3_唾液淀粉酶活性的观察

1实验三唾液淀粉酶活性的观察动物医学院动物生化教研室动物生物化学实验动物生物化学实验2①掌握酶的催化活性，酶的高效性和特异性②了解各种因素（如温度、pH及一些化学物质）对酶活性的影响③唾液淀粉酶的制备和活性观察一、实验目的3二、实验原理酶是生物体内具有催化功能的生物大分子，也叫生物催化剂。酶活性:酶的催化能力,用催化化学反应的速度表示酶活性的测定方法：1）定底物2）定时间影响酶活性的因素是多方面的，如温度、pH,激活剂和抑制剂等都会影响酶的催化活性。二、实验原理pH值的影响:能使酶活性达到最高时的pH值，称为该酶的最适pH。温度的影响:在一定温度范围内，随着温度的升高，酶促反应速度增加，直至达到最大值。在一定条件下，能使酶活性达到最高的温度即酶的最适温度。激活剂和抑制剂的影响:能增高酶活性的物质即称为酶的激活剂，能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的抑制剂。4本实验以淀粉为底物,淀粉酶作用下得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。用碘液检查酶促淀粉的水解程度，来说明温度、pH及化学物质对酶活力的影响。淀粉酶淀粉酶淀粉——————→糊精—————→麦芽糖+少量葡萄糖加碘后；（兰色）（紫红色、暗褐色或红色等）（棕黄色，碘本身颜色）5二、实验原理影响酶活性的因素1）温度2）pH3）激活剂和抑制剂酶的特性（专一性）还原糖和斑氏（Benedict）试剂的反应原理C6H12O6+2Cu(OH)2C5H11O5.COOH+Cu2O+2H2OOH-加热实验原理1OHOHHHOHHOHCH2OHHCH2OHHH2HOOHOCH2HO1OHOHHHOHHOHCH2OHHO4OHHOHHOHHOHCH2OHHα-D-葡萄糖β-D-果糖蔗糖分子结构（葡萄糖α,β-1,2-果糖苷）麦芽糖分子结构（葡萄糖α-1,4-葡萄糖苷）OH三、试剂及器材1.试剂•（1）0.5%(w/v)淀粉溶液•（2）稀碘溶液•（3）不同pH缓冲液(pH5.0、6.8、8.0)•（4）1%(w/v)NaCl溶液•（5）1%(w/v)CuSO4溶液2.器材•比色板、水浴锅、刻度吸管及滴管7四、操作步骤1.温度对酶活力的影响取3支试管，编号后按下表操作:8试管编号1230.5%淀粉555pH6.8缓冲液0.50.50.5反应条件置冰水浴中置37℃水浴中置沸水浴中稀释唾液111单位：mL在干净的比色板上，于各孔穴中分别滴加2滴碘液。每隔1min从第2支试管中取反应液1滴，与比色板孔穴中的碘液混合，观察颜色的变化。待第2支试管中的反应液与比色板孔穴中的碘液混合后颜色呈棕色时，取出试管，并将在沸水浴中处理的试管用冷水冷却，然后向各试管中滴加碘液1-3滴。摇匀后观察并记录各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，说明温度对酶活性的影响。92.pH值对酶活力的影响取3支试管，按下表编号后进行实验。10四、操作步骤单位：mL试剂1230.5%淀粉222pH5.0缓冲液2——pH6.8缓冲液—2—pH8.0缓冲液——2稀释唾液111摇匀后，将各管置于37℃水浴中处理。（1）每隔1min从pH6.8的试管中取出1滴反应液滴于预先滴加稀碘液的白瓷板上，观察其颜色变化。（2）待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液1-3滴。观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，解释pH对酶活性的影响。113.酶反应的特异性取2支试管，按下表编号后进行实验。12四、操作步骤单位：mL试剂120.5%淀粉2—0.5%蔗糖—2稀释唾液11将各管摇匀后，一起放入37℃水浴中保温10min。取出试管，分别加入斑氏试剂1mL，混匀。将各管置于沸水浴中煮沸2-5min。观察并解释结果。134.激活剂与抑制剂对酶活力的影响取3支试管，按下表编号后进行实验。14四、操作步骤单位：mL试剂1230.5%淀粉333pH6.8缓冲液0.50.50.51%NaCl溶液—1—1%CuSO4溶液——1蒸馏水1——稀释唾液111注意事项按讲义要求操作酶同时放，唾液、淀粉摇匀纱布不要扔在水池值日：5-6组