内质控或室内质控不达标绝不可轻易签发检验报告单。•什么是【2005】4l号文件？要点•标本送检与接收制度•异常结果登记报告制度（强调：危急值、微生物预报告、失控记录等）•异常结果复查标准•生物安全，废液处理•交接班制度•校准、比对制度•质控图打印成册•五分类。三分类计数原理要点•推片分类的原则•各类细胞计数正常时，中性粒细胞、淋巴细胞增高或降低时，需要推片分类•发现异常淋巴细胞时，需要推片分类•嗜酸性粒细胞增高时，需要推片分类•血小板增高或降低时，需要推片分类，并对血小板形态进行描述•红细胞分布大小、宽度异常时，需要推片分类•小红细胞异常时，需要推片分类OY基本参数和衍生参数互相影响•仪器检测四项基本参数：血红蛋白(HGB)、红细胞(RBC)、白细胞(WBC)及血小板(PLT)，其它的均为衍生参数。任一种基本参数的失真则由其衍生的参数必错，只有采取综合分析的观点才会得到全面、正确的概念。•类别MCVRDW•正常→→•缺铁性贫学↓↑•巨幼细胞性贫血↑↑•溶血性贫血↑↑•铁粒幼细胞贫血→→•再生障碍性贫血→↑•单纯小细胞性贫血↓→•注：→无变化，↑增大，↓减少OY用于贫血分类(Bessman分类)OY操作人员上岗要仔细阅读仪器说明书•了解仪器保养的要求及使用过程中注意事项及小故障排除方法等。要按湘卫医发【2005】4l号文件规定，定期检测仪器的各项性能，严守操作规程。参加室间质评调查，搞好室内质控，确保仪器正常运转，保证检测数据的可信性。•体积(volume，V)电阻抗原理测定细胞体积和数量•电导性(conductivity，C)高频电磁探针，测量细胞内部结构，细胞内核浆比例•光散射(scatter，S)细胞内粗颗粒的光散射强度要比细颗粒更强检测原理与基本结构五分类技术：容量、电导、光散射（VCS）检测技术容量、电导、光散射（VCS）检测技术光散射电导性电阻抗每个细胞接受三维分析定义到三维散点图的相应位置检测原理与基本结构光散射与细胞化学联合检测技术•这类仪器是应用激光散射与细胞化学染色技术对白细胞进行分类计数。检测原理与基本结构联合检测型原理•主要体现在白细胞分类，实质是选用较特异的方法将血中含量较少的嗜酸、嗜碱性粒细胞检出，发现异常细胞。•共有特点是：均使用了鞘流技术。前鞘流后鞘流检测窗检测原理与基本结构电阻抗、射频与细胞化学联合这类仪器是利用电阻抗、射频这一成熟细胞计数技术结合细胞化学技术，通过4个不同的检测系统对白细胞、幼稚细胞进行分类和计数。•嗜酸性粒细胞检测系统•嗜碱性粒细胞检测系统•淋巴、单核和粒细胞检测系统•幼稚细胞检测系统检测原理与基本结构血红蛋白测定原理除干式、无创型外，各型对血红蛋白测定都采用光电比色原理•血细胞悬液中加入溶血剂后，红细胞溶解释放出血红蛋白，后者与溶血剂中有关成分结合形成血红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统•HiCN•特定波长(530～550nm)下进行光电比色检测原理与基本结构结果分析结果分析结果分析结果分析结果分析影响因素和注意事项•分析前（病人、输液、扎血、抽血、抗凝……）•分析中（微小凝块、冷凝集、有核红细胞、高Tg影向细胞溶解、pt聚集、大pt、wbc碎片、脆性wbc，混匀、校准、质控……）•分析后（信息复核与标本复查）•复查规则（原始样、重抽样、替代法）关于复查关于复查让我们复习形态，加深记忆重点：疟原虫、异常淋巴、幼稚细胞、示教片大家来阅片异淋恶性疟滋养体异淋恶性疟配子体异淋晚幼红裂殖体鞭虫卵中性粒细胞分叶核血小板异淋中性粒分叶核霉菌晚幼红OY关于白细胞分类•首先必须明确，迄今为止世界上无论多先进的血细胞分析仪用于白细胞分类只能当作一种过筛手段，不能完全取代手工显微镜下分类。坚决反对有些单位使用白细胞分析仪后就一律不再作镜下复查和分类的错误倾向。当出现白细胞、红细胞、血红蛋白及血小板任何一项有明显升高或降低：白细胞分类出现异常结果；红细胞、白细胞和血小板的任何一个直方图出现异常图形以及仪器上显示警示信号(如flag等)时，更须用显微镜检查及分类。OY关于常用英语词汇•光电比色分析Photoelectriccolorimetricanalysis•吸光度Absorbance•白细胞分类计数Differentialleukocytecount•血型Bloodtype•输血科Departmentofbloodtransfusion•交叉配血试验Bloodcrossmatchtest•临床检验科Departmentofclinicallaboratory•艾滋病AcquiredImmunodeficiencySyndromeOY关于常用英语词汇•结核病Tuberculosis肝炎Hepatitis•长沙市公共卫生救治中心ChangShapublichealthSalvationcenter•显微镜Microscope狂犬病Rabies•电子血球计数仪Electronicbloodcellcounter•生物安全Biologicalsafety•电解质分析仪Electrolyteanalyzer•聚合酶连反应PolymerasechainreactionOY关于常用英语词汇•质量控制Qualitycontrol•失控Beoutofcontrol在控Incontrol•骨髓Bonemarrow血浆Plasma•（ELISA）Enzymelinkedimmunosorbentassay•酶促反应Enzymaticreaction•溯源性Traceability校准Calibration•实验室信息系统Laboratoryinformationsystem•医院信息系统Hospitalinformationsystem•VCS技术VolumeConductivityScatterOY关于常用英语词汇•长沙传染病医院ChangShaContagioushospital•性传播疾病Sexuallytransmitteddisease•蒸馏水Distilledwater•离心机Centrifuge•参考值Referencevalue•危急值Criticalvalue•床边诊断(POCT)Point-Of-careTesting•离子选择电极IronSelectiveElectrode(ISE)•标准操作程序StandardOperatingProcedureOY关于常用英语词汇人类缺损病毒humanimmunodeficiencyvirus表面抗HbsAghepatitisBVirusSurfaceAntigenPDWplateletvolumedistributionwidthMPVmeanplatetetsVolumeMCHCmeanCorpuseularhemoglobinConcentrationMCVmeanCorpuseularVolumeMCHmeanCorpuseularhemoglobin脑脊液cerebrospinalfluid肝肾功能hepaticandrenalfunction尿液常规•回顾纯手工时代•自动尿液分析仪•贵重仪器等于质量吗？•在现代化精密仪器时代下的手工尿液常规•尿液自动分析仪的发展史•尿液分析仪测试原理•尿液分析仪结果•干化学检查与显微镜检查•干化学分析仪的局限性和影响因素尿液分析仪测试原理试剂带原理•多联试剂带是将多种项目的试剂块集成在一个试剂带，使用多联试剂带，浸入一次尿液可同时测定多个项目。图为德国宝灵曼公司的COMBURTEST试剂带。它采用了多层模结构;•各个厂家的产品，基本结构差不多返回知识点尿液分析仪测试原理多联试剂带结构图返回知识点•尼龙膜：防止大分子物质对反应的污染•绒制层：包括碘酸盐层和试剂层•碘酸盐层：可以破坏维生素C等干扰物质•试剂层：含有试剂成分，主要与尿液中测定物质发生化学反应，产生颜色变化•吸水层：可使尿液均匀快速的浸入，并能抑制尿液流到相邻的反应区•塑料底层：作支持体。尿液分析仪测试原理返回知识点另外，试剂带中还有另一个垫---“补偿区”，作为尿液本底颜色，以对有色尿及仪器变化等产生的误差进行补偿。•试剂带按一定的顺序排列，各个厂家不一样，尿液中的各种成分被各测定块吸收，引起化学反应及酶反应，使试剂块颜色根据尿液中各成分的比例而变化。尿液分析仪测试原理返回知识点尿液分析仪测试原理项目缩写符号反应原理胆红素BIL偶氮反应法尿胆原URO醛反应法，重氮反应法酮体KET硝基铁氢化钠法亚硝酸盐NIT亚硝酸盐还原法白细胞LEU脂酶法比密D(SG)多聚电解质离子解离法各项目测定原理表返回知识点•白细胞特异性脂酶测定原理：–尿WBC干化学法是检查尿WBC内中性粒细胞内含有的特异性脂酶。这种酶可作用于试纸膜块中的吲哚酚脂，并发生重氮盐反应形成紫色缩合物，其颜色深浅与细胞的多少呈正比例关系。对淋巴细胞、单核细胞不起反应。尿液分析仪测试原理返回知识点隐血实验原理：•利用Hb中亚铁血红素有类似过氧化物酶的作用，在供氢体（如无色的邻联甲苯胺）的存在下，使过氧化物还原成为水，而无色的邻联甲苯胺被氧化成为有色的产物。•AH2-H2O2过氧化物酶A2-H2O2（无色）（有色）尿液分析仪测试原理返回知识点测量原理：•此类仪器一般用微电脑控制，将浸有尿液的试剂带放在仪器比色槽内，试带上已产生的化学反应的各种试剂垫被光源照射，其反射光被球面积分仪接收，球面积分仪的光电管被反射的双波长光（包括通过滤光片的测定光和一束参考光）照射。测定每种试剂带块反射光的光量值与空白块的反射光量值进行比较，通过计算机求出反射率，换算成浓度值，便可由分析仪打印出半定量的数值。尿液分析仪测试原理返回知识点尿液分析仪结构尿液分析仪由：机械、光学、电路系统三部分组成。光电管球面积分仪滤光片光源光电系统结构图尿液分析仪结构结果分析•临床意义（熟练掌握）•参考值（背）结果分析尿液分析仪一般评价1.首先应该对尿液分析仪进行校正，校正的目的是让仪器进入厂商规定的状态。其操作是用标准的校正条对仪器进行测定仪器的光路，状态进行校正，以达到最佳状态，有些厂家的校正条是一次性的，不能重复使用，以免影响试验结果，有些厂家的校正条可重复使用，尿液分析仪只有在校正通过时才能进行实验，否则要停机。2.应该对尿液分析仪及试纸条的准确度进行评价。准确度指的是测定值与真值的接近程度，由于尿液分析仪是一个半定量的仪器，因此它的准确度的评价只有根据仪器制造商规定的测定范围配制成一定浓度的标准物，在仪器上严格按说明书操作，每份标准物测定3次，观察测定结果与标准物浓度相符合程度。结果分析3.用传统的方法与尿液分析仪测定作对比分析，对尿液分析仪的敏感性和特异性进行评价。4.了解该仪器对每项测试指标的测试范围，并建立该仪器的参考范围。结果分析干化学与镜检•中华医学会经过三次专家研讨会，寻求一个简单、快速的筛选方法，对干化学尿液分析提供了筛选的试验手段。在干化学尿试带质量合格，尿液分析仪运转正常情况下，试验中满足以下条件时，可免去镜检：白细胞、红细胞、蛋白质及亚硝酸盐为阴性。•另外，对肾脏疾病的病人不适合干化学检查筛选法，对以镜检结果作为诊断依据和观察疗效指标时，不宜作筛选，如：结石、结晶、寄生虫的检查。干化学与镜检影响干化学检测结果的因素•影响检测结果的因素大致来自如下几方面：–仪器、试纸条因素（包括仪器的校验和维护）–尿标本因素（