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1课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、筛选菌株1、筛选微生物的原理：人为提供有利于生长的条件（包括、温度、等），同时或其他种类微生物生长的培养基。2、选择培养基：允许的微生物生长，同时或其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。3、欲得到分离分解尿素的细菌可以用以唯一氮源的培养基进行选择培养，因为该细菌可以产生，将尿素分解成，使培养基的PH，所以若作进一步的鉴定可向该培养基长加入。二、统计菌落数目1、微生物活菌计数的常用方法是，其原理是：当样品的稀释度足够时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活菌。利用公式：进行计算。（C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积，M代表稀释倍数）2、为了确保结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数，每个稀释度下至少涂布个平板，取菌落数的，且这三个平板的菌落数差异过大，3、用这种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目，因为，因此统计结果一般用数而不是活菌数来表示。4、也是测定微生物数量的常用方法。三、设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。四、实验设计1、土壤取样：细菌适宜在酸碱度接近的土壤中生长，绝大多数细菌在距地表约的土壤层。2、样品稀释：测定土壤中细菌的数量，一般选用、、的稀释液进行平板培养；测定放线菌的数量，一般选用、、的稀释液进行平板培养；测定真菌的数量，一般选用、、的稀释液进行平板培养。3、微生物的培养与观察：细菌一般在的温度下培养2；放线菌一般在的温度下培养；真菌一般在的温度下培养。4、菌落的特征包括菌落的、、和等方面。五、操作提示无菌操作：取土样的小铲子和盛土样的信封使用前都需要；应在取土样；在土壤稀释过程中，每一步都要在操作。练习题1.分离土壤中分解尿素的细菌,对培养基的要求是()。①加尿素②不加尿素③加琼脂④不加琼脂⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦加硝酸盐⑧不加硝酸盐A.①③⑤⑦B.②④⑥⑧C.①③⑤⑧D.①④⑥⑦2.下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是A．3号试管中的菌落稀释倍数为103倍B．4号中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰为5号的10倍C．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×109个D．该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高3.可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂4.在农田土壤的表层自生固氮菌较多，用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是①加抗生素②不加抗生素③加氮素④不加氮素⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖⑦37℃恒温箱中培养⑧28～30℃温度下培养A．①③⑤⑦B．②④⑥⑧C．②④⑤⑧D．①④⑥⑦35.从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，下列实验操作不正确的A．将土壤用无菌水稀释，制备10－5～10－3土壤稀释液B．将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上C．用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌D．从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株6.关于对分解尿素的细菌进行分离、计数的实验叙述，错误的是A．统计菌落数目时，当样品的稀释度足够高时，培养基表面的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。B．统计菌落数目时，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少活菌。C．设置对照的目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的干扰D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，通过检测培养基的pH的变化，还不能准确鉴定培养基中的细菌就是能够分解尿素的那种。7.下列关于从土壤中分离细菌的操作步骤中，正确的是()①土壤取样②称取10g土壤取出加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中③吸取0.1mL进行平板涂布④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度A．①→②→③→④B．①→③→②→④C．①→②→④→③D．①→④→②→③8.下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是()A．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水B．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、琼脂、水C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水D．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水；9.幽门螺杆菌简称Hp，主要寄生在胃幽门、胃窦等附近的黏膜上，是人类至21世纪初唯一的已知胃部细菌．Hp可产生高活性的尿素酶．（1）制备幽门螺杆菌培养基时，需将培养基的pH调至性．培养皿进行灭菌的常用方法是．倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是．（2）图①表示的是用法接种培养后得到的结果．图②是在纯化过程中通过法分离培养的结果，在培养基上接种时接种环需通过灼烧灭菌，完成图中划线操作，至少需要灼烧接种环次．（3）为检测某人体内是否感染了Hp，可让其服用14C标记的，定时收集呼出的4气体，通过分析呼气中14C标记的CO2的含量即可判断．该检测方法和卡尔文研究光合作用的方法一样可称为法．10.尿素是一种重要的农业氮肥。但是，尿素[CO（NH2）2]并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。下图为从土壤中分离出能够分解尿素的细菌的主要步骤。（1）本实验所需培养基按功能划分，属于培养基，唯一氮源应为。（2）在配制该培养基时，依次进行如下操作：配制培养液、、分装、包扎、、搁置斜面。（3）使用法可以获得如上图⑤中的单个菌落，用该方法统计菌落数目时，最好选择菌落数在间的平板进行计数。在某一稀释度下平板上的平均菌落数为50个，所用稀释液的体积为0.2ml，稀释倍数为105时，则每毫升样品中的菌落数为。（4）采用固体平板培养细菌时，要将培养皿（正放或倒置），其目的是。