食品卫生微生物学检验-5

大肠菌群检验程序检样↓稀释↓乳糖胆盐发酵管,36℃±1℃，24h±2h↓↓不产气产气↓↓大肠菌群阴性伊红美蓝琼脂平板,36℃±1℃，24h±2h↓↓↓报告革兰染色乳糖发酵管,36℃±1℃，24h±2h↓↓↓↓革兰阳性革兰阴性无芽胞杆菌产气不产气↓↓↓↓大肠菌群阴性大肠菌群阳性大肠菌群阴性↓↓↓报告报告报告MPN检索表MPN为最可能数量(MostProbableNumber)的简称。这种方法，对样品进行连续系列稀释，加入培养基中进行培养，从规定的反应呈阳性的管数的出现率，用概率论来推算样品中细菌数最近似的数值。选择检验稀释度时,在这10倍稀释度系列管中，应该至少使最高稀释度有一管为阴性，以获得最近似的数值。该表为10倍稀释,只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。假如原来接种1ml×3，0.1ml×3，0.01ml×3和0.001ml×3,得出结果的阳性管数为3-3-2-1。这些结果只有3个数可查MPN值,应选取其中所有管都阳性的最小样品量(此处为0.1ml)及其后的2个较高稀释度,即选择3-2-1,代表样品容量是0.1,0.01及0.001ml,从表查知MPN值应为1500，乘以稀释倍数10,即15000。P17检索表第一列，阳性管数1ml×3管中的1ml，是指实验操作时，10ml乳糖胆盐发酵管加入原液（样品）1ml。如果检样3个稀释度为十倍、百倍和千倍稀释。那么，实际加样量应该是0.1ml×3管,0.01ml×3管，0.001ml×3管。因此，表内数字应相应增加10倍。例如(P18)阳性管数3-3-2，MPN=110000阳性管数3-3-3，MPN≥240000※样品作十倍、百倍和千倍稀释，实验结果的MPN数应增加10倍。大肠菌群最可能数（MPN）检索表P18阳性管数MPN100ml95%可信限1ml×30.1ml×30.01ml×3下限上限32093015038003211500300440032221003504700323290033024003601300033146007102400033211000150048000333≥24000注1：本表采用3个稀释度1ml、0.1ml、0.01ml，每稀释度3管。注2：表内所列检样量如改用10ml、1ml、0.1ml时，表内数字应相应降低10倍；如改用0.1ml、0.01ml和0.001ml时，则表内数字应相应增加10倍。其余可类推。结果报告微量乳糖发酵管产酸产气（G－无芽胞杆菌）→大肠菌群阳性。伊红美蓝平板有典型菌落（G－无芽胞杆菌）→粪大肠菌群阳性。根据证实为大肠菌群或粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100ml(g)大肠菌群或粪大肠菌群的MPN值。※我国生活饮用水卫生标准中规定，每毫升水中细菌总数不得超过100个；在100ml水中总大肠菌群不得检出；粪大肠菌群不得检出。※如果第一管检样量改用10ml，培养基加多少？待测样品225ml生理盐水10ml乳糖胆盐发酵管25ml1ml1ml稀释倍数：10-110－210－31ml↓3支1ml↓3支1ml↓3支9ml生理盐水稀释度及菌落计数报告（模板，仅供参考）组号稀释液及菌落数两稀释液之比菌落总数cfu/ml报告方式cfu/ml10－110－210－310－41井水148193214802奶茶多不可计多不可计多不可计－估计?3井水131175113104豆浆多不可计868－86006奶茶340－307井水192244119208奶茶2388－2309井水16017113160010豆浆92101－920注：井水万倍稀释，奶茶、豆浆千倍稀释。乳糖胆盐发酵管结果（模板，仅供参考）组号接种量及发酵结果空白对照0.1ml0.01ml0.001ml0.0001ml1井水⊕⊕⊕⊕⊕⊕⊕⊕-⊕---2奶茶⊕⊕⊕⊕⊕⊕-3井水⊕⊕⊕⊕⊕⊕⊕⊕-⊕---4豆浆----------6奶茶⊕⊕⊕⊕⊕⊕-7井水⊕⊕⊕⊕⊕⊕⊕------8奶茶⊕⊕⊕⊕⊕⊕-9井水⊕⊕⊕⊕⊕⊕⊕⊕-⊕---10豆浆----------注：井水万倍稀释，奶茶、豆浆千倍稀释。大肠菌群最可能数（模板，仅供参考）组号阳性管数MPN95%可信限0.1ml×30.01ml×30.001ml0.0001ml100ml下限上限13321150000300004400002321-1500030004400033321150000300004400004000-＜3006321-15000300044000733104300070002100008321-15000300044000933211500003000044000010000-＜300注：井水万倍稀释，奶茶、豆浆千倍稀释。乳糖胆盐发酵管结果组号接种量及发酵结果空白对照0.1ml0.01ml0.001ml0.0001ml1-2-3-4-5-6-7-8-9-10-大肠菌群最可能数组号阳性管数MPN95%可信限0.1ml×30.01ml×30.001ml0.0001ml100ml下限上限1234678910菌落总数的食品卫生学意义反应食品被细菌污染的程度预测食品耐放程度和时间估测食品腐败状况实际上是该实验条件下能生长繁殖的致病菌、非致病菌、酵母菌和霉菌等杂菌的总数实验结果比实际活菌数低大肠菌群的食品卫生学意义作为粪便污染食品的指示菌，MPN值愈高说明食品受粪便污染程度愈高。作为肠道致病菌污染食品的指示菌，MPN值越高说明肠道致病菌存在的可能性越大，但两者之间并不总是呈平行关系。要求食品中大肠菌群完全不存在是不可能的，重要的是其污染程度、是否超过国家的限量标准。部分食品微生物限量标准食品种类菌落总数大肠菌群致病菌霉菌（cfu/ml）（个/100ml）（cfu/ml）饮用纯净水≤20≤3不得检出不得检出碳酸饮料≤100≤6不得检出-熟啤酒≤50≤3--含乳饮料≤10000≤40不得检出-酸牛乳-≤90不得检出-微生物与食物中毒概念：指摄入了含有生物性、化学性有害物质的食品或把有毒有害物质当作食品摄入后出现得非传染性的急性、亚急性疾病。特点：潜伏期短，来势急剧，短时多人同时发病；临床表现大致相同；与吃某种有毒食品有关；发病率高，人与人之间并不传染。分类：微生物性（细菌性、真菌性），化学性，动、植物性，以细菌性最常见。细菌性食物中毒概念：由于食入被病原菌或其毒素污染的食物后所引起的以急性肠胃炎为主的疾病。分类：感染型、毒素型、不定型。病原菌常见食品潜伏期病程症状沙门氏菌肉乳蛋6~8h3~7d恶心呕吐腹痛发热冷汗头痛副溶血性弧菌水产品腌制品8~24h1~3d恶心呕吐腹痛腹泻蜡样芽孢杆菌米饭肉乳淀粉类30~60min1d恶心呕吐腹痛腹泻产气克雷白氏菌ETECEIECEHEC产气克雷白氏菌O157：H7大肠杆菌是人和温血动物肠道内普遍存在的细菌，是粪便中的主要菌种。一般生活在人大肠中并不致病，但它侵入人体一些部位时，可引起感染。大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。一般认为可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。总大肠菌群系指一群在37℃培养24小时能发酵乳酸、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。耐热大肠菌群即粪大肠菌群，作为一种卫生指标菌，耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生物，因此耐热大肠菌群的存在表明可能受到了粪便污染，可能存在大肠杆菌。但是，耐热大肠菌群的存在并不代表对人有什么直接的危害。致病性大肠杆菌能引起食物中毒。致病性菌株能侵入肠粘膜上皮细胞，具有痢疾杆菌样致病力。肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠毒素性大肠杆菌（ETEC）和肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）等。O157:H7（EHEC)肠出血性大肠杆菌，感染性腹泻是近年来新发现的危害严重的肠道传染病，已逐渐成为威胁人群健康的重要公共卫生问题。大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌的从属关系常用器材摆放顺序：电源插座→试管架→酒精灯→污物盘。试管架上器材：靠近插座一侧第1列放置接种针,第2列放置接种环，另一侧中间两行放置油性笔和打火机。※器材使用后，必须放回原处，依次摆整齐。实验室器材整齐有序