细胞蜡块

穿刺涂片、TCT结合细胞蜡块在病理诊断中的应用淮安市第一人民医院病理科刘海燕•细胞病理学是一种常用的病理学检查方法，与组织病理学检查相比，传统细针吸取方法（fineneedleaspiration,FNA）FNA涂片有着不可忽视的缺陷：样本量少，并且很难还原组织学结构，不可重复切片，以及较难进行特殊染色等，这些缺陷直接影响了病理医生的诊断准确性。•细胞学在很多的情况下，仅仅作为筛查或只能给出倾向性的诊断结果。尤其在针吸细胞学是唯一诊断手段的情况下，这些缺陷给患者的诊断及后续治疗带来了相当大的困难，如胸、腹水的细胞学定性，转移癌与间皮瘤的鉴别等。•我科采用北京首都医科大学附属北京友谊医院病理科余小蒙医师创立的“酒精凝固-甲醛固定法”细胞蜡块技术（及改进技术）制作FNA细胞蜡块，其具有操作方便、快捷、微创，可重复切片用于免疫组化及特殊染色，很好地弥补了传统FNA检查中的不足，能够方便患者，快捷并更准确地做出诊断，满足临床诊断需求。细针穿刺细胞标本的采集通过穿刺吸取或非吸取法，可从充满液体的器官或实体性器官中采集细胞标本，如肿瘤、心包膜腔积液、胸膜腔积液、腹膜腔积液和脑脊液等。影像学技术能对小而深、移动且难以触摸的病变部位进行定位，有助于穿刺采集标本。涂片制备直接涂片是将新鲜标本直接涂在载玻片上。间接涂片是将各种液体标本进行浓缩处理后再涂片。涂片制备方法见图8-1，图8-2。渗出液、灌洗液和尿液等标本不易黏附在载玻片上，宜采用蛋白类（如牛血清清蛋白）或离子类（如多聚赖氨酸）黏附剂，增强细胞和载玻片之间的黏附力，最大限度的保存标本中的细胞。三、标本固定1．湿固定是通过使细胞的胞质脱水、蛋白质凝固而达到固定的目的。常用的固定液为乙醇类液体，常用方法有浸润法和包被法。湿固定可引起细胞皱缩，Carnoy固定液（乙醇-氯仿-冰乙酸固定液）能溶解红细胞，适用于处理明显血性的标本。聚乙二醇固定液能在涂片表面形成一层保护性蜡质膜，适用于标本的长途转运和大规模人群筛检。2．空气干燥固定是通过空气蒸发的方法达到固定目的。最好是逆着气流方向尽快将涂片干燥。与湿固定相比，空气干燥固定有使细胞增大的趋势（图8-3）。图8-3标本固定方法比较（A.呈圆形未固定的细胞，B.平铺在载玻片上，C.湿固定，D.空气干燥固定）四、标本浓缩技术（一）传统技术1．离心法和细胞离心法①离心法：适用于大量液体的标本。②细胞离心法：适用于少量液体、中等量细胞的标本。2．滤膜过滤法滤膜过滤法适用于大量液体、少量细胞的标本。3．细胞块法适用于大多数悬液标本。制备方法有血浆凝血酶法和琼脂法等。（二）液基细胞学技术液基细胞学（LBC）技术是一种半自动或全自动标本处理技术，其优点是：①涂片上细胞分布均匀、分布范围小、背景清晰。②筛检简便、快速。③能提高诊断的灵敏度和特异度。④能显著降低标本的不满意率。⑤可用于原位杂交和免疫细胞化学染色。LBC技术是对传统技术的有效补充，但对某些非妇科标本，因LBC涂片缺乏背景成分，会影响细胞学的诊断。目前，常用的LBC技术有ThinPrep法和SurePathPrep法。LBC技术与传统技术比较见表8-3。五、染色方法Papanicolaou染色法适用于湿固定的涂片。Romanowsky染色法适用于空气干燥固定的涂片，在非妇科标本染色中常用。苏木素和伊红染色法是组织切片最常用的染色方法，也是许多细胞病理学实验室常用的染色方法。不同染色技术均适用于妇科或非妇科标本的永久性染色。六、细胞病理学诊断细胞病理学诊断是一个复杂的过程，但不能过分强调最终结论的重要性。因为细胞学检查的影响因素很多（表8-4），当涂片上有大量保存良好的细胞时，会提高诊断的准确性，而缺乏背景资料、涂片不佳、染色模糊等则会导致误诊。（一）细胞形态学判断的基本原则1．细胞数量和类型细胞数量和类型提供了靶组织或器官的重要信息，足够量的标本是提高结果可靠性的重要因素。2．结构特征在细胞学涂片中常常缺乏结构特征。正常上皮细胞常保持细胞极性和细胞间黏附性典型的恶性上皮细胞的极性差，细胞间相互重叠，有时三维状聚集呈圆形。分化差的癌细胞黏附性更差，多散在分布。3．细胞核特征细胞核特征是判断良性与恶性细胞的关键。正常细胞核体积相对较小，呈圆形或卵圆形，边界光滑，染色质呈细颗粒状。涂片上同一类型细胞之间的差别很小，称为单形性。细胞核变化与特征见表8-5。4．细胞质特征细胞质由Golgi体、核糖体、内质网、线粒体和代谢物等组成，是影响细胞染色性的重要因素之一。正常细胞或分化好的肿瘤细胞常见黏液球、泡沫状微空泡、微绒毛刷状缘和纤毛。邻近细胞会出现细胞质铸模现象。少数细胞有吞噬现象，见于良性或恶性疾病，后者更常见。细胞质变性包括水肿性和空泡样变化等，质膜完整性丧失使细胞内容物溢出，即细胞溶解。•胸腹水病理细胞学制作蜡块技术就是将送检的胸腹水，通过病理技术流程的处理，制作成细胞学常规蜡块，将其细胞成分保存在蜡块中，从而切片进行常规显微镜下诊断，判别细胞的性质、类型，达到较为精确的肿瘤细胞的诊断。•临床意义:•1、增加了细胞涂片的数量、密度，并对细胞做了很好保存，既能重复多切片，又能辅助肿瘤免疫组化检测，提高了胸腹水中肿瘤诊断的阳性率。•2、查到肿瘤细胞时，对细胞类型能够做很好的分型，为肿瘤规范治疗提供更多参考依据。•3、此项技术较以前脱落细胞学普通涂片准确性更高，保存更方便，对疾病的诊断更加明确。•制作的方法：•1.接到胸腹水后，将其静止沉淀1小时，然后吸取底部液体置入塑料离心管中;•2.加入10%福尔马林液5ml，离心3500/5min，倾去上清液;•3.加入10%福尔马林液5ml，离心;•4.重复1次并静置，等待取材;•5.取材时用滤纸包裹即可，并通过脱水—浸蜡—包埋—切片—显微镜下诊断—报告发出等过程，对胸腹水做出疾病诊断；•注意事项：•1、送检胸腹水时，容器干净，量尽量多，且新鲜。•2、病理开单检查时，采用病理常规申请单，并认真填写相关病史。•总之，这项技术对胸腹水肿瘤细胞学诊断起到很好效果，得到了临床及患者的认可，目前，科室已经能够开展此项技术，希望能为临床及患者，提供更好的服务。