实验五 白细胞分类计数

实验五白细胞分类计数一、实验目的掌握显微镜外周血白细胞分类计数（DLC）的方法；掌握外周血各类白细胞的正常形态。二、实验原理将血液制成细胞分布均匀的血涂片，用瑞氏染液染色，根据各类细胞的形态特点和颜色差异将白细胞区别并进行计数。通常计数100个白细胞，计算得出各种白细胞所占的百分率。三、实验器材与试剂器材：显微镜，香柏油，擦镜纸，清洁液试剂：Wright染液。四、实验标本：制备良好的血涂片五、操作步骤1.制备血涂片：按照正确的操作方法制备血涂片2.染色：用Wright染液对血涂片染色，冲洗干净，自然干燥后备用。3.低倍镜观察：低倍镜下观察全片，包括白细胞飞分布和染色情况。4.油镜观察：选择血涂片体尾交界处细胞分布均匀、着色良好的区域，滴加1滴香柏油，按一定的方向顺序对所见到的每个白细胞进行分类，并用白细胞分类计数器做好记录，共计数100个白细胞。5.计算：求出各类白细胞所占的百分率。6.报告方式：百分率（%）。六、参考区间WBC百分率（%）绝对值（×109/L）中性杆Nst1~50.04~0.50中性分Nsg50~702.00~7.00嗜酸性E0.5~50.05~0.50嗜碱性B0~10~0.10淋巴L20~400.80~4.00单核M3~80.12~0.80七、注意事项1.计数区域：以体尾交界处最佳。2.分类方法：遵循一定的方向，以“城垛式”连续进行，避免主观选择视野；结果的记录可采用计数器、手工画“正”字或“+++++”。3.计数的白细胞数：白细胞总数在（3.0~15.0）×109/L之间者，分类计数100个白细胞；总数在15.0×109/L以上时，计数200个；总数低于3.0×109/L时，应选用两张血涂片计数50~100个白细胞。4.计数结果：用各类白细胞的百分率乘以白细胞总数，即可求得每升血液中各类白细胞数量的绝对值。5.血涂片中有有核红细胞时，应逐个计数，但不计入100个白细胞内，以分类100个白细胞过程中见到的有核红细胞个数来报告，并注明其所属阶段。6.分类中还应注意观察成熟红细胞、血小板的形态、染色及其分布情况，注意有无寄生虫（如疟原虫）及其他异常所见。外周血各类白细胞的正常形态白细胞粒细胞淋巴细胞单核细胞一、白细胞的组成中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞——白细胞是机体抵抗病原微生物等异物入侵的主要防线全能干细胞髓系干细胞淋巴系干细胞粒-单核系祖细胞T淋巴系祖细胞B淋巴系祖细胞原粒细胞T原淋巴细胞B原淋巴细胞分叶核粒细胞单核细胞T淋巴细胞B淋巴细胞浆细胞GM-CSFT幼淋巴细胞B幼淋巴细胞早幼粒细胞中幼粒细胞晚幼粒细胞杆状核粒细胞幼单核细胞原单核细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞中性粒细胞（Neutrophil，N）具有趋化、变形、黏附、吞噬、杀菌作用，防御和抵抗病原菌侵袭二、白细胞的功能淋巴细胞（Lymphocyte，L）B细胞浆细胞生成Ab体液免疫T细胞免疫活性物质细胞免疫单核细胞（Monocyte，M）吞噬，杀灭病原体清除损伤或已死亡的细胞处理抗原嗜碱性粒细胞（Basophil，B）通过释放嗜碱性颗粒（组胺、肝素、慢反应物质等）参与超敏反应嗜酸性粒细胞（Eosinophil，E）抑制嗜碱性粒细胞和肥大细胞合成和释放活性物质，吞噬其释出颗粒，破坏组胺，限制过敏反应参与对寄生虫的免疫反应1.中性粒细胞(N)直径10-15um胞质：粉红色，含较多细小均匀的紫红色中性颗粒。胞核：染色不均三、白细胞正常形态按胞核的形态分为：N杆状核（Nst）N分叶核（Nsg）核径最窄处大于最宽处1/3为杆状核，核型多样，可呈C形、S形、V形或不规则形。核径最窄处小于最宽处1/3为分叶核，细胞分2~5叶，甚至5叶以上。中性粒细胞杆状核分叶核2.嗜酸性粒细胞（E）形态：略大于中性粒细胞胞浆：胞浆内充满粗大、整齐、均匀、排列紧密、有立体感的桔红色嗜酸性颗粒胞核：长呈分叶状，二叶居多，呈眼镜状，偶见3~4叶,染色质粗，染深紫红色。嗜酸性粒细胞（血涂片）3.嗜碱性粒细胞（B）胞体呈圆形，略小于中性粒细胞胞浆：含粗大但大小不一、分布不均匀的紫黑色嗜碱性颗粒，颗粒常覆盖于核上，致使核的轮廓与结构模糊不清胞核：核分叶不明显，形态不规则。嗜碱性粒细胞（血涂片）颗粒特点大小不一分布不均嗜碱性强4.淋巴细胞（L）形态：直径6-15um，分为大L和小L。胞核：圆形或肾形，深紫红色。染色质粗糙，排列均匀，大淋巴细胞核常偏于一侧。胞浆：小淋巴极少,浆内无颗粒，常呈裸核。大淋巴胞浆丰富，呈透明蓝色，常有少量粗大、大小不均的紫红色嗜天青颗粒。淋巴细胞（血涂片）5.单核细胞（M）形态：为外周血中最大的细胞，直径15-25um胞体呈圆形或不规则形。胞浆：丰富，染淡蓝色或灰蓝色，呈毛玻璃样半透明。胞浆内含大量细小、弥散分布的灰尘样淡紫红色嗜天青颗粒，可见空泡。胞核：细胞核大，呈不规则圆形、肾形、马蹄形或不规则分叶，有时折叠扭曲。染色质细致、疏松如网状，染为淡紫红色。五类白细胞外周血正常白细胞形态特征细胞直径（μm）形态胞质细胞核形染色质中性杆状核10～15圆形粉红色。颗粒量多、细小、均匀、紫红色弯曲呈杆状、带状、蜡肠样粗糙，深紫红色中性分叶核10～15圆形粉红色。颗粒量多、细小、均匀、紫红色分2～5叶。杆状5～8%，2叶30～35%，3叶40～50%，4叶15～20%，5叶0.5%，6叶0%粗糙，深紫红色嗜酸性粒细胞13～15圆形着色不清。颗粒橘黄、粗大、整齐排列、均匀充满胞质多分2叶，眼镜形粗糙，深紫红色嗜碱性粒细胞10～12圆形着色不清。颗粒紫黑色、量少、大小不均、排列杂乱、可盖于核上核形因颗粒遮盖而不清晰粗糙，深紫红色淋巴细胞6～15圆形或椭圆形透明、淡蓝色、多无颗粒，大淋巴细胞可有少量粗大、不均匀紫红色颗粒圆形、椭圆形、肾形深紫红色，粗糙成块，核外缘光滑单核细胞12～20圆形、椭圆形或不规则形半透明、灰蓝色或灰红色。颗粒细小、尘土样紫红色肾形、山字形、马蹄形、扭曲折叠不规则形疏松网状，淡紫红色，有膨胀和立体起伏感四、一些异常结构及细胞的认识1.核左移外周血中杆状核粒细胞增多或出现晚幼粒、中幼粒、早幼粒细胞2.核右移：主要见于营养性巨幼细胞性贫血、恶性贫血等3.毒性变化大小不均：病程长的化脓性炎症中毒颗粒：化脓菌感染及大面积烧伤空泡：败血症Dohle小体（蓝斑）：是核和胞质发育不平衡表现退行性变：核固缩、核肿胀、核溶解中性粒细胞大小不均大小不均中性粒细胞中毒颗粒中毒颗粒：粗大、大小不等、分布不均匀的紫黑色或深紫红色颗粒。中性粒细胞退行性变退行性变中性粒细胞空泡性变：中性粒细胞胞质内出现一个或数个空泡空泡杜勒小体：中性粒细胞胞质毒性变化保留的局部嗜碱性区域，呈圆形、梨形、云雾状，天蓝色或灰蓝色杜勒体异形淋巴细胞Ⅰ型（空泡型）Ⅱ型（单核细胞型）Ⅲ型（幼稚细胞型）