第三节 动物传染病的诊断与鉴别技术

动物传染病的诊断与鉴别技术刘金华21、动物传染病的特征与非传染病的鉴别2、动物传染病的临床诊断3、传染病的实验室诊断4、常见家禽疫病的鉴别诊断5、常见猪病的鉴别诊断主要内容31、传染病特征与非传染病的鉴别4传染病的概念•由特定病原微生物引起的，有一定潜伏期和临床表现并具有传染性的疾病。•动物传染病不仅对养殖业危害严重，而且给公共卫生安全带来威胁。5传染病的特征•传染病是由病原微生物引起的。•传染病具有传染性和流行性。•被感染动物有一定的临床表现和病理变化。•感染动物机体可出现特异性的免疫学反应。•传染病的发生具有明显的阶段性和流行规律。6疾病传染病非传染病中毒病营养代谢病7中毒病•毒物：生物的：植物毒如生物碱、毒蛋白；植物的加工制品、酒精、棉子饼等；真菌素毒、主要是发霉饲料；动物毒如蛇毒、蜂毒。化学的：化学杀虫剂、农药、鼠药；化学元素：氟、铅等；亚硝酸盐；医药物如抗生素、驱虫剂、呋喃类。物理的：有毒气体如CO、NH3。8中毒病发病特点•突然有大批畜禽同时或相继发生相同的疾病、饲喂相同饲料均可发生，开始的病畜多为身体健壮、抢食的个体。•无传染性，无流行性，体温不高或有时稍高。•停喂或改换饲料可停息或不再发展。•某些中毒病呈有一定的区域性、季节或时间性，这是和引起中毒的原因，条件有关。如吃有毒植物，则依牧地植被、有毒植物分布地区为转移；饲料中毒常决定于地区的饲料来源、组成、调制方法和饲喂习惯等。•中毒疾病用抗菌素治疗无效，但可防止继发感染。9营养代谢病•糖、脂和蛋白质代谢障碍。•矿物质和水、盐代谢紊乱。•维生素缺乏症。•微量元素缺乏症和过多症。10营养代谢病的特点•无传染性，致病性不高。•一般发病慢，从缺某物质后几周或几个月突然发病。症状出现以后，有多个动物发病或死亡，具有群发病的性质，很易于传染病混淆。•发病率高，病势凶猛，具有地方性如碘、铜的缺乏，幼畜或高产的或生长快的动物表现最为明显。•一般早期诊断困难。•造成经济损失大，出现症状以后，治疗费用大，治疗缓慢。11排除非传染病的方法1、过细地调查、了解和搜集有关的病史，发病经过，可能的致病因子等资料。2、仔细检查饲料的质量、饲料管理的方法、饲料环境条件、地区植被中有无中毒的植物以及采食情况等。3、全面地进行系统的临床检查。4、死亡动物的尸体解剖组织病理学诊断。5、实验室检查：（1）血、尿、粪常规的检查，血液生化的检查。（2）毒物检查与中毒病的复制。（3）饲料组成与饲料配合比例，维生素、微量元素、矿物质等的检查。6、将各方面的材料综合分析、去粗取精，去伪存真，以排除非传染性的治病因子。122、动物传染病临床诊断13发病流行情况调查与分析寻找区分传染性和非传染性疾病的线索区别细菌性疾病和病毒性疾病：发病动物的用药史和用药时间动物群接种疫苗的种类及接种时间动物品种、数量，感染动物数量、年龄和性别首发病例和续发病例的日期分析可疑疾病的范围及流行情况调查传染病的传染来源探讨疫病传播的途径和方式了解防疫措施实施前后疫病发展动态14临床症状诊断•患病动物通常表现出一系列的临床，利用感官或借助一些简单的诊疗器械如体温计、听诊器等，直接检查和记录患病动物的异常表现。•具有特征临诊症状如破伤风、猪气喘病易作出诊断。15临床症状诊断的局限性非典型病例和混合感染病例，一般只能进行推测性的诊断。处于发病初期病例、慢性感染和隐性感染动物很难得出诊断结论。16病理解剖学诊断•多数患病动物会表现出特有的病理剖检变化，这是传染病的重要特征之一，也是重要的诊断依据。•通过鉴别病理变化可以证实临床检查的结果，同时可根据某些特征性病理变化直接得出快速的诊断。典型猪瘟17病理解剖学诊断局限性•有些病理变化不具有特征性，病理解剖学诊断只能作为缩小可疑疾病范围的手段，难以得出确切诊断。•发病早期患病动物或非典型化发病动物往往没有典型病理变化形成。183、实验室诊断19实验室诊断•动物传染病确诊的主要手段•发现传染源最重要的方法•确定各种传播因素的作用•确定动物群易感性的重要方法（血清学）•流行病学监测的重要方法20样品采集•传染病的实验室诊断必须从动物群或其周围环境中采集样品，而疫病的种类和类型不同，采集的样品及其方法有很大差异，因此，采样时应了解其方法和注意事项。•活体动物采样应避免对动物产生不必要的损伤，采样过程中的应注意做好生物安全防护措施。21血样采集•血样可用于培养或直接检查细菌、病毒或原虫，也可用于抗体检测。•血样分为抗凝血样、不抗凝血样和血浆。22血样采集•采血应尽可能做到无菌，大型哺乳动物（牛、羊）可尾静脉或颈静脉采血；猪一般前腔静脉采血；禽类通常选择翅静脉采血；小型动物可耳静脉或心脏采血。•抗凝血样采完后立即振荡混匀；制作血清样品应室温静置1-2h，1000r/min离心10min，吸出血清。23粪便样品采集•应选新鲜粪便。•可采集直肠或泄殖腔粘膜拭子，刮取黏膜表面时应小心，拭子应置于适当的培养基中运送。例如：用于流感病毒分离的泄殖腔棉拭子保存运输培养基：MEM培养基加入抗生素使其终浓度分别为，青霉素（2×107IU/L），链霉素（1×107IU/L），庆大霉素（100mg/L）、制霉菌素（100mg/L），多粘霉素B（100mg/L），磺胺（1000mg/L）。24皮肤样品采集•有水泡病变的疾病，直接在病变部位采样，水泡液应取自未破裂的水泡；检查体表寄生虫或真菌应以解剖刀刮取深层皮屑；当怀疑有马立克氏病时，采集禽类新鲜的羽毛根部（成熟型MDV存在于羽毛囊上皮）。25鼻液样品采集•可用棉拭子采取，有时拭子需要先用样品保存液润湿一下，以减少拭子对动物呼吸道损伤。•拭子与分泌物充分接触，置于合适的样品保存液，4℃送实验室。26乳液采集•清洗和擦干乳头后采样，弃去头把奶液，采集以后的奶液。•用做血清学试验的奶不要冻存、加热、或强力震动。27尸检样品采集•采样人员应具备尸检技术和病理学知识，以便选择最适器官和最有价值的病灶进行采样。•采样前要备足盛样品容器、标签、记录纸。•如果检查人畜共患病，尸检应在生物安全室进行，做好个人防护措施。28尸检样品采集•供微生物学检查的样品采集后应冷藏运输，如果样品24h内能送达实验室，可以在保温瓶中运送，如果48h内不能运送样品，应冷冻保存。但长时间-20℃冻存对病毒分离不利。•供组织病理学检查的组织块厚度不能超过0.5cm，置于至少10倍于组织样品体积的10%福尔马林缓冲液。29样品标记•送检样品应将样品信息和病史资料一起送达实验室。这些信息包括：畜主姓名和通讯地址样品种类、要求检测项目以及运输用的培养基动物品种、数量，感染动物数量、年龄和性别首发病例和续发病例的日期临床症状和病理剖检记录发病动物的用药史和用药时间动物群接种疫苗的种类及接种时间送检样品的清单和运送说明等30样品包装和运输•确保样本包装安全，到达实验室时状况完好，运输途中无渗漏或交叉污染。•样品应以最快的方式交送实验室，如不能在48h内送达实验室，样品应低温保存运送，所用的容器需要垫上足够的缓冲材料，防止样品的包装容器损坏。31样品长期保存•样品库：可以保存组织样品、血清样品、菌毒种等。其中贮存血清样品可能最有意义，可以利用保存的血清样品进行回顾性调查，比较现在和过去的疫情。•血清库：是保存血清样品的场所，每份血清样品要充分说明并编号，采取适当的保存方法减少血清免疫学和其他生化特性的丧失。32实验室诊断的常用方法•实验室诊断经常使用的方法：病原学诊断：细菌学、病毒学、免疫学分子生物学诊断免疫学诊断病理组织学诊断。33细菌学技术34细菌学技术---形态学检查•选择具有明显病变的组织、器官或血液、组织液涂片、染色镜检。观察革兰氏染色。•一些具有特殊形态的病原微生物如炭疽杆菌、巴氏杆菌等引起的疾病可作出迅速诊断。•特殊结构：荚膜、鞭毛、芽孢、运动力炭疽杆菌芽孢肺炎链球菌荚膜35细菌的分离鉴定•通过适宜的人工培养基或培养技术，将细菌、支原体、真菌等病原体从病料中分离出来，可根据不同的形态特征、培养特性、生化特性等作出鉴定。支原体形成的“煎蛋样”菌落大肠杆菌菌落（麦康凯琼脂）金黄色葡萄球菌溶血现象36细菌学技术---分离培养•培养基的选择•培养条件（需氧、厌氧、CO2）、培养温度•病料污染时支原体形成的“煎蛋样”菌落大肠杆菌菌落（麦康凯琼脂）37细菌学技术---纯菌培养特性和生化检查•每天观察有无细菌生长；若有，观察生长特性•革兰氏染色，纯培养•结合流行病学、临诊资料等，可对病料中病原菌作出初步判断，在结合必要的生化鉴定、动物接种或血清学检查即能确诊。支原体形成的“煎蛋样”菌落大肠杆菌菌落（麦康凯琼脂）38细菌学技术---实验动物接种•实验动物不仅可作为纯培养物的致病性鉴定，而且可用于污染病料的病原菌分离。接种动物死亡后必须做涂片镜检和分离培养以及病变观察。用于细菌性材料接种时，不要加入抗生素或其他抑菌剂。实验动物是生命科学研究的重要组成部分39细菌学技术---血清学技术•有些病原菌的鉴定还须作血清学分群或分型检查，如沙门氏菌、致病性大肠杆菌等，有些可通过血清学实验来鉴定分离菌的性质或测定样品中的抗体以诊断疾病。40病毒学技术41病料的处理•脏器组织：尽可能无菌采取；充分剪碎置乳钵中充分研磨，并逐步加入稀释液磨匀，最后制成10%-20%的组织乳悬液。常用的稀释液有：0.5%水解乳蛋白Hanks液或Hanks液，内含200单位（微克）/毫升的青、链霉素。如有可能，也可按上述方法反复冻融几次，使细胞内的病毒充分释出。再以2000转/分,。离心10-20分钟后，吸取上清液，做接种用。42病料的处理•鼻咽拭子或直肠拭子：将棉拭子置于含有2—5毫升PH中性的Hanks平衡盐溶液的小瓶中，并加入蛋白稳定剂，如0.5%明胶或牛血清白蛋白，以及200-500单位或微克/毫升的青、链霉素。充分挤压、刷洗棉拭子，以2000转/分，离心10-20分钟，吸取上清液，做接种用。常见动物病毒的鸡胚接种病毒接种途径增值指示检测方法流感病毒新城疫病毒痘苗病毒乙型脑炎病毒牛痘病毒狂犬病病毒口蹄疫病毒东部型马脑脊髓炎病毒淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒劳斯肉瘤病毒传染性支气管炎病毒尿囊腔绒毛尿囊膜尿囊腔卵黄囊绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜卵黄囊绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜羊膜腔鸡胚静脉羊膜腔尿囊腔绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜尿囊腔绒毛尿囊膜鸡胚死或不死，病变鸡胚死亡痘斑与鸡胚死亡鸡胚死亡痘斑鸡胚死亡可能死亡鸡胚死亡鸡胚死亡鸡胚死亡痘斑盲传有致死或矮小血凝和血疑抑制血凝和血疑抑制中和试验等中和试验等中和试验等血凝、中和、免疫荧光补体结合试验、中和试验中和试验等中和试验琼扩、中和接种易感雏鸡44常见动物病毒的鸡胚接种病毒接种途径增值指示检测方法传染性喉气管炎病毒禽脑炎髓炎病毒传染性法氏囊炎病毒病毒性关节炎病毒马立克氏病病毒禽痘病毒鸭瘟病毒鸭病毒性肝炎病毒伪狂犬病病毒绒毛尿囊膜卵黄囊绒毛尿囊膜卵黄囊尿囊腔卵黄囊尿囊腔绒毛尿囊膜卵黄囊鸡胚静脉绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜鸡胚或鸭胚绒毛尿囊膜鸭胚或鸡胚尿囊腔绒毛尿囊膜痘斑鸡胚病变鸡胚死亡鸡胚病变死亡痘斑痘斑死亡痘斑等病变死亡病变痘斑死亡琼扩、中和、免疫荧光中和试验、免疫荧光中和试验琼扩、中和试验琼扩中和试验免疫荧光琼扩中和试验中和试验中和试验中和试验免疫荧光45动物病毒培养中常用的传代细胞细胞名称来源形态培养的病毒HelaBHK-21L-MVeroMK成人宫颈癌新生仓鼠肾小鼠结缔组织绿猴肾猴肾上皮细胞成纤维细胞成纤维细胞成纤维细胞上皮细胞可用于人和动物的多数病毒培养、如痘病病毒、脑炎病毒、鸡新城疫病毒等疱疹病毒、呼肠孤病毒、流感病毒。鸡新城疫病毒等用于小鼠某些病毒分离，但主要用作营养研究疱疹病毒、SV40,乙型脑炎，鸡新城疫病毒，淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒牛痘病毒、仙台病毒、流感病毒、伪狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒等，感染谱很广46动物病毒培养中常用的传代细胞细胞名称来源形态培养的病毒EBTrMDBKE.DermF81PK15CPK牛胚胎气管牛胚胎肾马真皮猫肾猪肾克隆化猪肾成纤维细胞上皮细胞成纤