高考生物-分解尿素细菌的分离与计数导学案

专题二课题2土壤中分解尿素细菌的分离与计数【学习目标】：1、明确培养基对微生物进行选择的原理。2、学会统计微生物数量的方法3、能进行实验设计与操作，并对实验结果进行分析与评价4、热爱自然，珍爱生命，激情投入，体会微生物分离计数过程的严谨性、科学性。【使用说明及学法指导】1.先通读教材，理出头绪，划出重点。明确微生物分离与计数的实验流程、对照设计和培养过程中的操作技术和无菌要求。完成时间40分钟。2.本节重难点：学会统计微生物数量的方法，能进行实验设计与操作，并对实验结果进行分析与评价。进一步形成无菌技术的意识。预习案一、尿素尿素不能吸收，只有当土壤中的细菌将尿素分解成，才被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成。二、筛选菌株的思路1、自然界中目的菌株的筛选1）依据：根据它对的要求，到相应的环境中去寻找。2）实例：PCR技术过程中用到的耐高温的，就是从中提取出来的。2、实验室中目的菌株的筛选1）原理：人为提供有利于生长的条件（包括等），同时或的生长。2方法：利用分离。○1选择培养基：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时的培养基，称为选择培养基。○2选择分解尿素的细菌的培养基的特点：是唯一氮源，按物理性质归类为培养基。三、分离与计数1、筛选菌株的原理微生物的选择培养：在中，把作为培养基的唯一，原则上只有能够利用尿素的微生物才能生长。2．统计菌落数目方法：①。②。理论依据：用稀释涂布平板法进行活菌计数，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的。通过统计平板上的，就能推测出样品中大约含有多少个活菌。平板计数公式：MVCC：代表某一稀释度下平板上生长的。V：代表涂布平板时所用的稀释液的。M：代表稀释。四、分离与计数的实验流程土壤取样→样品稀释→取样涂布→微生物的培养→观察并记录结果→细菌计数1、土壤取样1）土壤取样的原因：土壤有“”之称，同其它生物环境相比，土壤中的微生物，数量，种类。2）土壤要求：富含，PH接近且潮湿。3）取样部位：距地表约的土壤层。2、样品稀释1）稀释原因：样品的直接影响平板上生长的。2）稀释标准：选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得菌落数在之间，便于计数。3）稀释倍数：测定土壤中细菌的数量，一般选用倍的稀释液进行平板培养。测定放线菌的数量，一般选用倍稀释。测定真菌的数量，一般选用倍稀释。3、微生物的培养与观察1）培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养和培养。2）观察：每隔小时统计一次数目，选取菌落数目时的记录作为结果，4、细菌的计数当菌落数目稳定时，取同一下的3个进行计数，求出，并根据所对应的计算出样品中细菌的数目。5、对菌种的进一步鉴定在以尿素为唯一氮源的培养基中加入，培养某种细菌后，如果PH，指示剂，则可鉴定该菌种能够分解尿素。此法原理是五、操作提示1、无菌操作：取土样的用具在使用前都需要。应在旁称取土壤，并在附近将称好的土样倒入中，塞好棉塞。在土壤溶液的过程中，每一步都要在操作。2、做好标记：3、制定计划：我的疑惑：探究案一、请结合P24的三则资料设计表格，比较与几种微生物有关的数据。二、土壤中分解尿素细菌的分离与计数实验中如何鉴定分离到的细菌是分解尿素的细菌呢，又如何统计菌落数目，计算样品中的细菌数量呢？1.2.3.三、设置对照：1.如何判断培养物中是否有杂菌污染2.如何判断选择培养基是否筛选出菌落？3.课本P23上面的问题四、你认为如何进行无菌操作？【针对训练】1.用稀释涂布平板法测定土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()A．涂布了2个平板，统计的菌落数是230B．涂布了2个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C．涂布了3个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D．涂布了3个平板，统计的菌落数分别是210、240和2502.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是A．在液体培养基上进行B．至少接种一种细菌C．接种一个细菌D．及时补充消耗的营养物质3．在微生物群体生长规律的测定中，不可能发生的是A.繁殖B.生存斗争C.种间斗争D.种内斗争4.高考题赏析（2008广东高考题）苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。请回答下列问题：1）②中培养目的菌株的选择培养基中应加入作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基（A．影响；B．不影响）细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用法。（2）④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于；使用法可以在⑥上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养？（3）如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小（苯酚显酸性）？（4）实验过程中如何防止其它微生物的污染？