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CellCountingKit(CCK-8)使用说明一.制作标准曲线（测定细胞具体数量）：1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞到培养板内。2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每个浓度建议3-6个复孔。3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。）二.细胞活性检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。三.细胞增殖-毒性检测1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时（37℃，5%CO2）。2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。4、向每孔加入10μLCCK-8溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。7、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。*注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。实验结果：《活力计算》细胞活力*(％)=[OD(加药)-OD(空白)]/[OD(0加药)-OD(空白)]×100OD(加药)：具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度OD(空白)：具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度OD(0加药)：具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力储存条件：CCK-8在避光0-5℃的条件下可以存放1年，在-20℃条件下可以贮藏更久。反复解冻和冷冻会增加背景值，干扰实验测定。如需经常使用请将试剂存放在0-5℃的条件下。Abbkine品牌在2012年成立于美国加利福尼亚州，随着亚洲市场的迅猛增长，Abbkine将总部搬迁至中国，转移其生产线和相关技术，由中方资本控股，并整合各方面资源，历史性地开辟了中国生产基地，立足中国，服务全球。结合了Abbkine美国技术和中国制造两方面的巨大优势，致力于提供高品质，买得起的免疫分析试剂、标签及内参抗体、特色二抗、蛋白质纯化产品和其它分子生物学试剂盒，以满足世界各地的大学科研所、医院研究以及生物医学研究机构科学家的研究与分析需求。作为Abbkine中国区域总代理，艾美捷将为客户提供最具性价比的常规免疫学试剂，如各种标签抗体、内参抗体、常规一抗以及全系列二抗，抗体检测底物，蛋白质纯化产品以及相关试剂盒等。同时我们作为多家国际知名品牌的的中国代理或区域代理，艾美捷能为您提供系列的实验室解决方案。