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专题一基因工程1.2基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定三、将目的基因导入受体细胞（一）转化：目的基因进入_________内，并且在受体细胞内维持_____和_____的过程受体细胞稳定表达•将目的基因导入受体细胞的原理：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。自学P12-13，回答：1、将目的基因导入植物细胞常采用的方法是什么？2、农杆菌转化法的过程是怎样的？3、将目的基因导入动物细胞常用的方法、受体细胞分别是什么？4、早期基因工程都用原核细胞作为受体细胞，这是为什么？5、目的基因导入微生物细胞常用的方法是什么？4三、将目的基因导入受体细胞（二）方法将目的基因导入植物细胞将目的基因导入动物细胞将目的基因导入微生物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法——显微注射法——氯化钙法（感受态细胞）①农杆菌：植物的受伤组织会产生一些糖类和酚类物质吸引根瘤农杆菌向受伤组织集中，使植物形成肿瘤。此类物质主要在双子叶植物细胞壁中合成，通常不存在于单子叶植物中，农杆菌易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。1、将目的基因导入植物细胞(1)农杆菌转化法Ti质粒上的T-DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。②原理：③转化过程:Ti质粒目的基因构建表达载体导入植物细胞插入植物细胞染色DNA表达新性状转入农杆菌（2）基因枪法基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。（3）花粉通道法植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。2.将目的基因导入动物细胞（1）方法：显微注射法（将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中）（2）操作程序:提纯含目的基因表达载体受精卵显微注射移植到子宫新性状动物早期胚胎培养2.将目的基因导入动物细胞常用法：CaCl法（Ca2+增加细菌细胞的通透性）常用菌：大肠杆菌微生物作受体细胞原因：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少过程：Ca2+处理大肠杆菌感受态细胞表达载体与感受态细胞混合感受态细胞吸收DNA3.将目的基因导入微生物细胞细菌能够吸收DNA的状态受体生物植物动物微生物受体细胞导入方法受精卵体细胞受精卵细胞/个体农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法显微注射技术用Ca2+处理成感受态细胞小结：四、目的基因的检测与鉴定1、分子检测①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因②检测目的基因是否转录出了mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质方法——方法——方法——DNA分子杂交分子杂交抗原-抗体杂交如果显示出杂交带，就表明待测样品含有目的基因。DNA分子杂交提取3、检测目的基因是否翻译成蛋白质方法——抗原-抗体杂交苏云金杆菌Bt毒素蛋白将Bt毒蛋白注射小鼠体内从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体抗体蛋白质出现杂交带脱分化组织培养2、个体鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等若不能表达，要对抗虫基因再进行修饰。怎样检验抗虫基因在棉细胞内是否表达呢？没有抗虫基因的棉植株有抗虫基因的棉植株棉铃虫虫都没有死对照组虫正常，实验中虫被杀死抗虫基因没有表达抗虫基因表达1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定基因工程基本操作的四个步骤有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。胰岛素是治疗糖尿病的特效药，长期以来只能依靠从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。假如让你用基因工程的方法使大肠杆菌生产出人的胰岛素，想一想，如何设计？尝试设计