细胞ROS测定试剂盒说明书1

1GENMEDSCIENTIFICSINC.U.S.AGMS10111.1v.AGENMED细胞内氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED细胞内氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氢溴化乙啶，在细胞氧化条件下，产生红色荧光，来定量检测细胞内活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。技术背景超氧自由基阴离子（superoxideradical；O2-）、过氧化氢（hydrogenperoxide；H2O2）、羟自由基（hydroxylradical）、单线态氧气（singletoxygen）等细胞内活性氧族（ReactiveOxygenSpecies；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。二氢溴化乙啶（Dihydroethidiumbromide；Hydroethidine；DHE）是一种完全自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不外漏的染色剂。一旦被超氧自由基阴离子氧化，二氢溴化乙啶转化为溴化乙啶，进入细胞核，与DNA紧密结合，便产生荧光。据此测定细胞内活性氧族的浓度。产品内容GENMED清理液（ReagentA）毫升GENMED染色液（ReagentB）微升GENMED稀释液（ReagentC）毫升GENMED保存液（ReagentD）毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED染色液（ReagentB）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证12月用户自备胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（GMS12052）：用于细胞操作所需的培养基15毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器血细胞计数仪：用于细胞计数台式离心机：用于沉淀细胞细胞流式仪：用于细胞荧光分析（共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光细胞2实验步骤一、间接法实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（ReagentB）置入冰槽里融化，GENMED稀释液（ReagentC）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出微升GENMED染色液（ReagentB）到新的1.5毫升离心管，加入微升GENMED稀释液（ReagentC），混匀后，标记为GENMED染色工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。1．准备1瓶25cm2细胞培养瓶的待测细胞2．小心抽去细胞培养液3．加入毫升GENMED清理液（ReagentA）到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面4．小心抽去GENMED清理液（ReagentA）5．加入1毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面6．置入37℃培养箱1分种7．振动培养瓶，使细胞脱落8．加入4毫升用户自备的完全细胞培养液9．移入15毫升锥形离心管，充分混匀（注意：悬浮细胞直接从这一步骤开始）10．移取10微升在血细胞计数仪上进行细胞计数11．移出1X106细胞到新的15毫升锥形离心管12．放入台式离心机离心5分钟，速度为300g13．小心抽去上清液14．加入毫升含有GENMED染色液（ReagentB）和GENMED稀释液（ReagentC）的GENMED染色工作液，轻柔混匀15．放进37℃恒温水槽孵育20分钟，避免光照16．放入台式离心机离心5分钟，速度为300g17．小心抽去上清液18．加入预冷的微升GENMED保存液（ReagentD），轻柔混匀细胞颗粒群19．放进冰槽里20．选择下列方式之一进行操作：a)即刻进行细胞流式仪分析：波长540nm氩离子激光，观察50000个细胞以上――波峰右移，表明活性氧族（ROS）含量高b)或使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）：1）移取10微升上述细胞悬液到载波片上，盖上盖玻片2）激发波长540nm，散发波长590nm――红色荧光增强，表明活性氧族（ROS）含量高c)或使用荧光分光光度仪检测（定量检测）：1）移取400微升上述细胞悬液到1毫升比色杯2）加入微升GENMED保存液（ReagentD）3）上下倾倒混匀数次4）放进荧光分光光度仪：激发波长540nm，散发波长590nm――RFU增高，表明活性氧族（ROS）含量高3二、直接法实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（ReagentB）置入冰槽里融化，GENMED稀释液（ReagentC）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出微升GENMED染色液（ReagentB）到新的1.5毫升离心管，加入微升GENMED稀释液（ReagentC），混匀后，标记为GENMED染色工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。1．准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项5）2．小心抽去细胞培养液3．小心沿着孔壁加入微升含有GENMED染色液（ReagentB）和GENMED稀释液（ReagentC）的GENMED染色工作液到1个细胞培养孔，覆盖培养孔表面4．放进37℃细胞培养箱里孵育20分钟5．小心抽去含有GENMED染色工作液的细胞培养液6．小心沿着孔壁加入500微升37℃预热的GENMED保存液（ReagentD）到细胞培养孔7．选择下列方式之一进行操作：（A）使用倒置荧光显微镜观察（定性检测）：激发波长540nm，散发波长590nm――红色荧光增强，表明活性氧族（ROS）含量高（B）使用荧光酶标仪检测（定量检测）：放进荧光分光光度仪：激发波长540nm，散发波长590nm――RFU增高，表明活性氧族（ROS）含量高注意事项1．本产品为20次操作2．所有操作均须无菌状态下进行3．操作时，须戴手套4．孵育时，必须避免光照5．本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整操作用量：操作容器操作用量载玻片100微升载玻片培养皿1毫升35mm培养皿1毫升96孔培养板100微升48孔培养板200微升24孔培养板500微升12孔培养板1毫升6孔培养板2毫升25cm2细胞培养瓶3毫升6．根据细胞类型，调整GENMED染色工作液使用剂量（1：200至1：1000容量比），避免过度染色7．建议细胞染色完成后，即刻进行细胞荧光分析48．本公司提供阳性对照甲萘醌溶液，观察细胞荧光增强现象9．本公司同时提供系列活性氧检测试剂产品10．本公司提供细胞流式仪分析外包服务质量标准1．本产品经鉴定性能长期稳定2．本产品经鉴定荧光显色清晰使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。友情提醒IFITDOESN’TWORK，RECHECKYOUREXPERIMENTTOSEEWHATYOUDIDWRONG。订购信息编号名称规格GMS10074.1GENMED细胞内氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂盒20次GMS10074.1AGENMED清理液（ReagentA）500毫升GMS10074.1BGENMED染色液（ReagentB）1毫升GMS10074.1CGENMED稀释液（ReagentC）100毫升GMS10074.1DGENMED保存液（ReagentD）100毫升GMS12024GENMED胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液100/500毫升GMS12041GENMEDMenadioneSolution（1mM）50毫升GMS12024GENMEDDMEM完全细胞培养液500毫升产品编号名称规格GMS50001超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒50次GMS50002.1超氧化物歧化酶（SOD）细胞裂解样品制备试剂盒100次GMS50002.2超氧化物歧化酶（SOD）组织裂解样品制备试剂盒100次GMS50002.3超氧化物歧化酶（SOD）红细胞裂解样品制备试剂盒100次GMS50003.1胞浆超氧化物歧化酶（Cu/ZnSOD）分离试剂盒50次GMS50003.2线粒体超氧化物歧化酶（Mn/FeSOD）分离试剂盒50次GMS50004超氧化物歧化酶（SOD）标准曲线测定试剂盒5次GMS10016.1细胞内氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒20次GMS10016.2细胞内氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒100次GMS10016.3活体组织氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒8/20次5GMS10016.4活体组织氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒40/100次GMS10016.5冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒50次GMS10016.6冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒50次GMS10067细胞内氧化应激活性氧（ROS）比色法定量检测试剂盒100次GMS10074.1细胞内氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂盒20次GMS10074.2冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂盒50次GMS10053.1细胞总抗氧化能力（TAC）化学发光定量检测试剂盒50次GMS10053.2组织总抗氧化能力（TAC）化学发光定量检测试剂盒50次GMS10053.3食物总抗氧化能力（TAC）化学发光定量检测试剂盒50次GMS10053.4体液总抗氧化能力（TAC）化学发光定量检测试剂盒50次GMS10017线粒体损伤/氧化（NAO）荧光测定试剂盒20次GMS10096细胞超氧化物阴离子化学发光法定量检测试剂盒20次联系我们关于订购详情或技术支持，欢迎来电、来函、传真或电邮――GENMEDSCIENTIFICSINC.U.S.A大中华区分公司上海杰美基因医药科技有限公司上海市浦东新区张江高科技园区哈雷路1011号301室邮编：201203技术部电话：[phone]X101；13661801385市场部电话：[phone]X102；13311661756订购电话：[phone]X104传真：[phone]Email：[e-mail]主页：，SUITE223ARLINGTON，MA02474U.S.A.TEL：[phone]