化学发光免疫检测

1化学发光免疫检测学习目标1.化学发光检测的分类及原理2.了解常见进口、国产全自动化学发光仪检测原理酶促化学发光01辣根过氧化物酶（HRP）碱性磷酸酶（ALP）吖啶酯发光异鲁米诺发光电化学发光直接化学发光02化学发光免疫检测分类1.酶促化学发光HRP辣根过氧化物酶常用的底物为鲁米诺或其衍生物碱性磷酸酶常用的底物为AMPPD和4-MUPALP酶促反应的发光底物是指经酶的降解作用而发出光,常用的酶HRP和ALP鲁米诺在碱性缓冲液中被HRP催化发生氧化反应鲁米诺H2O2/OH—HRP+N2+H2O+光1.酶促化学发光AMPPD在碱性条件下，被ALP酶解生成相当稳定的AMP-D阴离子，其有2～30min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续性光，在15min时其强度达到高峰，15～60min内光强度保持相对稳定光ALP/OH—HPO42—OOOCH3O-AMPPD1.酶促化学发光利用酶对发光底物催化作用而直接发光，通过光强度的测定而直接进行定量。1.酶促化学发光反应原理图1.酶促化学发光•特点：激发发光时间长，测试速度慢，因为酶易受环境温度的影响，试剂的稳定性不如直接化学发光好。•代表仪器：美国贝克曼公司的ACCESS2、DXI8001.酶促化学发光代表仪器：迈瑞CL-2000i、安图AutolumoA20002.直接化学发光不需催化剂，只需改变溶液的pH等条件就能发光的物质反应迅速1背景低2信比高3•吖啶酯在含H2O2的强酸、强碱激发底物的作用下，快速发出可见，特点•发光过程在5秒内完成，激发发光程序简单，测试速度快，但发光标记物吖啶酯在缓冲液中不稳定，易水解，影响试剂稳定性。吖啶酯+CO2+光NCH3COORHO+2-NCH3COORONCH3COOO吖啶酯化学发光吖啶酯发光代表仪器：拜耳公司的ACS180西门子的ADVIACentaur雅培的ARCHITECT+NaOH+H2O2发光激发底物1激发底物2delay2.5sdelay0.1s异鲁米诺发光原理：发光过程和原理与吖啶酯完全相同，但激发发光速度更快，在3秒内完成整个过程，测试速度最快，而且克服了吖啶酯在缓冲液不稳定、易水解的缺点异鲁米诺发光代表仪器：瑞典索灵公司的LIAISON、新产业MAGLUMI2000/4000•是指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质•特点：①反应在电极进行；②电子供体为：三丙胺（TPA）③化学发光剂：三联毗啶钌三联毗啶钌分子结构图NNNNNNRuOONOO电化学发光电化学发光反应原理底物：三联吡啶钌[Ru(bpy)2+3]、三丙胺(TPA)这一过程可在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，使光信号增强电化学发光代表仪器：罗氏e601、e411进口全自动化学发光仪仪器型号cobas®e601ARCHITECT®i2000SRUnicel®DxI800LIAISONADVIACentaur生产厂家罗氏雅培贝克曼索灵西门子反应原理电化学发光化学发光微粒子微粒子酶促化学发光磁性微粒子化学发光固相磁粉化学发光标记物三联吡啶钌直接发光吖啶酯衍生物直接发光金刚烷AMPPDAKP，酶促发光异鲁米诺衍生物ABEI直接发光吖啶酯,直接发光包被方式链霉亲和素－生物素间接包被磁珠包被常规单克隆Ag/Ab包被磁性微粒子包被技术磁性微粒子包被技术测试速度170T/H200T/H400T/H180T/H240T/H国产全自动化学发光仪企业仪器型号发光机制测试速度测试项目数迈瑞CL-2000iALP+AMPPD240T/H20安图AutolumoA2000HRP200T/H65新产业MAGLUMI4000ABEI+NaOH、H2O2240T/H95迈克IS1200HRP120T/H17威高AutolumiS2000ABEI+NaOH、H2O2220T/H42长光华医EVERESYSA1800吖啶酯180T/H34博奥塞斯Axceed260鲁米诺衍生物180T/H35测试题与讨论1.酶促化学发光是发光底物经的降解作用而发出光,常用的酶有：和。2.雅培ARCHITETi2000采用标记的标记分子，专利的衍生物，具有更高的发光效率以及稳定性。