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温故知新：1、什么是目的基因？2、获取目的基因的常用方法有哪些?3、基因文库类型？4、PCR的中文名称？原理？条件？过程？5、基因工程的核心？其组成有哪些？6、启动子、终止子的作用？7、基因表达载体应具备的条件？三、将目的基因导入受体细胞1转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2常用的受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。3目的基因导入受体细胞的原理：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法（最多）基因枪法花粉管通道法显微注射法（最多、最有效）Ca2＋处理法受体细胞一般是体细胞受精卵一般原核细胞4目的基因导入受体细胞的方法（见非第8页）为什么动物细胞要用受精卵做受体细胞？全能性高，分裂能力强（1）农杆菌转化法①农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。②原理：Ti质粒上的T-DNA（可转移的DNA）可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。三、目的基因导入受体细胞构建基因表达载体转入农杆菌植物细胞导入稳定维持和表达③过程：（2）基因枪法：目的基因导入单子叶植物细胞①操作方法：利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。②钨粉粒子和金粉粒子，粒子的直径一般在0.6～4um。③适用：单子叶植物，但成本较高（3）花粉管通道法：将目的基因导入植物细胞①操作方法：在植物花受粉后，花粉形成花粉管还末愈合前期，剪去柱头，然后，滴入DNA（含目的基因）使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。②特点:十分简便经济。③例：转基因抗虫棉（我国）（4）将目的基因导入动物细胞方法：显微注射法目的基因表达载体提纯取卵（受精卵）显微注射受精卵发育新性状动物（5）将目的基因导入微生物细胞①微生物作受体细胞原因：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少②常用菌：大肠杆菌③最常用方法：Ca2+处理获得感受态细胞（改变细胞壁的通透性）④过程：Ca2+处理细胞感受态细胞感受态细胞吸收DNA分子表达载体与感受态细胞混合从细胞器的功能上分析，若通过基因工程生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？问题3【提示】不可以，糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加工完成的，而内质网和高尔基体存在于真核细胞中，大肠杆菌是原核生物，细胞中不含有这两种细胞器。导入过程完成后，全部受体细胞都能摄入重组DNA分子吗？真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少，且有的会摄入载体-载体，目的基因-目的基因类型目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？不一定，需要进行检测问题4问题5练习采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因的做法正确的是()①将毒素蛋白注射到棉受精卵中②将编码毒素蛋白的DNA序列，注射到棉受精卵中③将编码毒素蛋白的DNA序列，与质粒重组，导入细菌，用该细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养④将编码毒素蛋白的DNA序列，与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精卵A、①②B、②③C、③④D、①④C——检查是否成功分子水平①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因（目的基因能否稳定遗传的关键）②检测目的基因是否转录出了mRNA（检测目的基因是否发挥功能作用的第一步）③检测目的基因是否翻译成蛋白质方法——方法——方法——DNA分子杂交分子杂交抗原-抗体杂交四、目的基因的检测与鉴定转基因生物的DNA探针15N15N14N14N（1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因基因探针：用放射性同位素等标记的含有目的基因的DNA片段方法——DNA分子杂交技术变性变性变性方法——分子杂交技术（2）检测目的基因是否转录出了mRNA探针15N15N转基因生物的mRNA14N14N提取（3）检测目的基因是否翻译成蛋白质方法—抗原-抗体杂交苏云金杆菌Bt毒素蛋白将Bt毒蛋白注射小鼠体内从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体抗体蛋白质出现杂交带脱分化组织培养（4）除上述分子检测外，有时还需进行个体生物学水平的鉴定：如抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。完