Lynch综合征的免疫组化筛查

中山大学附属肿瘤医院病理科Lynch综合征常染色体显性遗传病致病基因位于常染色体上，且单个等位基因突变即可致病错配修复基因（MLH1，MSH2，MSH6，PMS2，EPCAM）发生胚系突变免疫组化检测显示MMR蛋白缺失占全部CRC的3-5%常规分子筛查方法的选择90%的LS肿瘤表现为MSI-H或dMMR10-15%的散发性CRC表现为MSI-H或dMMR由于MLH1基因启动子的异常甲基化单纯分子筛查不能确诊LSIHC：正常情况下MMR蛋白均正常表达任意一蛋白表达缺失→相关基因的突变检测MLH1缺失→排除MLH1启动子区高度甲基化MSI：MSI-H指5个微卫星标志物中存在≥2个的改变IHC/MSI假阴性率均约5%-10%常规分子筛查方法IHC或MSI均可IHC成本效益更优Lynch综合征的IHC特征为何多数情况下MLH1和PMS2，MSH2和MSH6是成对缺失？–MLH1和PMS2构成异二聚体，dPMS2通常由于MLH1突变所致单纯PMS2或MSH6缺失–除了PMS2之外，MLH1蛋白还有其他形成二聚体的成员，因此，PMS2基因胚系突变不一定导致MLH1表达缺失。MLH1&PMS2表达缺失大概占15%80%是由于MLH1过度甲基化所致其中20%可能是LSBRAF突变检测MLH1MSH2MSH6PMS2MSH2&MSH6表达缺失大概约占3%大部分是由于MSH2和MSH6基因突变经常是LS患者MLH1PMS2MSH6MSH2IHC结果解读:MLH1和PMS2IHC结果解读:MSH2和MSH6IHC结果解读Lynch综合征的CRC形态学特征MSI-H结直肠癌组织学特征组织学低分化肿瘤异质性大形态上呈现髓样分化低分化结直肠腺癌亚型肿瘤细胞片状分布–核空泡状、核仁明显淋巴细胞浸润肿瘤细胞绝大部分CRC髓样亚型呈现MSI-H,且预后比其他低分化癌好重视Lynch-like形态特征分子筛查需要注意的问题分子筛查策略适用于CRC和子宫内膜癌•其他LS肿瘤分子筛查有效性的数据十分有限BRAF突变排除MLH1的过度甲基化对于CRC以外的肿瘤并不适用直肠癌组织中MSH6缺失可能是治疗后改变IHC异常和/或MSI-H但相关基因检测未发现胚系突变者仍有可能是Lynch综合征患者体细胞MMR基因检测来评估体细胞突变有助于解释Lynch-like综合征免疫组化筛查相关问题免疫组化检测技术标准化（自动vs手动）•标本及时标准固定、避免修复过度IHC检测蜡块的选择（有正常对照）重视lynch-like形态学特征免疫组化结果判读（阴性与阳性）对于IHC检测结果不理想（重复或分子检测）免疫组化需重新检测各种情况假阴性-阳性对照不表达阳性对照及肿瘤细胞表达太弱肿瘤细胞表达异质大假阳性-肿瘤细胞阳性、正常细胞阴性肿瘤细胞定位不准阳性细胞定位不清晰非特异性强染色免疫组化需重新检测各种情况肿瘤标本固定不及时标本固定不够充分MMR蛋白抗体不特异免疫组化检测前后不符的原因分析抗原修复过度抗体孵育时间过长DAB染色时间过长