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1.目的规范QTRAP5500型质谱仪的操作和维护。2.范围适用于QTRAP5500型质谱仪的操作和维护。3.职责QTRAP5500型质谱仪的操作与维护人员负责执行此规程。4.操作步骤4.1开机次序4.1.1开启压缩空气管道及液氮罐阀门，确认CurtainGas在0.35Mpa，Gas1/Gas2在0.7Mpa，ExhaustGas在0.35Mpa；4.1.2开启UPS，转换到逆变状态；4.1.3打开主机电源开关（ON状态），约30秒后机械泵自动启动。VacuumStatus的指示灯闪烁，直至指示灯不再闪烁，真空稳定仪器可正常使用；4.1.4开启电脑，打开Analystsoftware，即可进行操作。4.2PPG质量校准4.2.1在project工具条中选择installation，在硬件配置HardwareConfigure菜单下Active激活MassSpecOnly（只连质谱机），硬件配置表中MassSpecOnly出现绿勾后，表示API质谱仪主机与计算机通讯正常，关闭HardwareConfigureEditor。4.2.2点击左边工具菜单NavigationBar的Tune进入调谐模式。此时应听见“扑”开气的声音，Exhaust及Gas1/Gas2在此时已打开，仪器处于可使用状态（ready），软件右下角图标为绿色。4.2.3双击左边工具菜单中的MannualTuning，打开一个空白质谱参数设置及运行窗口，进入手动调谐模式。4.2.4点击Fileopen钮，选择AcquisitionMethod打开四极杆质量校准方法列表，根据要校准的目标（Q1正离子、Q1负离子、Q3正离子、Q3负离子）选择相应的方法打开。4.2.5进质量校准溶液，对于负离子校准，采用NEGPPG3×10-5标准溶液，针泵流速为10µL/min；对于正离子校准，采用POSPPG2×10-7标准溶液，针泵流速为5µL/min。把质量校准溶液吸入针筒，用集成的针泵连续进样。设立使用的针筒的内部直径尺寸为4.61mm，设定流速为5或10，单位为µL/min，按StartSyringePump开针泵。离子阱校准采用ESTuningMix。4.2.6调整喷雾针的垂直位置，针垂直位置约为5mm左右即可。4.2.7采集PPG标准品质谱数据，在质谱参数设置及运行窗口中回到MSmethod。扫描速度分别选择10、200、1000、2000Da/s，用MCAON方式采集,分别设定10、50、50、100cycles，点击Start。离子阱校准扫描速度分别选择50、250、1000、10000、20000Da/s，所有都设定50cycles。在右边的质谱图中按鼠标右键出现一菜单，选菜单中Openfile，得到一张几个不同扫描区的独立质谱峰的质谱图。M/Z906.6在Q1PositiveMode和Q3PositiveMode扫描速度为10、200Da/s时响应值分别不应低于1.4×107和6.8×107；M/Z933.6在Q1NegativeMode和Q3NegativeMode扫描速度为10、200Da/s时响应值分别不应低于1.0×107和4.0×107。M/Z922.0在ERPositiveMode扫描速度分别为50、250Da/s时响应值分别不低于2.0×107和3.2×107；M/Z601.9在ERNegativeMode扫描速度分别为50、250Da/s时响应值分别不低于4.8×107和1.2×107。激活其中一个PPG质谱峰的图，然后在Tools菜单中选CalibrateFromSpectrum，出现MassCalibrationOptions窗口，从Standard选择合适的标准品类型PPGsPos(正离子)或PPGsNeg(负离子)，校准的目标设备是Q1还是Q3，目标分辨率是单位分辨率Unit（半峰宽0.7±0.1amu）、还是高分辨率High（半峰宽0.5±0.1amu），正在校准的是正离子还是负离子。4.2.8手动调整分辨率，如果某些PPG峰宽超出分辨率范围，应进行手动调整。点击Resolution标签，找到Advanced按钮，出现ResolutionTable含有校正的PPG离子质量数和相应的DCOffsets值，调整Offset值改变各离子质量数的分辨率。当分辨率偏小时就减小Offset，分辨率偏大时增加Offset。改变Offset后按Apply钮，并在开始采数据时按Yes确认要保存这些修改。再采集数据（10scans）然后再校准，确定分辨率是否有改善，重复此步骤，直到所有离子合乎分辨率范围。一般情况下，都是在单位分辨率Unit（半峰宽0.7±0.1amu）下校正。4.2.9当Offset值设定合适，所有PPG离子的分辨率在范围内后，进行最后的质量校准。在MassCalibrationReport按Update（修改）钮进行更新，当出现提示时回答“Yes”。质量校正完毕。4.3针泵进样ESI源MRM定量方法手动优化4.3.1确定母离子选择你的Project，点击HardwareConfigure激活MassSpecOnly；先点T，再双击ManuelTuning。针泵开始进样，从ScanType下拉菜单中选择Q1Scan，选择需要的扫描模式（正、负离子），输入质量扫描范围及扫描时间，初看一下所需要的母离子，确定存在需要的母离子后，选用MCAon累加50，选用Acquire采集并存储扫描图谱，根据质谱图，确定母离子的M/Z值，精确到小数点后一位。4.3.2确定子离子从ScanType下拉菜单中选择ProductIonScan。输入母离子，设定扫描范围，从50amu到比母离子大10amu，设定CE碰撞能量，记录所有碎片离子分布，MCAon，Acquire采集数据并存储。4.3.3确定二级子离子（如若需要）选择响应值较高的碎片作为二级母离子，CAD选择high，MCAon，Acquire采集数据并存储。4.3.4优化MRM定量分析质谱参数从ScanType下拉菜单中选择MRM，输入找好的母离子及子离子，点击EditRamp钮，从RampParameterSettings窗口下选择DeclusteringPotential（DP），点击Start得到一个所有离子的电压曲线图。根据曲线选择分子离子峰最强的DP值，确定各离子对最佳DP。按照相同的操作优化最佳碰撞能（CE）、CXP、EP，将优化好的各参数输入各检测反应离子对。将优化好的方法命名存储。4.4液质联用定量分析方法和批文件的建立与使用4.4.1开启HPLC电源，点击HardwareConfigure激活MassSpec及HPLC配置文件；在文件菜单打开针泵连续进样优化好的MRM质谱方法，在AcquisitionMethod按鼠标右键出现AddDeviceMethod，点击增加液相泵、自动进样器、柱温箱。4.4.2点击AcquisitionMethod题头，设置同步方式确保LC与MS设备同时启动，LCSync。然后点击MassSpec中的EditParameter根据流动相的比例及流速设定CUR、Gas1、Gas2、IS及TEM。点击Autosampler自动进样器，设定液相条件，编辑完毕后将联用方法存储，则定量分析方法就建立了。4.4.3批文件建立，双击BuildAcquisitionBatch打开一个空白窗口。在MethodEditor中选择已经建立的带液相同步的质谱方法AcquisitionMethod，设定Set名称，点击Addsample，在此输入需要添加的样品数及样品存储的文件夹名称，点击OK后，platecode选择54Vialplate，分别标记样品名及样品位置VialPosition，将样品信息编好后，在Submit项下提交样品，即可点击Start开始进样。4.5定量分析方法的建立和数据分析从NavigationBar中双击QuantitationWizard，出现样品数据文件选择窗口，双击要选的数据，进入SelectedSamples，点击Next进入下一步；在SelectSettings窗口中，SettingstoUse设为Default，DefaultQuery为None，点击Next进入下一步；在SelectMethod窗口中，选中CreateNewMethod并命名，点击Next进入下一步；在SelectRepresentativeSample窗口中，选中间浓度的数据然后点击Next；在DefinePeaks窗口中，输入内标定义名称，并将Q1/Q3选出，同样将待测物命名并将离子对选出，然后点击Next；在DefineIntegration窗口中，点击Advanced确定BunchingFactor，确保积分一致，点击Next进入下一步；在最后的窗口SpecifyCalibration中，定义Fit为Linear，Weighting为1/x2，RegressionParameter基于Area。选择Finish完成定量分析方法的建立。将数据分析后命名保存。4.6关机当提交的样品测定结束后，编辑一个方法将TEM设定为0，只有Gas1/Gas2以使加热装置降温，降温6min后，在Acquire菜单下点击standby，在HardwareConfiguration菜单下点击deactive。关闭Analyst软件，关闭电脑。长期不使用质谱仪，则需要关闭质谱。持续按Vent按钮1秒，分子涡轮泵缓慢停止工作，机械泵仍将工作约15分钟。待机械泵停止工作后，关闭仪器电源开关。5.维护保养及注意事项5.1仪器正常工作时，电脑需每天重启一下，避免进样过程中出现死机现象；5.2每周需要将数据备份一次，每周需要将磁盘整理一次；鼠标点击速度不要太快，要等上次点击的功能完成后再点击；在大批量样品采集时，不能反复地处理样品以免死机。5.3死机后的处理方法5.3.1仪器操作过程中出现死机现象，一般采用Ctrl-Alt-Del，Windows任务管理结束任务，关掉Analyst软件，然后重新打开Analyst；若这样还不可行，则将电脑重新启动。5.3.2还可deactive后，再active；5.3.3关掉Analyst软件，StopService后重新打开Analyst软件；5.3.4重新启动控制仪器的电脑，重新启动HPLC，再Active；5.3.5StopService后进入Scu21.exe中，ClearGPIBBus；5.3.6StopService后进入Scu21.exe中，ResetSystemController。5.4液相每天开机后应采用10%异丙醇清洗泵头。5.5液相流动相的水相需每天更换，避免弱酸、弱碱水中生菌，延长柱子寿命。5.6每次开机后，需采用PPG进行质量校正。5.7退出软件及Standby前把仪器设定到正离子模式；注射泵不要让它推到头；CurtainGas压力为0.35Mpa，ExhaustGas压力为0.35Mpa，Gas1/Gas2压力为0.7Mpa，压力不能太低。5.8质谱离子源流路每天需要用流动相冲洗，每天需要检查气体压力及液氮量，当液氮剩余不多时，应提前打电话预订。5.9每次做完样品后用甲醇或流动相冲洗进样管，离子源腔体及CurtainPlate、Orifice需每周采用甲醇：水（50：50）及纯甲醇清洗，Skimmer及Q0必须关机时才能清洗，禁止直接向Orifice喷雾，避免使用无机盐或其它难挥发的缓冲液。5.10空气过滤网一个月取下来用压缩空气反吹一下，机械泵油至少六个月换一次，在做样比较频繁的时候机械泵油最好三个月更换一次。5.11UPS要定期放电，一般三个月一次，每次放电2h。5.12关机换油时，需将空调过滤网取下清洗，skimmer用丙酮清洗一下，完全晾干后再装上，Q0采用甲醇-水（50：50）擦洗，再用甲醇擦洗，然后用氮气吹干（一定要吹干，不然抽真空影响泵的寿命）。