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实验四植物病原菌的分离培养当植物发生病害时，不一定都能在病部表面检查到病原物。而且在病部表面检查到的微生物也有可能是腐生的微生物。因此，对陌生病害病原物的确定，最好是先将病组织中的病原菌在适宜的培养基中分离培养，纯化后，再进一步测定其致病性。一实验目的通过该项实验掌握植物病原菌的分离、培养等操作方法。二实验原理使用消毒剂杀死发病组织体表的一切微生物，将发病组织内的病原物移植到适宜的培养基中培养。三实验内容分离病叶组织中的病原物实验用材料都摆放在台上，每3个同学为1组，每组6套已灭菌的培养皿，其中3套用于倒培养基平板，另6个皿分别用于装剪取的病叶组织、75%酒精、0.1%升汞液、无菌水。四实验方法1、马铃薯葡萄糖（或蔗糖）琼脂培养基配方：去皮马铃薯200g；葡萄糖20g；琼脂17—20g；水1000ml2、组织分离法四实验方法2、组织分离法（1）用剪刀在病健交界处剪取4mm×4mm大小的组织5块（2）将5块组织置于70%的酒精中浸3-6秒钟。（3）将组织块迅速移到0.1%升汞液中浸泡30－60秒。（4）将组织块移到无菌水中洗涤，除去残留的消毒剂。（5）将组织移到有培养基平板的培养皿内，每皿均匀地放5块组织。（6）分离完成后，贴上标签，注明病害名称、分离时期、分离者，然后放到25－28℃温度下培养5-7天。五注意事项分离病原菌最好是在超静工作台上进行，以减少其它微生物污染培养基。如果没有超静工作台，可以在干净的房间里，关好门窗，在台面铺一块湿毛巾，代替超静工作台的作用。倒制培养基平板和往培养基平板上移植病组织材料，都必须在酒精灯火焰边进行。所有要与培养基接触的物品都必须经过灭菌处理，以保证培养基不被其它微生物污染。铺湿毛巾熔化培养基倒培养基平版酒精灯培养基平板培养基平板培养基平板酒精灯培养基平板培养基平板培养基平板酒精灯酒精升汞无菌水无菌水培养基平板培养基平板培养基平板酒精灯酒精升汞无菌水无菌水培养基平板培养基平板培养基平板酒精灯酒精升汞无菌水无菌水培养基平板培养基平板培养基平板酒精灯酒精升汞无菌水无菌水培养基平板培养基平板培养基平板六实验报告内容1.实验材料2.实验方法与步骤3.实验结果：描述分离物菌落特征，绘分离物菌体形态，将分离物鉴定到属4.实验中的体会实验五植物病原真菌孢子的计数与人工接种一实验目的在进行病原菌的致病性测定、寄主范围测定、以及品种抗病性测定、药剂防治试验时都会要进行人工接种。掌握真菌孢子悬浮液的配制和病原菌的人工接种方法。二实验方法1、孢子悬浮液的配制往已经培养好的病菌培养皿中倒入少量水，用毛笔将菌落上产生的孢子轻轻刷下，配制成孢子悬浮液母液；滴1滴孢子悬浮液母液于载玻片上，加盖玻片后在低倍镜下检查孢子数；然后加水将孢子悬浮液母液适当稀释，配制成在10倍镜下每个视野中的孢子数目为10个左右和30个左右2种浓度。二实验方法1、孢子悬浮液的配制2、喷雾接种（用3片叶片或3盆植物）将配好的孢子悬浮液用喷雾器均匀地喷在植物叶片上，先喷请水对照处理，后喷孢子悬浮液接种处理。置于培养箱中保湿24小时。二实验方法1、孢子悬浮液的配制2、喷雾接种3、针刺接种（用2片叶片）在一片叶片上确定好6个接种部位，针刺接种用灭菌的梅花针在6个接种部位各刺1个伤口。无伤口接种在6个接种部位不要刺伤叶片。该实验直接用菌苔片接种，用直径为5mm的打孔器打取病菌菌苔片，用镊子夹取菌苔片贴在接种部位。用无病菌生长的培养基片接种作为对照，将脱脂棉在无菌水中浸湿盖在接种菌片上保湿。将接种后的叶片写好标签后整齐地摆放在筛中，盖湿毛巾保湿，然后放在25℃温度条件下培养。注意事项：先做对照处理，后做接种处理，避免把病菌带到对照处理上。二实验方法1、孢子悬浮液的配制2、喷雾接种3、针刺伤口接种（用2片叶片):(1)用灭菌的梅花针在接种植物上刺6个伤口（其中3个伤口作为对照不接种病菌，另3个伤口作为接种病菌的处理）。(2)将大小为5mm×5mm的空白培养基块放在作为对照的伤口处。并将脱脂棉在无菌水中浸湿盖在上培养基块上保湿。(3)将大小为5mm×5mm的菌苔块贴在作为接种病菌处理的伤口处。并将脱脂棉在无菌水中浸湿盖在培养基块上。室温条件下培养。(4)将接种后的叶片写好标签后整齐地摆放在筛中，盖湿毛巾保湿，然后放在25℃温度条件下培养。注意事项：先做对照处理，后做接种处理，避免把病菌带到对照处理上。2、针刺伤口接种：（1）、用灭菌的梅花针在接种植物上刺6个伤口（其中3个伤口作为对照不接种病菌，另3个伤口作为接种病菌的处理）。（2）、将大小为5mm×5mm的空白培养基块放在作为对照的伤口处。并将脱脂棉在无菌水中浸湿盖在上培养基块上（保湿）。（3）、将大小为5mm×5mm的菌苔块贴在作为接种病菌处理的伤口处。并将脱脂棉在无菌水中浸湿盖在培养基块上（保湿）。室温条件下培养。刺伤接种无伤接种三实验结果调查接种7天后仔细观察病害症状表现，调查记录接种植物的发病情况，计算发病率。表1人工喷雾接种某菌后的发病率处理接种叶片数发病叶片数发病率（%）低浓度接种高浓度接种CK发病率＝发病叶片数×100﹪接种叶片数表2人工针刺接种某菌后的发病率处理接种点数发病点数发病率（%）刺伤接种刺伤接种CK无伤接种发病率＝发病点数×100﹪接种点数无伤接种CK四实验报告内容1.实验材料2.实验方法与步骤3.实验结果：观察和描述人工接种处理是否发病，病害症状表现，与自然发生的病害症状相比较，是否一致。调查和计算发病率。4.实验中的体会